组织切片技术PDF电子书下载

第一部分 组织切片的基本操作 1

第一篇 切片制作的基本原理 1

第一章 概述 1

一、引言 1

二、制片方法的种类 1

1.非切片法 1

2.切片法 1

三、制片方法的一般步骤概述 1

1.切片法 1

2.非切片法 2

第二章 杀死、取材和固定 3

一、动物杀死的方法 3

二、取材和固定 3

1.取材和固定的目的 3

2.固定的对象 4

3.组成固定剂的性质和条件 4

4.固定剂的作用 5

5.固定剂的媒染效果 5

6.固定剂的穿透率 5

7.固定中组织的收缩问题 5

8.取材和固定应注意事项 5

9.常用固定剂的性能及其使用 7

10.常用固定剂性质及用法简表 15

11.常用固定剂配制表 19

第三章 洗涤和脱水 19

一、洗涤的目的和洗涤的原则 19

二、几种常用固定剂的特殊洗涤法 20

三、脱水的目的和方法 20

四、脱水剂的类型 21

五、常用脱水剂及其使用方法 21

第四章 透明 23

一、透明的目的 23

二、常用透明剂 23

第五章 透入与包埋 24

一、透入与包埋的目的 24

二、透入包埋剂的种类 24

1.石蜡 24

2.火棉胶 25

3.炭蜡 26

三、包埋方法的种类 26

1.熔化法 26

2.挥发法 27

3.双重法 27

四、透入与包埋的操作 27

1.石蜡的透入与包埋法 27

2.火棉胶的透入与包埋法 28

3.炭蜡的透入与包埋法 28

4.双重包埋法 28

5.明胶包埋法 29

第六章 切片 30

一、几种切片法的优缺点 30

二、切片机的种类构造 31

1.石蜡切片机 31

2.火棉胶切片机 33

3.冰冻切片机 33

三、切片机的保养 34

四、切片刀的种类，研磨与保存 35

第七章 染色与染料 38

一、染色的目的 38

二、染色的历史 38

三、染料在动物组织学中的应用 39

四、染料的一般性质 40

1.发色团 40

2.助色团 43

3.酸性染料和碱性染料 46

五、染料的分类 48

六、染色的原理 50

1.染色的物理作用 50

2.染色的化学作用 51

3.细胞的染色 51

4.萤光染色 55

七、染色的方法 62

1.整体染色法 62

2.组织块染法 62

3.蜡带染色法 62

4.切片染色法 62

5.特殊染色法 63

八、媒染剂及促染剂 65

九、常用染料的性能及配制 68

1.天然染料 68

2.煤焦染料 72

十、常用染料的主要用途 77

十一、各种染色剂用途的归类 84

十二、常用染料的溶解度 87

第八章 分化与封藏 88

一、分化的目的与方法 88

二、分化剂的种类 89

三、封藏的目的 89

四、常用封藏剂 90

第二篇 切片的具体制作 92

第九章 制片前的准备工作 92

一、玻璃器皿的清洗 92

二、一般溶液的配制 93

三、实验室工作注意事项 93

第十章 非切片法的制作 94

一、血液涂片的制作 94

二、骨磨片的制作法 95

三、无丝分裂(膀胱印片)法的制片 96

四、肌肉组织浸渍分离制片法 96

五、间皮硝酸银染色制片法 96

六、鸡胚胎之整体制片法 97

第十一章 切片的制作 98

一、石蜡切片的制作 98

二、冰冻切片的制作 106

三、火棉胶切片的制作 108

第二部分 细胞、组织的特殊染色法 111

第一章 染色体染色法 111

一、Ehrlich-Biondi氏染色法示染色体 111

二、大染色体之显示 112

三、细胞有丝分裂 112

第二章 线粒体染色法 113

一、Regaud氏染法示线粒体 113

二、Regaud氏改良法示线粒体 114

三、Cowdry氏法之一示线粒体 114

四、Cowdry氏法之二示线粒体 114

第三章 高尔基体染色法 115

一、Cajal氏硝酸铀法示高尔基体 115

二、Da Fano氏改良Cajal氏法示高尔基体 116

第四章 糖元染色法 116

一、显示糖元的过碘酸Schiff氏反应(P.A.S) 116

二、显示糖元的Best s卡红染色法 116

三、显示糖元及粘蛋白的银法 117

第五章 脂肪染色法 117

一、显示中性及酸性脂类的Nile蓝法 118

二、Lillie氏油红O染色法示脂肪 118

三、脂肪染色法(苏丹Ⅲ法) 118

四、脂肪酸 119

五、胆固醇 119

六、类脂质 119

第六章 色素染色法 119

一、Dopa氧化酶反应 120

二、黑色素染色法(Fortana法) 120

三、Dopa黑素反应 120

四、证明黑色素的Lillie氏亚铁吸收法 121

五、Lillie氏过蚁酸和过醋酸的Schiff氏反应 122

六、铁氰化铁还原技术(Lillie氏改良法) 123

第七章 含铁血黄素染色法 124

一、柏林蓝反应 124

二、滕氏蓝反应 125

三、用普鲁士蓝证明铁的Bunling氏法 125

第八章 胆红素(胆色素)染色法 126

一、证明胆色素的Stein氏法 126

二、证明胆红素的Hall氏法 127

第九章 肾上腺嗜铬细胞染色法 127

一、显示肾上腺素红(嗜铬性)的改良Giemsa法 128

二、Wiesel氏嗜铬细胞染色法 128

三、Ogata-Ogata氏硝酸银嗜铬细胞法 129

第十章 垂体细胞染色法 129

一、Romeis氏前叶细胞染色法 129

二、证明垂体细胞的Slidder氏橘黄G复红亮绿法 130

第十一章 嗜银细胞染色法 131

一、Masson氏银浸法示肠嗜银细胞 131

二、龙桂开嗜银细胞银浸法示肠嗜银细胞 132

三、Fortana-Masson嗜银颗粒染色 132

四、显示嗜银细胞颗粒的重氮法 133

第十二章 肥大细胞染色法 133

一、鲍鉴清天真-伊红-美蓝染色法 133

二、证明肥大细胞颗粒的Maximov氏酒精硫堇法 134

三、证明肥大细胞的甲苯胺蓝染色法 134

第十三章 包涵体染色法 134

一、证明包涵体的Mann氏甲基蓝-伊红法 135

二、昆虫体内包涵体染色法 135

第十四章 细菌染色法 137

一、Gram-Weigert细菌染色 137

二、Ziehl-Neelsen氏抗酸染色 137

三、Wade-Fite氏抗酸新染法 138

四、证明结核杆菌的石炭酸-复红-金胺苯酚法 138

第十五章 真菌染色法 139

一、证明真菌的Grocott氏乌洛托品银法 139

二、证明真菌的Gridley氏法 141

第十六章 螺旋体染色法 142

一、证明螺旋体的Camp bell和Rosahn法 142

二、Levaditi氏法示梅毒螺旋体 143

第十七章 淀粉样变性染色法 143

一、证明类淀粉物的Puchtler、Sweat和Levine氏刚果红法 143

二、证明类淀粉物的结晶紫法 144

三、证明类淀粉物Lieb氏结晶紫法 145

第十八章 胶元纤维染色法 146

一、Heidenhain氏Azan染色法 146

二、Masson氏法 147

三、Mallory氏磷钼酸-苏木素染色法 147

四、Van-Gieson氏法 148

五、Lillie氏猩红-苦味酸-苯胺蓝法 148

第十九章 弹性纤维染色法 149

一、Verhoeff氏弹性纤维染色法 149

二、Orcein氏弹性纤维染色法 149

第二十章 网状纤维染色法 150

一、Gordon及Sweet氏原法 150

二、Del Rio-Hortega氏法 151

三、Foot氏法 151

四、Wilder氏法 152

第二十一章 骨组织的染色法 153

一、钙质染色法--Kossa氏法 153

二、Schmorl氏硫堇--苦味酸法 154

三、Lillie氏硝酸银沉淀法 154

四、Romeis氏美蓝染色法 155

第二十二章 肌组织的染色法 155

一、Sch？ffler氏肌原纤维、网状纤维及胶元纤维同时显出法 155

二、Retterer氏法显示横纹肌 156

三、显示心肌梗死的酸性复红染色法 156

第二十三章 消化系统的染色法 157

一、Alcian蓝-PAS染色法--示粘液染色 157

二、P.Mayer氏粘液卡红染色法 158

三、K.S.Ludwig氏胃腺细胞鉴别染色法 158

四、Kopsch氏改良Golgi氏法示胆毛细管 159

五、张保真铁苏木素染色法示胆毛细管 159

六、胰腺Gomori氏铬铝苏木素法 159

七、去氧核糖核酸、多糖类、蛋白质的三色染色法 161

第二十四章 神经系统 162

一、尼氏小体染色--Pischinger氏缓冲美蓝法 162

二、染肉眼可见的脑切片的一种方法 162

三、Golgi氏速法示神经细胞及突起 163

四、Cox氏法示神经细胞及突起 164

五、R.Spoerri氏法示神经细胞体及突起 164

六、V.Apathy氏氯化金法示神经原纤维 164

七、Cajal氏冰冻切片浸渍法示神经原纤维 165

八、Weigert-Pal氏法示髓鞘 165

九、证明髓鞘内脂肪变性的Marchi氏法 166

十、证明髓磷质的Page氏法 166

十一、证明神经胶质纤维的Holzer氏法 167

十二、证明神经胶质纤维和细胞的Mallory氏苯胺蓝橘黄G法 168

十三、Cajal氏金升汞法示神经胶质(星形细胞) 168

十四、Hortega氏少突胶质细胞碳酸银法 169

十五、Hortega氏小胶质细胞碳酸银法 170

第三部分 组织化学染色法 171

第一章 常用组织化学固定剂及试剂 171

一、固定剂 171

二、常用酸溶液简便配制法 174

三、常用碱溶液简便配制法 175

四、常用盐溶液简便配制法 176

五、缓冲液 176

第二章 蛋白质的组织化学法 179

一、显示蛋白质的汞-溴酚蓝(HgBpB)法 179

二、显示蛋白质结合性--NH2基法 180

1.茚三酮-Schiff法 180

2.羟基萘甲醛法 180

3.氯胺-T法 181

4.乙酰苯反应 182

三、显示含色氨酸、组氨酸和酪氨酯的蛋白质偶联四唑反应 183

四、显示含酪氨酸、SH及NH2基蛋白质的二硝基氟苯(DNFB)法 184

五、显示碱性蛋白质法 186

1.酸性搔洛铬花青法 186

2.显示核中碱性蛋白质的萘酚-黄S法 186

3.显示核中碱性蛋白质的碱性坚牢绿法 187

六、显示硫氢基及二硫键的方法 188

1.显新偶联四唑反应 188

2.显示SH基和SS基的DDD反应 189

3.显示SH基和SS基铁氰化铁法 191

4.硝蓝四唑法 192

5.显示SH基的萘基马来酰亚胺(HNI)反应 193

6.显示SH基的汞橙(RSR)法 194

七、显示SS基法 196

1.疏基醋酸-铁氰化铁法 196

2.显示SS基的过甲酸-Schiff法(PFAS) 196

3.过甲酸-Alcian蓝法 197

八、显示酪氨酸法 198

1.Morel-Sisley重氮化法 198

2.Millon反应 198

九、显示色氨酸法 200

1.萘基乙二胺反应(NED)法 200

2.二甲氨基苯甲醛DMAB-亚硝酸盐法 201

3.吲哚类的蔷薇吲哚(Rosindoee)反应 201

4.显示吲哚类的后偶联苄叉反应 202

5.显示吲哚类的咕吨氢醇反应 203

6.胃蛋白酶提取法 204

十、显示精氨酸法 205

1.坂口Sakaguchi氏反应Ⅰ法 205

2.坂口8-羟喹啉反应Ⅱ法 205

3.显示含精氨酸及赖氨酸蛋白质的胰蛋白酶提取法 206

十一、显示弹性蛋白法 207

1.醛品红染色法 207

2.Moore法 207

3.显示弹力组织的甲苯二酚-新品红法 208

4.显示弹力组织的万-魏氏染色法 209

十二、显示神经分泌物法 209

1.醛品红染色法 209

2.Bargmann氏铬苏木素法 211

十三、显示垂体细胞的类粘蛋白颗粒 211

1.Wilson-Ezrin法 211

2.Halmi法 212

3.PFAAB.PAS橙G法 212

第三章 核酸的组织化学法 213

一、显示DNA法 213

1.Feulgen染色法 213

2.Feulgen-萘甲酸酰肼反应 215

二、显示DNA及RNA的甲基绿-焦宁法 217

三、显示核酸的酶提取法 220

1.显示RNA的核糖核酸酶提取法 220

2.显示DNA的脱氧核糖核酸酶的提取法 221

四、显示核酸的萤光酮的改良Turchini法 222

五、显示核酸的吖啶橙萤光染色法 223

六、显示核酸的棓花青法 223

1.Einarson的棓花青-铬明矾法 223

2.改良棓花青法 225

第四章 碳水化合物的组织化学法 225

一、显示多糖、粘多糖及粘蛋白等的Schiff反应 225

1.McManus法 227

2.血细胞内糖元定位法 228

3.血细胞内糖元定位简法 229

4.培养细胞内糖元定位 229

5.Hotchkiss氏法 229

6.Shimizu和Kumanoto四醋酸铅-Schiff法 230

7.Lhotka氏铋酸钠-Schiff法 231

二、显示糖元及粘蛋白的银染法 231

三、显示抗坏血酸银法 232

1.酸性硝酸银法 233

2.Bacchus法 233

3.Jensen及Karaljian法 234

4.Bourne,Barnett及Bourne法 234

四、显示酸性粘多糖法 234

1.选择性萤光染色法 234

2.显示酸性粘多糖的渗析铁法 235

3.显示酸性粘多糖类的渗析铁与PAS染色结合法 235

五、显示透明质酸类物质的透明质酸酶提取法 236

六、显示结缔组织基质粘多糖的Evan氏蓝法 237

七、显示乙酰化多糖类的高铁氧肟酸法 237

八、显示葡萄糖的Okamoto法 238

九、显示戊糖的改良Roe-Rice法 239

第五章 类脂及其衍生物的组织化学法 239

一、显示类脂的方法 240

1.显示神经组织中的酸性多糖类和中性脂肪的改良Hale氏法 240

2.显示中性脂肪及酸性类脂的Cain氏Nile蓝法 240

3.显示类脂的丙二醇苏丹法 241

4.显示类脂的磷化氢3R续发性萤光法 241

5.显示类脂的控制铬化作用法 242

6.显示酸性脂类的Feyrter氏“封片染色”法 242

二、显示隐脂类的苏丹黑B法 243

1.Ackerman血涂片法 243

2.Berenbaum法 243

三、显示糖脂的方法 244

1.Diezel改良的Molisch反应法 244

2.Diezel改良的Br?ckner反应法 244

四、显示磷脂类的方法 244

1.酞花青铜法 244

2.酸性氧化苏木素法 245

3.Nile蓝法 248

4.显示磷酯、脑苷脂的Okamoto氏汞-二苯卡巴腙法 248

五、显示变性髓磷脂的Marchi法 249

1.Swank及Davenport法 250

2.Wolman法 250

六、显示脂肪酸的方法 252

1.Fischler铜法 252

2.Okamoto等氏改良Fischler法 252

七、显示含不饱和键脂类的方法 253

1.过甲酸-Schiff氏法 253

2.显示不饱和脂类的紫外线Schiff法 254

八、显示固醇类的方法 254

1.改良的Schultz法 254

2.显示胆碱脂类的磷钼酸法 255

3.显示胆固醇的三氯化铋法 255

4.显示胆固醇及其酯的鉴别法 256

5.显示胆固醇及胆固醇脂的Okamoto法 256

6.显示类固醇的Schultz变法 256

第六章 醛基反应 257

一、显示缩醛磷脂的浆醛反应 257

1.Cain 1949法 257

2.Hayes 1949法 258

二、显示醛基的方法 258

1.苯肼-甲？反应 258

2.萘甲酸酰肼反应 259

3.Gomori氏氨银反应 260

三、显示类皮质激素的a-乙酮醇基法 261

第七章 显示酶的组织化学方法 261

一、显示碱性磷酸酶的钙-钴法 261

1.Gomori原法 261

2.Danielli改良法 263

3.Fredriesson 1956改良法 264

4.Butchnet及Chuyen法 265

5.显示血涂片中碱性磷酸酶的钙-钴法 265

二、显示碱性磷酸酶的偶氮偶联染料法 266

1.Pearse 1960法 266

2.显示血细胞的碱性磷酸酶的偶氮偶联法 267

3.Kaplaw、Monio及Hayhoe偶氮偶联法 268

4.显示碱性磷酸酶的萘酯AS-磷酸酯偶氮染料法 268

三、显示5-核苷酸酶法 270

1.Wachstein及Meisel铅法 270

2.Pearse及Rise钙法 270

四、显示缩醛酶的钙-钴法 271

五、显示ATP酶的方法 272

1.Wachstein及Meisel铅法 272

2.Padykula及Herman钙法 272

3.Maengwyn,Davies钙法 273

4.Hiles改良Herman法 274

六、显示硫胺素焦磷酸酶的方法 274

七、显示无机焦磷酸酶的方法 275

八、显示无机多偏磷酸酶的方法 275

九、显示葡萄糖-6-磷酸酶法 276

1.Chiquoine 276

2.Wachstein及Meisel 277

十、显示酸性磷酸酶的铅法 277

1.Gomori 1950 277

2.MeDendel改良法 278

3.Rozenszajn氏改良法 279

4.Ruyter石蜡切片法1964 280

5.Takeuchi及Tanoue法 280

十一、显示酸性磷酸酶的偶氮偶联法 281

1.Pearse 1960法 281

2.显示酸性磷酸酶的萘酚AS-BI磷酸酯法 281

3.显示酸性磷酸酶的后偶联法 282

十二、显示磷酸酰胺酶法 283

1.Gomori铅法 283

2.Meyer与Weinmann改良铅法 283

3.Burstone的偶联偶氮染料法 284

十三、显示酯酶的方法 284

1.Gomori醋酸a-萘酯法 284

2.Gomori的萘酚AS醋酸酯法 285

3.Burstone的萘酚AS-LC醋酸酯法 286

4.Holt及Withers的吲哚酚醋酸酯法 287

5.Gomori的Tween法 288

6.显示脂肪酶--酯酶的改良Tween法 289

十四、显示胆碱酯酶的方法 289

1.Gomori十四酰胆碱法 289

2.Gomori的乙酰硫胆碱法 290

3.Karnovsky改良法 291

4.显示胆碱酯酶的乙酰--及丁酰硫胆碱法 292

5.改良的Koelle硫胆碱及抑制剂法 294

6.硫赶醋酸法 296

十五、显示β-葡萄糖醛酸苷酶的方法 296

1.Fishman及Baker的正铁羟基喹啉法 296

2.Burton及Pearse的8-羟基喹啉偶联偶氮法 297

3.Seligman、Tson、Rutenburg及Cohen的后偶联法 298

十六、显示β-半乳糖苷酶的后偶联法(Rutenberg等1958b) 298

十七、显示α-葡萄糖苷酶的后偶联法 299

十八、显示N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶的方法 300

十九、显示葡聚糖磷酸化酶及转糖基酶的方法 300

二十、显示细胞色素氧化酶的方法 301

1.Moog的G-Nadi反应 301

2.Naehlas等的ADN法 302

3.Burstone的N-苯基-对-苯二胺法 303

二十一、显示过氧化物酶法 304

1.De Robertis及Grasso的联苯胺反应法 304

2.Van Duijn 1955法 305

3.血涂片法 305

4.Ritter及Oleson的稳定性嗜苏丹细胞的a-萘酚反应 306

5.无色专利蓝法 307

二十二、显示过氧化氢酶的乙基过氧化氢化法 307

二十三、显示“氢过氧化物酶”的乙基过氧化氢法 308

二十四、显示Dopa-氧化酶(酪氨酸酶)法 309

二十五、显示单胺氧化酶法 310

1.萘酰肼法 310

2.四唑盐法 311

二十六、显示琥珀酸脱氢酶(SDH)的四唑盐法 312

1.Nachlas法 312

2.Gobel s氏改良Rutenberg Waoman Seligman的方法 314

3.Peason氏法 315

4.培养细胞Nitro-BT法 316

5.MTT法 317

二十七、显示DPN及TPN黄素蛋白酶的方法 317

1.MTT法 317

2.显示DPN-黄素蛋白酶的Nitro-BT法 318

3.显示TPN-黄蛋白酶的Nitro-BT法 319

二十八、显示要求DPN及TPN的脱氢酶的四唑盐法 319

二十九、显示亮氨酸氨基酞酶的方法 321

三十、显示组织蛋白酶C的吲羟醋酸酯法 322

三十一、显示芳基硫酸酯酶的后偶联法 323

三十二、显示碳酸酐酶的方法 323

第八章 其他组织化学法 324

一、显示肠嗜银细胞颗粒法 324

1.重氮法 324

2.Gibb氏法 325

二、显示脂褐质的方法 326

1.Schmorl法 326

2.铬明矾苏木素法 326

3.显示抗酸性脂褐质的Ziehl-Neelsen长法 326

三、鉴别脂褐质和黑色素的Nile蓝法 327

1.Hueck法 327

2.Lillie 327

四、显示脂肪过氧化物的方法 328

1.Glavind等法 328

2.二氨基芴法 328

〔附〕放射自显影术 329