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第1章 基因定位 1

单元1.1连锁研究所需临床和流行病学资料的收集 3

单元1.2家系选择和信息含量 11

单元1.3单精子分型 17

单元1.4采用LINKAGE软件包进行连锁分析 25

单元1.5非模式依赖的遗传连锁检验 50

单元1.6利用DNA池技术进行纯合子定位 65

单元1.7疾病关联和基于家系的检验 69

单元1.8基因-基因相互作用的分析 81

第2章 基因分型 88

单元2.1基于PCR的基因分型方法 88

单元2.2基于连接分析的分型方法 99

单元2.3自动荧光的分型方法 103

单元2.4用微阵列的方法分型单核苷酸多态 109

单元2.5使用TAQMAN分析法的高通量基因分型 119

单元2.6使用引物延伸荧光偏振探测法的高通量基因分型 121

第3章 体细胞杂交简介 127

单元3.1体细胞杂交的构建 127

第4章 细胞遗传学 139

单元4.1经培养外周血细胞的染色体制备 140

单元4.2小鼠细胞染色体制备及核型分析 144

单元4.3染色体显带技术 151

单元4.4中期染色体和间期核的原位杂交 159

单元4.5高分辨率FISH分析 167

单元4.6多色荧光原位杂交（FISH）方法分析人类完全基因组 176

单元4.7应用形态学抗体染色体技术确定细胞的表型与基因型 181

单元4.8比较基因组杂交 196

第5章 大片段的克隆和分析 202

单元5.1大范围限制性图谱：脉冲电场电泳 203

单元5.2用杂交的方法筛选大片段插入的文库 209

单元5.3胚胎将大片段插入DNA导入哺乳动物细胞和胚胎 219

单元5.4 BAC／PAC文库的构建 232

第6章 确定基因组DNA候选基因 246

单元6.1基因鉴定：方法和注意事项 246

单元6.2序列数据库：整体信息的检索和数据的提交 257

单元6.3使用BLAST程序家族查找序列相似性 265

单元6.4人类基因组的获取 280

单元6.5使用Entrez来检索NCBI数据库 303

第7章 搜寻候选基因突变的方法 316

单元7.1患病个体的序列扩增 317

单元7.2通过单链构象多态性分析检测基因突变 321

单元7.3毛细管电泳法分析单链构象多态性 323

单元7.4应用基于荧光的自动化测序进行杂合体检测 328

单元7.5用循环测序法检测突变 333

单元7.6人类突变数据库 337

第8章 临床细胞遗传学 345

单元8.1绒毛标本分裂中期染色体涂片制备 346

单元8.2羊水标本的制备、培养和分析 349

单元8.3用于染色体分析的妊娠产物及其他固体组织来源样本的培养及制备 357

单元8.4姐妹染色单体互换（SCE）分析 361

单元8.5利用石蜡包埋组织鉴定染色体非整倍体 365

单元8.6羊水细胞用于间期核FISH分析的制备方法 369

单元8.7范可尼贫血（先天性骨髓发育不全）的诊断——二氧桥丁烷（双环氧丁烷）检测 374

第9章 临床分子遗传学 380

单元9.1运用多重PCR检测营养不良基因缺失 381

单元9.2利用等位基因特异性寡聚核苷酸（Allelespecific oligonucleotide，ASO）同时检测多点突变 391

单元9.3脆性X综合征的分子分析 394

单元9.4肌强直性肌营养不良（myotonic dystrophin， DM）的三核苷酸重复的分析 399

单元9.5非随机X染色体失活的检测 404

单元9.6父子关系的分子分析 406

单元9.7点突变不易扩增突变系统（简称 ARMS）分析 415

单元9.8线粒体DNA突变缺失氧化磷酸化疾病的分子分析 421

单元9.9单细胞DNA和FISH分析应用于植入前基因诊断 434

单元9.10蛋白质截短试验 447

单元9.11载脂蛋白E（apolipoprotein E， APOE）基因型分析：不同方法间比较 456

第10章 癌基因组学 462

单元10.1收获分裂中期的细胞对恶性肿瘤患者的血液标本进行细胞遗传学分析 463

单元10.2实体瘤培养分裂中期细胞的收获和细胞遗传学分析 467

单元10.3分子生物学方法分析白血病和非霍奇金氏淋巴瘤的DNA重组 470

单元10.4肿瘤中基因扩增的分子分析 483

单元10.5甲基化特异性PCR 490

第11章 转录谱 494

单元11.1用于表达监测的寡核苷酸分析 494

单元11.2用cDNA芯片分析人类基因表达 504

单元11.3表达数据分析概述 514

第12章 基因治疗载体 519

单元12.1基因转移载体的生物安全性问题 520

单元12.2腺病毒载体 523

单元12.3重组腺相关病毒载体的生产 538

单元12.4反转录病毒载体的制备 546

单元12.5假包膜型反转录病毒载体的制备 555

单元12.6高滴定度慢病毒载体产物 558

单元12.7构建复制缺陷型疱疹单纯病毒载体 564

单元12.8应用辅助病毒缺陷HSV-1扩增载体进行基因传递 579

单元12.9脂质体载体用于直接体内基因转染 587

第13章 基因治疗的转移系统 589

单元13.1动脉的基因转移 590

单元13.2基因传递到肌肉 598

单元13.3脑的基因转移：间接体内法和直接体内法 606

单元13.4人造血干细胞的培养、转导和分析 614

单元13.5呼吸道基因给药 627

单元13.6基因传递到肝脏 641

参考文献 826

附录1 试剂与溶液 644

附录2 有用的信息和数据 718

附录2A 人类重复DNA序列概述 718

附录2B ISCN标准核型模式图 720

附录2C 遗传连锁参考图谱：基于互联网资源的入口 737

附录2D 放射性同位素数据 738

附录2E 离心机和转子 739

附录3 常用技术 744

附录3A 从哺乳动物细胞中提取基因组DNA 744

附录3B DNA的抽提和沉淀 747

附录3C 从固定的石蜡包埋组织切片中制备DNA 749

附录3D 使用分光光度计和荧光分光光度计测定DNA和RNA的含量 751

附录3E DNA酶标记法 754

附录3F 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 757

附录3G Southern杂交法分析DNA 760

附录3H Northern杂交分析RNA 764

附录3Ⅰ 哺乳动物细胞组织培养技术 767

附录3J 通过EB病毒转化建立恒定的细胞系 774

附录3K 核型分析 777

附录4 一些试剂和仪器提供商 779

索引 837