分子生物学实验PDF电子书下载

第1章 分子生物学实验原理与技术概述 1

第2章 染色体DNA和RNA的制备 16

实验2.1 细菌染色体DNA的提取 16

实验2.2 酵母染色体DNA的提取 20

实验2.3 SDS裂解法提取丝状真菌染色体DNA 21

实验2.4 RNA的提取 23

实验2.5 凝胶电泳进行DNA分离纯化 29

实验2.6 核酸纯度、浓度与相对分子质量的测定 35

第3章 载体的制备 41

实验3.1 质粒DNA的提取—碱变性提取法 45

实验3.2 λ噬菌体DNA的提取 49

实验3.3 λDNA去磷酸化臂的制备 52

第4章 重组质粒的构建 55

实验4.1 限制性核酸内切酶的酶切反应 61

实验4.2 酶切DNA片段的CIP处理 64

实验4.3 酶切DNA片段的分离与回收 65

实验4.4 载体与外源DNA的连接反应 67

第5章 重组DNA导入受体细胞 73

实验5.1 感受态细胞的制备及质粒转化 74

实验5.2 λ噬菌体载体与外源DNA片段的连接、体外包装与扩增（基因组文库的构建） 77

第6章 重组子的鉴定和外源基因的表达 81

实验6.1 E.coli转化子的筛选与验证 83

实验6.2 Southern印迹杂交 86

实验6.3 Northern印迹杂交 89

实验6.4 斑点印迹杂交 92

实验6.5 外源基因的诱导表达 93

实验6.6 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组蛋白的表达 96

实验6.7 Western印迹技术检测重组蛋白的表达 101

第7章 在酿酒酵母中克隆表达外源基因 104

实验7.1 酵母染色体DNA的提取 108

实验7.2 木糖还原酶基因的获得 110

实验7.3 重组质粒的构建（酶切连接） 112

实验7.4 酵母质粒的小量提取与插人方向验证 115

实验7.5 酵母菌LiAc完整转化酵母细胞 116

实验7.6 酿酒酵母转化子的验证 118

实验7.7 重组酵母木糖还原酶活性的测定 120

实验7.8 重组酵母菌株发酵实验及发酵产物分析 121

第8章 丝状真菌的转化与转化子的筛选 123

实验8.1 瑞氏木霉原生质体的制备与转化实验 128

实验8.2 瑞氏木霉原生质体电转化实验 132

实验8.3 农杆菌介导的瑞氏木霉转化 134

实验8.4 振荡破壁法快速小量提取瑞氏木霉染色体DNA 136

实验8.5 瑞氏木霉潮霉素抗性转化子的PCR鉴定 138

第9章 PCR技术原理与应用 141

实验9.1 PCR扩增目的片段 151

实验9.2 一步法RT-PCR 155

实验9.3 两步法RT-PCR 158

第10章 工程菌的培养与目标产物的分离 161

实验10.1 重组E.coli诱导表达外源内切β-1，4-葡聚糖酶 163

实验10.2 从E.coli中提取纯化目的重组蛋白 165

附录 168