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第一章 组织样本制备技术 1

第一节 组织样本采集 1

一、实验动物的处死方法 1

二、实验动物的解剖 2

三、取样方法及注意事项 3

四、细胞样本采集 4

第二节 标本的固定 4

一、固定的目的 4

二、固定的对象 5

三、常用的固定剂 5

四、组织固定方法 9

五、培养细胞的固定方法 10

六、固定时应注意的事项 10

七、组织固定后的洗涤 11

第二章 石蜡切片制作技术 12

第一节 组织固定后的处理 12

一、组织块修整 12

二、洗涤 12

三、脱水 13

四、透明 15

五、透蜡（浸蜡）与包埋 16

第二节 石蜡切片 18

一、石蜡切片前的准备 18

二、切片方法 19

三、切片中容易出现的问题、原因及解决方法 21

第三章 冰冻切片制作技术 22

第一节 冰冻切片的取样及处理 22

一、样品的处理 22

二、组织的速冻 22

第二节 冰冻切片 23

一、恒温冷冻切片机 23

二、切片方法及步骤 24

三、冰冻切片固定液选择 25

四、冰冻切片染色方法 25

五、冰冻切片的优缺点和注意事项 25

第四章 组织染色技术 28

第一节 染色的原理 28

一、染色的发展 28

二、染料 28

三、染色的原理 30

第二节 染色方法 32

一、整体染色法 32

二、组织块染色法 32

三、蜡带染色法 32

四、切片染色法 32

五、涂片染色法 32

六、活体染色法 33

第三节 苏木精-伊红染色法 33

一、苏木精-伊红染色的基本原理 33

二、苏木精-伊红染色的基本方法 33

三、二甲苯在H-E染色中的作用 35

四、乙醇在H-E染色中的作用 36

五、水洗的作用 36

六、分化和蓝化 37

七、切片制作中出现的问题、原因及解决方法 37

第四节 特殊染色方法 38

一、瑞特染色法 38

二、巴氏染色法 38

三、迈-格-吉染色方法 39

第五章 组织化学技术 40

第一节 蛋白质和氨基酸的组织化学技术 40

一、蛋白质的组成及分类 40

二、蛋白质和氨基酸的染色方法 41

第二节 脂类（脂质）的组织化学技术 43

一、锇酸法显示非饱和脂质 43

二、苏丹黑B染色法显示脂类 44

三、Fischler脂肪酸染色法 44

四、Daddi酒精性苏丹Ⅲ法 44

五、高氯酸-萘醌（PAN）法显示胆固醇 45

六、酸性苏木红法显示磷脂 45

第三节 酶组织化学技术 46

一、酶的分类 46

二、酶的组织化学反应法 47

三、影响显示酶的因素 47

四、水解酶的显示 48

五、胆碱酯酶的显示 49

六、氧化酶及过氧化物酶 51

七、Sato显示骨髓、血液涂片的过氧化物酶法 52

八、琥珀酸脱氢酶 52

第四节 多糖组织化学技术 52

一、过碘酸-Schiff反应 52

二、阿尔辛蓝-PAS法 53

第五节 核酸组织化学技术 54

一、Feulgen反应显示脱氧核糖核酸 54

二、甲基绿-派洛宁显示脱氧核糖核酸和核糖核酸 54

三、核酸荧光染色 55

第六节 凝集素组织化学技术 59

一、凝集素的标记物 59

二、染色步骤 59

第七节 生物胺荧光组织化学技术 61

一、Falck-Hillarp甲醛诱发荧光法 61

二、乙醛酸诱发生物单胺荧光法 62

三、邻苯二醛显示组胺荧光法 62

第六章 免疫组织化学技术 64

第一节 免疫组织化学技术的原理、分类和发展 64

一、免疫组织化学技术的基本原理 64

二、免疫组织化学技术的分类 65

三、免疫组织化学的特点 65

四、免疫组织化学的发展 66

第二节 免疫组织化学标本制备 68

一、取样 69

二、固定 69

三、脱水、浸蜡及包埋 70

四、切片 70

五、烤片 71

六、标本防脱落技术 71

七、对照试验 71

八、抗原修复 71

九、免疫组织化学结果的判断 73

第三节 免疫荧光组织化学技术 74

一、直接法 74

二、间接法 74

三、补体法 75

四、双重标记法 75

五、非特异性荧光染色的抑制或消除 76

第四节 免疫酶组织化学技术 77

一、酶标记抗体法（酶标法） 77

二、非标记抗体酶法 77

三、免疫酶双标记法 80

第五节 亲和免疫组织化学技术 80

一、亲和免疫组织化学技术的基本原理 81

二、亲和免疫组织化学技术的基本方法 81

三、亲和免疫组织化学技术的操作步骤 82

第六节 免疫金组织化学技术 83

一、免疫胶体金技术 83

二、蛋白A胶体金技术 84

三、免疫金银染色 85

第七节 免疫组织化学增敏方法 86

一、多聚螯合物酶法 86

二、催化信号放大系统 87

第八节 双重或多重免疫组织化学染色技术 88

一、基本染色形式 89

二、阻断法单酶或双重酶免疫组织化学染色 90

三、阻断法双重免疫荧光组织化学染色 91

四、非阻断法单酶或双酶双重免疫组织化学染色 91

五、非阻断法双重免疫荧光组织化学染色 92

六、其他类型组合的双重免疫染色 92

七、三重免疫染色 93

第九节 免疫组织化学结果判定及注意事项 93

一、免疫组织化学染色结果判断原则 93

二、非特异性染色 94

三、常见问题与处理方法 94

第七章 原位杂交组织化学技术 99

第一节 原位杂交组织化学的基本原理 99

一、核酸的分子结构 99

二、核酸的理化性质 100

三、核酸分子杂交的基本原理 101

四、核酸探针的种类 101

五、核酸分子杂交的类型 102

第二节 原位杂交组织化学技术的基本方法 102

一、杂交前准备 102

二、杂交 104

三、杂交后处理 105

四、检测 105

五、对照试验 105

第三节 荧光原位杂交技术 105

一、荧光原位杂交探针 106

二、荧光原位杂交技术类型 106

三、多色荧光原位杂交技术 107

第四节 原位PCR技术 107

一、原位PCR的基本原理 107

二、原位PCR的技术类型 108

三、原位PCR的技术特点 109

第五节 双重和多重原位杂交技术 110

一、放射性核素和非放射性标记探针的双重标记原位杂交 110

二、非放射性标记探针的双重标记原位杂交 111

三、两种放射性核素标记探针的双重标记原位杂交 111

第六节 原位杂交结合免疫组织化学技术 111

一、原位杂交在先 112

二、免疫组织化学在先 112

第八章 光学显微镜技术 114

第一节 普通光学显微镜 114

一、普通光学显微镜成像原理 114

二、光学显微镜基本结构 115

三、光学显微镜技术指标 117

四、光学显微镜照明技术 119

五、普通光学显微镜的使用与保养 120

第二节 倒置显微镜 121

第三节 相差显微镜 121

一、相差显微镜成像原理 122

二、相差显微镜装置 123

第四节 荧光显微镜 123

一、荧光的产生 123

二、荧光显微镜的组成 124

三、荧光素 125

四、荧光显微镜主要用途 126

五、荧光显微镜使用的主要注意事项 127

第五节 激光扫描共聚焦显微镜 127

一、基本原理 128

二、激光扫描共聚焦显微镜的基本结构 129

三、激光扫描共聚焦显微镜的主要特点 130

四、共聚焦显微镜图像模式 130

五、激光扫描共聚焦显微镜的主要应用 133

六、双光子（多光子）激光共聚焦显微镜 134

第六节 其他光学显微镜技术 135

一、暗视野显微镜 135

二、近场光学显微镜 136

三、原子力显微镜 138

第九章 电子显微镜技术 141

第一节 透射电子显微镜技术 141

一、透射电镜术的基本原理 141

二、超薄切片技术 143

三、观察与记录 149

四、冷冻超薄切片技术 150

五、冷冻断裂技术 151

第二节 扫描电子显微镜技术 152

一、扫描电镜术的基本原理 152

二、扫描电镜生物样品制备的基本方法 154

三、特殊扫描电镜生物样品制备方法 157

第十章 显微图像分析技术 159

第一节 显微图像分析系统的基本原理 159

第二节 生物显微图像分析系统 160

一、生物显微图像分析系统的组成 160

二、生物显微图像分析系统软件组成 162

第三节 显微图像处理 164

一、数字图像处理原理 164

二、图像处理的基本步骤 164

第四节 生物显微图像分析 170

一、二维几何参数测量 170

二、体视学参数测量 172

三、光度学参数测量 175

第五节 显微图像分析质量控制 177

一、图像分析的误差因素 177

二、图像分析误差的计算 178

三、图像分析的误差控制 179

第六节 国内外图像分析仪 180

一、国产图像分析仪的情况简介 180

二、国外图像分析仪的情况简介 181

第十一章 流式细胞术 183

第一节 流式细胞仪原理和组成 183

一、流式细胞术分析的基本原理 183

二、流式细胞仪的基本结构 184

第二节 荧光素 186

一、荧光 186

二、荧光素的特性 186

三、常用的荧光素 188

第三节 流式细胞仪样本制备和标记方法 189

一、实验准备阶段 189

二、样本处理 189

三、荧光染色 190

四、细胞分选 190

第四节 流式细胞仪的数据处理 190

一、数据的显示 190

二、数据的分析 191

第五节 流式细胞仪的应用 191

一、细胞周期检测 191

二、细胞凋亡检测 192

三、细胞增殖检测 192

四、细胞膜标记检测——淋巴细胞亚群 192

五、细胞质标记检测——细胞内细胞因子检测 192

六、流式细胞仪分选技术 192

七、染色体分析 194

第十二章 组织芯片技术 195

第一节 生物芯片 195

一、生物芯片简介 195

二、生物芯片的种类 196

第二节 组织芯片技术 197

一、组织芯片的制备 197

二、组织芯片结果分析 199

三、组织芯片的优点与问题 200

第十三章 细胞凋亡检测技术 202

第一节 细胞凋亡的形态学检测 202

一、普通光学显微镜观察法 203

二、荧光显微镜检测法 203

三、电子显微镜观察法 204

第二节 凋亡的细胞膜结构改变检测 205

第三节 凋亡细胞的流式细胞术检测 206

一、PI染色法 206

二、Hoechst-PI染色法 206

三、Annexin法 206

第四节 细胞凋亡的TUNEL法检测 207

一、过氧化物酶标记测定法 207

二、荧光素标记测定法 207

三、生物素-dUTP／酶标亲和素测定法 208

第五节 细胞凋亡相关蛋白质和酶的检测 208

一、Fas抗原的检测 208

二、Bcl-2蛋白的检测 208

三、P53蛋白的检测 208

四、caspase3活性的检测 209

五、PARP活性的测定 209

第六节 细胞凋亡DNA裂解的检测 209

一、凋亡细胞DNA裂解的电泳检测法 209

二、细胞凋亡DNA裂解的免疫化学检测法 210

三、细胞凋DNA裂解的原位末端标记法 210

四、彗星分析技术 211

主要参考文献 212