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第一章 免疫学相关研究 1

1.1 免疫系统的基本功能 5

1.2 免疫应答的种类特点及其理论 7

1.2.1 免疫应答的类型：天然和获得性免疫应答 8

1.2.2 免疫应答反应理论 8

1.3 免疫模式识别理论 9

1.4 可诱导的细胞天然免疫机制 11

1.5 对免疫系统的全面认识 12

1.5.1 对T细胞抗原受体的基因克隆 13

1.5.2 免疫遗传学和MHC限制性的发现 13

1.5.3 细胞因子及其受体 14

1.5.4 免疫受体信号转导的研究 14

1.6 细胞因子的免疫学功能 15

1.6.1 调控免疫细胞在中枢免疫器官的发育与分化 15

1.6.2 调控免疫细胞在外周免疫器官的发育分化和活化功能 16

1.6.3 调控机体的免疫应答 16

1.7 中药免疫调节理论与实践应用 18

1.8 微RNA对免疫的调控作用 21

参考文献 23

第二章 细胞凋亡相关研究 28

2.1 细胞凋亡的发现与发展 28

2.2 细胞凋亡的发生过程与形态学变化 30

2.3 细胞凋亡的生物化学变化 30

2.4 细胞凋亡的过程及其通路 31

2.5 细胞凋亡的caspase效应分子机制 33

2.5.1 caspase活化机制 33

2.5.2 caspase效应机制 34

2.5.3 细胞凋亡的抑制分子 36

2.6 细胞凋亡与免疫学关系 38

2.7 细胞凋亡与临床医学 39

2.8 秀丽新小杆线虫与细胞凋亡研究 40

2.9 中药材对细胞凋亡的作用研究 42

2.10 微RNA对细胞凋亡的调控作用 44

参考文献 45

第三章 中药免疫调节与细胞凋亡的关系 51

3.1 中药免疫调节与细胞凋亡研究进展 51

3.2 中药免疫制剂 56

3.2.1 单方制剂 56

3.2.2 复方制剂 58

3.3 治疗类风湿性关节炎的中药材品种 59

3.3.1 树参 59

3.3.2 藤石松 61

3.3.3 雷公藤 62

3.3.4 类风湿性关节炎大鼠模型类型 64

3.4 树参和藤石松水提液对RA作用机制的研究 65

3.4.1 实验材料 65

3.4.2 实验方法 66

3.4.3 实验结果 69

3.4.4 实验总结与讨论 70

3.4.5 研究展望 71

参考文献 72

第四章 单子叶植物细胞凋亡与过敏性免疫反应 77

4.1 引言 77

4.2 材料与方法 81

4.2.1 材料 81

4.2.2 培养基和常用试剂的配制 82

4.2.3 秀丽新小杆线虫饲养 84

4.2.4 常规分子生物学 84

4.2.5 PCR产物回收纯化 89

4.2.6 回收产物的TA克隆 90

4.2.7 单菌落PCR筛选阳性克隆 92

4.2.8 测序 93

4.2.9 序列分析 93

4.3 结果与分析 93

4.3.1 C.elegans的培养 93

4.3.2 C.elegans基因组DNA和总RNA的提取纯化 94

4.3.3 目的基因ced-3／ced-4的ORF序列扩增结果 94

4.3.4 ced-3／ced-4基因的cDNA-3／cDNA-4序列的扩增结果 95

4.3.5 PCR产物的TA克隆 96

4.3.6 ced-3／ced-4基因的测序与分析 97

4.3.7 诱导型植物表达载体的构建 99

4.3.8 诱导型表达载体的转化 103

4.4 小结 112

参考文献 114

第五章 双子叶植物细胞凋亡与过敏性免疫反应 118

5.1 引言 118

5.2 材料与方法 121

5.2.1 材料 121

5.2.2 农杆菌感受态细胞的制备 122

5.2.3 电激法转化农杆菌 122

5.2.4 质粒DNA的提取 123

5.2.5 农杆菌转化子及载体质粒在农杆菌中的稳定性分析 123

5.2.6 拟南芥栽培与农杆菌介导的转化 123

5.2.7 外源目的基因的PCR检测 128

5.2.8 报告基因GUS的检测分析 128

5.2.9 拟南芥根组织表皮细胞凋亡的组织化学鉴定 129

5.2.10 病情评价 130

5.2.11 统计分析 130

5.2.12 植物组织内线虫的染色 131

5.3 结果与分析 133

5.3.1 转化质粒在农杆菌中的稳定性鉴定 133

5.3.2 拟南芥的农杆菌转化和抗性筛选 133

5.3.3 目的基因的PCR检测 135

5.3.4 T1代转基因苗根系的GUS活性检测评价 136

5.3.5 转基因植株的表型检测 136

5.3.6 T1代转基因拟南芥基质苗对根结线虫的抗性 138

5.4 小结 139

参考文献 140

第六章 肿瘤细胞凋亡与免疫反应 142

6.1 引言 142

6.1.1 肿瘤微环境中的免疫细胞 142

6.1.2 结直肠癌的现状 143

6.1.3 microRNA简介 144

6.1.4 microRNA与肿瘤 146

6.1.5 藤石松中miRNA的潜在药用价值 148

6.2 microRNA的筛选 150

6.2.1 实验所使用软件 150

6.2.2 实验方法 150

6.2.3 实验结果与分析 151

6.3 miRNA转染结直肠癌细胞及效率检测 152

6.3.1 实验试剂与仪器 152

6.3.2 实验方法 155

6.3.3 RT-PCR检测细胞转染的有效性 164

6.4 结直肠癌细胞增殖检测 165

6.4.1 实验试剂与仪器 165

6.4.2 实验方法 167

6.4.3 实验数据处理方法 167

6.4.4 miR-192-5p、miR-30a-5p对结直肠癌细胞增殖的影响 168

6.5 结直肠癌细胞凋亡检测 169

6.5.1 实验试剂与仪器 169

6.5.2 实验方法 172

6.5.3 实验数据处理方法 174

6.5.4 miR-192-5p、miR-30a-5p对结直肠癌细胞凋亡的影响 174

6.6 小结 179

参考文献 180

附录 187

附录A 缩写表 187

附录B 中英文缩略表 192

附录C 缩略语表 194

附录D 秀丽新小杆线虫细胞凋亡基因序列信息 195

附录E 实验方法 199