生物化学与分子生物学实验技术教程PDF电子书下载

第一章 生物化学与分子生物学中的定量分析 1

第一节 滴定分析法 1

一、基本原理 1

二、标准溶液 3

三、滴定分析的计算 5

四、减小滴定误差的方法 6

第二节 紫外可见分光光度法 7

一、基本原理 7

二、分光光度计的主要部件 9

三、分光光度法的定性和定量 10

四、减小测定误差的方法 11

第三节 荧光分析法 12

一、基本原理 12

二、荧光仪的主要部件 13

三、荧光分析法的定性和定量 13

四、减小测量误差的方法 15

第四节 酶活力及动力学数据的测定 15

一、酶活力的测定 15

二、Km和Vmax的测定 18

三、其他动力学数据的测定 19

实验1-1 粗脂肪的提取和定量测定 20

实验1-2 碘价的测定（Hanus法） 21

实验1-3 皂化价的测定 23

实验1-4 酸价的测定 24

实验1-5 脂肪乙酰价的测定 24

实验1-6 蛋白质的测定（凯氏定氮法） 25

实验1-7 2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的含量 26

实验1-8 碘量法测定维生素C的含量 28

实验1-9 血糖定量测定（GOD-PAP法） 29

实验1-10 蒽酮比色定糖法 30

实验1-11 3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量 30

实验1-12 血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法） 32

实验1-13 血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法） 32

实验1-14 双缩脲法测定蛋白质含量 33

实验1-15 Folin试剂法（Lowry法）测定蛋白质含量 34

实验1-16 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量 35

实验1-17 紫外吸收法测定蛋白质含量 36

实验1-18 紫外吸收法测定核酸含量 37

实验1-19 二苯胺显色法测定DNA含量 38

实验1-20 地衣酚显色法测定RNA含量 39

实验1-21 定磷法测定核酸含量 40

实验1-22 荧光法测定维生素B2含量 42

实验1-23 血清丙氨酸氨基移换酶（ALT）的测定 43

实验1-24 酸性磷酸酯酶的测定 44

实验1-25 碱性磷酸酶的反应动力学性质 45

第二章 生物大分子的提取、沉淀和离心分离 47

第一节 生物大分子的提取 47

一、材料的选择与处理 47

二、确定测定方法 48

三、细胞的破碎 48

四、抽提 50

第二节 沉淀分离技术 52

一、蛋白质的沉淀分离 52

二、核酸的提取与沉淀分离 55

三、多糖和小分子活性成分的提取和分离 57

第三节 膜分离技术 69

一、膜分离技术的分类 69

二、膜的分类和性质 71

三、膜的特性 71

四、透析 73

五、微滤、超滤和反渗透 74

第四节 提取物的浓缩、结晶和干燥 76

一、浓缩 76

二、结晶 77

三、干燥 79

第五节 离心分离技术 80

一、离心机的种类与用途 80

二、离心分离方法的选择 81

三、离心条件的确定 82

四、离心操作的注意事项 84

实验2-1香菇多糖的制备 85

实验2-2卵磷脂的制备 87

实验2-3大蒜细胞SOD的提取与分离 88

实验2-4菜花（花椰菜）中核酸的分离和鉴定 90

实验2-5酵母RNA的提取与分离 91

实验2-6从肝脏中提取DNA 92

实验2-7大肠杆菌细胞膜的分离 93

实验2-8大鼠肝细胞核的分离 94

第三章 层析技术 95

第一节 吸附层析 95

一、吸附柱层析 96

二、聚酰胺薄膜层析 100

第二节 分配层析 100

一、概述 100

二、纸层析 101

第三节 凝胶层析 104

一、基本原理 105

二、凝胶的选择 106

三、操作 107

第四节 离子交换层析 108

一、基本原理 108

二、离子交换剂 109

三、操作 112

第五节 亲和层析 114

一、配基与偶联凝胶的选择与处理 114

二、亲和层析的操作条件 116

第六节 薄层层析 117

一、支持剂的选择与处理 117

二、薄层板的制作 118

三、层析方法 118

第七节 气相色谱 119

一、基本原理 119

二、气相色谱的气路系统 120

三、色谱柱 121

四、检测器 122

五、定性和定量方法 123

第八节 高效液相色谱 124

一、概述 124

二、HPLC的特点 124

三、HPLC的分类 125

四、HPLC的仪器构成 126

五、定性定量方法 128

实验3-1 氨基酸的纸层析 128

实验3-2 微晶纤维素薄板层析法分离氨基酸 129

实验3-3 核苷酸的离子交换层析 131

实验3-4 DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜层析 132

实验3-5 凝胶层析测定蛋白质的Mr 133

实验3-6 胰蛋白酶的亲和层析 135

实验3-7 醇酯成分的气相层析 136

实验3-8 HPLC法测定生物类黄酮含量 138

实验3-9 HPLC法测定维生素A含量 138

第四章 电泳技术 140

第一节 基本原理 140

一、泳动度 140

二、影响泳动度的因素 141

第二节 乙酸纤维素薄膜电泳 142

第三节 琼脂糖凝胶电泳 143

一、琼脂糖凝胶的特点 143

二、DNA的琼脂糖凝胶电泳 143

三、印迹转移电泳 145

四、交变脉冲电场凝胶电泳 145

第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 146

一、聚丙烯酰胺凝胶的特点 146

二、凝胶聚合的原理及有关特性 147

三、PAGE原理 149

四、SDS-PAGE原理 151

五、聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳原理 152

六、聚丙烯酰胺凝胶双向电泳原理 155

第五节 高效毛细管电泳 156

一、基本原理 156

二、实验方法 157

三、分离类型及应用 159

第六节 免疫分析技术 160

一、抗体的性质和制备 160

二、抗原抗体反应 165

实验4-1 血清蛋白的乙酸纤维素薄膜电泳 170

实验4-2 垂直板PAGE分离血清蛋白 172

实验4-3 SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量 173

实验4-4 等电聚焦电泳测定血清蛋白质等电点 175

实验4-5 DNA的琼脂糖凝胶电泳 177

实验4-6 PAGE分离RNA 178

实验4-7 对流免疫电泳法测定胎儿甲种球蛋白 179

实验4-8 火箭免疫电泳法测定抗原含量 181

第五章 分子生物学基本技术 182

第一节 DNA的体外合成 182

一、DNA的化学合成 182

二、聚合酶链反应技术 183

第二节 核酸的分子杂交 188

一、探针的种类与选择 188

二、标记物的选择 189

三、探针的放射性同位素标记 193

四、探针的非放射性标记 193

五、膜上印迹杂交的条件选择 194

六、杂交信号的检测 197

七、DNA芯片技术及应用 198

第三节 基因克隆 199

一、目的基因的来源 199

二、常用的克隆载体 200

三、DNA分子的体外连接 202

四、重组子导入受体细胞 204

五、重组子的筛选 204

六、基因组文库的构建 206

七、cDNA文库的构建 208

第四节 基因表达 210

一、原核生物的表达载体 210

二、用于原核细胞表达的外源基因 212

三、提高表达水平的措施 212

四、外源基因在酵母细胞中的表达 216

五、外源基因在昆虫杆状病毒中的表达 217

六、外源基因在哺乳动物细胞中的表达 219

第五节 转基因植物和转基因动物 222

一、转基因植物 222

二、转基因动物 224

第六节 基因组学的研究方法 226

一、核酸的序列测定 227

二、结构基因组学 231

三、功能基因组学 236

第七节 转录调控研究技术 242

一、基因功能状态的研究方法 242

二、顺式作用元件与反式作用因子的分析方法 244

实验5-1 植物基因组DNA的提取 246

实验5-2 动物基因组DNA的提取 249

实验5-3 细菌基因组DNA的提取 250

实验5-4 质粒DNA的提取 251

实验5-5 大肠杆菌的转化 253

实验5-6 质粒DNA的酶切及电泳鉴定 254

实验5-7 质粒DNA的分子杂交 255

实验5-8 使用光敏生物素探针的Southern杂交 258

实验5-9 DNA重组 259

实验5-10 聚合酶链式反应（PCR） 260

实验5-11 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 261

第六章 综合性实验和设计性实验 263

实验6-1 溶菌酶的分离纯化 264

实验6-2 超氧化物歧化酶的分离纯化和同工酶分析 268

实验6-3 利用PCR差异显示mRNA 272

实验6-4 cDNA文库的构建 276

实验6-5 蛋白质印迹分析 283

实验6-6 蛋白质的双向凝胶电泳 286

附录一 实验数据的处理 288

附录二 调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃） 295

附录三 换算转速、相对离心力和转子半径的列线图 296

附录四 常见生化物质电泳后的染色方法 297

附录五 常用缓冲液的配制 300

参考书目 306