抗体技术 第2版PDF电子书下载

第1章 抗体概述 1

1.1 抗体的发展历程 1

1.1.1 抗体的发现 1

1.1.2 抗体技术的发展 2

1.2 抗体的分子结构 4

1.2.1 抗体的概念 4

1.2.2 抗体分子的组成 5

1.2.3 抗体分子超家族 6

1.3 抗体的类型 8

1.3.1 IgG 8

1.3.2 IgM 9

1.3.3 IgA 9

1.3.4 IgE 10

1.3.5 IgD 10

1.4 抗体的功能 10

1.4.1 抗体分子的水解片段 11

1.4.2 抗体分子的功能区结构 12

1.4.3 抗体抗原结合 13

1.4.4 补体激活 14

1.4.5 Fc受体介导的效应功能 15

1.5 抗体技术的应用 15

1.5.1 免疫检测试剂盒 16

1.5.2 免疫胶体金 16

1.5.3 免疫成像技术 17

1.5.4 医学诊断 17

1.5.5 肿瘤治疗 17

1.6 抗体技术的发展趋势 18

1.6.1 抗体药物的人源化 18

1.6.2 抗体药物的微型化 19

1.6.3 免疫检测的可视化 20

1.6.4 免疫检测的自动化 21

第2章 抗原制备 22

2.1 完全抗原的制备 23

2.1.1 颗粒性抗原的制备 23

2.1.2 可溶性抗原的制备 24

2.2 小分子抗原的制备 26

2.2.1 载体选择 26

2.2.2 有羧基和氨基的半抗原的偶联 27

2.2.3 无羧基和氨基的半抗原的偶联 29

2.3 超抗原 30

2.3.1 超抗原的种类 31

2.3.2 超抗原的生物学意义 31

2.4 抗原的鉴定 32

2.4.1 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 32

2.4.2 双向免疫扩散试验 32

2.4.3 免疫电泳 33

2.5 小分子半抗原偶联物的鉴定 33

2.5.1 琼脂糖凝胶电泳法 34

2.5.2 紫外扫描鉴定 34

2.5.3 红外扫描鉴定 35

2.5.4 酶联免疫吸附法 36

第3章 动物免疫与多克隆抗体制备 38

3.1 动物免疫 38

3.1.1 免疫动物的选择 38

3.1.2 佐剂的选择 40

3.1.3 免疫剂量和途径 41

3.1.4 可溶性抗原的免疫方案 42

3.1.5 颗粒性抗原的免疫方案 43

3.2 血清采集 43

3.2.1 少量取血 43

3.2.2 中等量取血 44

3.2.3 大量采血 44

3.3 免疫效价检测 45

3.4 多抗血清的纯化与保存 46

3.4.1 多抗血清的纯化 47

3.4.2 抗体的保存 47

3.5 多抗的性质鉴定 47

3.5.1 多抗血清的特异性 47

3.5.2 血清效价测定 48

3.5.3 基于多抗的毒素检测 49

3.5.4 利用多抗血清检测实际样品 49

第4章 单克隆抗体的筛选与鉴定 51

4.1 单克隆抗体产生的原理 51

4.2 细胞融合 52

4.2.1 饲养细胞 53

4.2.2 骨髓瘤细胞 53

4.2.3 融合剂 55

4.2.4 细胞融合 55

4.3 杂交瘤细胞的筛选 56

4.3.1 HAT培养基筛选 56

4.3.2 iELISA筛选 58

4.4 杂交瘤细胞的克隆化与鉴定 59

4.4.1 杂交瘤细胞的克隆化 60

4.4.2 抗体亚类分析 60

4.4.3 细胞染色体分析 61

4.4.4 细胞培养上清效价检测 62

4.4.5 抗体特异性 63

4.5 杂交瘤细胞的保存与复苏 65

4.5.1 杂交瘤细胞的保存 65

4.5.2 杂交瘤细胞的复苏 66

第5章 抗体的大量制备与性质研究 67

5.1 单克隆抗体大量制备的方法 67

5.1.1 动物体内诱生法 67

5.1.2 体外培养法 69

5.1.3 杂交瘤细胞的无血清培养 70

5.2 单克隆抗体的纯化 71

5.2.1 亲和层析法 72

5.2.2 沉淀法 74

5.3 抗体的性质研究 77

5.3.1 抗体特异性测定 77

5.3.2 抗体亲和力测定 81

5.3.3 抗体稳定性测定 83

5.4 抗体的检测 84

5.4.1 检测标准竞争曲线的绘制 84

5.4.2 加标准样品检测 85

第6章 基因工程抗体的制备 86

6.1 基因工程抗体的种类 86

6.1.1 人源化抗体 87

6.1.2 小分子抗体 91

6.1.3 特殊基因工程抗体 95

6.2 抗体基因库的构建 96

6.2.1 噬菌体抗体库的构建 97

6.2.2 半合成抗体库的构建 99

6.2.3 全合成抗体库的构建 100

6.2.4 天然抗体库的构建 100

6.3 抗体的筛选与鉴定 101

6.3.1 抗体库的筛选方法 101

6.3.2 抗体特性的鉴定 105

6.3.3 筛选效率的检测 108

第7章 抗体的改造 110

7.1 抗体亲和力成熟 110

7.1.1 抗体亲和力成熟过程 111

7.1.2 体内抗体亲和力成熟的策略 111

7.1.3 体外抗体亲和力成熟的策略 112

7.1.4 体外亲和力成熟实例 119

7.2 抗体稳定性改造 121

7.2.1 单链抗体 121

7.2.2 二硫键稳定的Fv（dsFv） 122

7.2.3 双价dsFv 123

7.2.4 变型Fv 123

7.3 抗体人源化改造 124

7.3.1 嵌合抗体 125

7.3.2 CDR移植抗体 125

7.3.3 SDR移植抗体 126

7.3.4 噬菌体抗体库构建人源化抗体 127

7.3.5 完全人源化抗体 127

第8章 抗体表达与纯化 129

8.1 抗体的融合表达 129

8.1.1 融合表达载体 130

8.1.2 融合表达标签 131

8.1.3 融合表达的宿主 134

8.2 抗体的分子伴侣表达 138

8.2.1 分子伴侣的分类 138

8.2.2 分子伴侣表达实例 139

8.3 表达抗体的纯化 145

8.3.1 沉淀法 145

8.3.2 层析技术 146

第9章 免疫检测技术 150

9.1 酶联免疫吸附测定 150

9.1.1 ELISA的基本原理 150

9.1.2 ELISA的种类 151

9.1.3 ELISA检测方法的建立 155

9.2 免疫印迹技术 158

9.2.1 免疫印迹的基本步骤 158

9.2.2 免疫印迹结果的分析 160

9.3 胶体金检测技术 160

9.3.1 胶体金制备 161

9.3.2 抗体的胶体金标记 163

9.3.3 金标试纸条的组装 167

9.3.4 胶体金检测 168

9.4 免疫检测的其他技术 172

9.4.1 免疫沉淀法 172

9.4.2 免疫组织化学 173

9.4.3 免疫荧光技术 173

9.4.4 补体结合反应技术 173

9.4.5 多元免疫分析技术 174

主要参考文献 177