医学生物化学与分子生物学实验PDF电子书下载

第一章　分光光度技术 1

第一节　基本原理 1

一、光的基本知识 1

二、朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律 2

三、吸光系数 3

第二节　分光光度计的基本结构和使用 3

一、分光光度计的基本结构 3

二、分光光度计的基本类型 5

三、常见分光光度计的使用 5

四、使用分光光度计的注意事项 6

第三节　分光光度技术的应用 6

一、定量分析 6

二、定性分析 7

第四节　分光光度法的误差 8

一、物理性原因产生的误差 8

二、化学性原因引起的误差 8

第二章　色谱技术 9

第一节　概述 9

一、色谱法的概念 9

二、色谱技术的特点和优点 9

三、色谱法的分类 10

第二节　常用的色谱方法 11

一、吸附色谱（adsorption chromatography） 11

二、分配色谱（partition chromatography） 12

三、凝胶色谱（gel chromatography） 12

四、离子交换色谱（ion exchange chromatography,IEC） 16

五、亲和色谱（affinity chromatography） 18

六、高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC） 18

第三章　电泳技术 19

第一节　基本原理 19

一、蛋白质电荷的来源 19

二、迁移率（mobility） 19

三、影响电泳速度的因素 20

第二节　醋酸纤维薄膜电泳 22

第三节　琼脂糖凝胶电泳 22

一、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系 22

二、核酸构象与琼脂糖凝胶电泳分离的关系 23

三、琼脂糖凝胶电泳基本方法简介 23

第四节　聚丙烯酰胺凝胶电泳 24

一、聚丙烯酰胺凝胶聚合原理及相关特性 25

二、聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 26

三、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 28

四、聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳原理 29

五、聚丙烯酰胺凝胶双向电泳原理 29

第五节　染色方法 30

一、蛋白质染色 30

二、脂蛋白染色 31

三、核酸的染色 31

第四章　离心技术 33

第一节　离心技术的基本原理 33

一、离心力（centrifugal force） 33

二、相对离心力（relative centrifugal force） 33

三、重力及浮力 34

四、介质的摩擦阻力 34

五、沉降速度 34

六、沉降系数（sedimentation coefficient） 35

七、沉降时间（sedimentation time） 35

第二节　离心机的分类 35

第三节　离心分离的种类 36

一、差速离心法 36

二、密度梯度离心法 36

第四节　离心操作注意事项 37

第五章　蛋白质组技术 39

第一节　蛋白质组学 39

第二节　蛋白质组分离技术 39

一、双向凝胶电泳的特点 40

二、双向凝胶电泳的基本步骤 40

第三节　蛋白质组分析技术 41

一、质谱技术的发展及各种类型的质谱仪 41

二、质谱技术在蛋白质组研究中的作用 42

三、蛋白质组数据库的建立 43

四、蛋白质组研究的前景 43

第六章 生物大分子制备技术 44

第一节　预处理和细胞的分离 44

一、选择材料及预处理 44

二、细胞的分离 45

第二节　细胞的破碎及细胞器的分离 45

一、细胞的破碎 45

二、细胞器的分离 47

第三节　生物大分子的提取、分离纯化和定量 47

一、蛋白质的提取 47

二、蛋白质的分离纯化 48

三、核酸的分离纯化 50

四、蛋白质的定量 51

五、DNA、RNA的定量 53

第四节　浓缩、干燥及保存 53

一、蛋白质的浓缩 53

二、核酸的浓缩 54

三、干燥 56

四、保存 56

第七章　重组DNA技术 57

第一节 目的基因的获取 57

一、直接从染色体中分离 58

二、化学合成法 58

三、RT-PCR 58

四、聚合酶链反应（PCR） 58

第二节　载体的选择 58

一、克隆载体（clone vector） 58

二、表达载体（expression vector） 58

第三节　分子克隆常用的工具酶 59

第四节 限制性内切酶消化DNA及片段回收 60

一、限制性内切酶的选择和运用 60

二、限制性内切酶的酶切 60

三、DNA片段的回收 61

第五节 目的基因与载体片段连接 61

第六节　重组DNA导入宿主细胞 62

一、大肠杆菌的转化 62

二、电脉冲穿孔法转化大肠杆菌 63

第七节　含重组质粒的宿主菌落的筛选与鉴定 63

一、利用宿主细胞遗传表型的改变进行筛选 63

二、分析重组子分子结构特性进行鉴定 64

第八章　核酸分子杂交技术 66

第一节　核酸分子杂交的基本理论 66

一、DNA变性 66

二、DNA复性 66

三、核酸分子杂交 67

第二节　核酸探针及其标记 67

一、核酸探针 67

二、探针标记物 67

三、探针的标记方法 68

第三节　核酸分子杂交 69

一、影响杂交的因素 69

二、固相杂交法 70

第九章　聚合酶链反应（PCR）技术 73

第一节　PCR基本原理和影响因素 73

一、基本原理 73

二、PCR反应体系 73

三、PCR反应步骤简介 75

四、PCR引物设计原则 76

五、PCR的影响因素 76

六、PCR扩增过程中的一些疑难问题与解决方法 79

第二节　逆转录PCR技术 80

一、RT-PCR反应基本步骤 81

二、RT-PCR注意事项 82

第三节　PCR技术进展 83

一、定量PCR 83

二、巢式PCR 87

第十章　常用生化实验及临床生化检验 88

实验一　血糖的测定 88

实验二　蛋白质的定量测定 90

实验三　血红蛋白与核黄素的凝胶柱色谱分离 92

实验四　氨基酸的离子交换柱色谱分离 94

实验五　血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 95

实验六　血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳 97

实验七　过氧化氢酶Km值的测定 99

实验八　酶的竞争性抑制作用（琥珀酸脱氢酶） 102

实验九　四氯化碳对小鼠肝脏的损伤 103

实验十 血清总胆固醇的测定 106

实验十一 回收实验（尿素氮的回收） 107

实验十二　血清白蛋白、γ-球蛋白的分离纯化及鉴定 108

实验十三　碱性磷酸酶的分离纯化 112

实验十四　双向电泳 115

第十一章 分子生物学实验——重组DNA表达载体的构建 119

实验一 质粒DNA的大量制备与纯化 119

实验二　DNA的纯度、浓度的测定 122

实验三 目的基因的获取 124

实验四　DNA的限制性内切酶消化 128

实验五　从琼脂糖凝胶中分离回收DNA片段 130

实验六　DNA片段的连接反应 131

实验七　用重组质粒DNA转化大肠杆菌 132

实验八　含重组质粒的细菌菌落的鉴定 133

实验九　Southern印迹法 135

实验十　斑点杂交——地高辛标记核酸探针的斑点杂交（Dot blot） 138

实验须知 141

实验报告的书写 141

参考文献 142