靶向新基因的分子克隆策略 理论与方法PDF电子书下载

第一章　PCR程序与条件优化 1

第1节　PCR的理论知识 1

第2节　用超长PCR法从基因组DNA中扩增长片段 11

第3节　用Tub DNA聚合酶自少量基因组DNA扩增5kb以下的DNA序列 18

第4节　触减PCR或步减PCR法：一步优化 23

第5节　RT—PCR一步法克隆cDNA大片段 27

第二章　PCR产物的克隆 34

第1节　利用T4 DNA聚合酶产生可直接克隆的PCR产物 34

第2节　不需连接酶的快速亚克隆法 38

第3节　利用突出的T/A克隆PCR产物 44

第4节　应用Xcm Ⅰ酶切位点制备T载体 50

第5节　应用T连接子策略修饰和定向克隆PCR产物 55

第三章　突变、重组和体外选择 64

第1节　重组PCR介导的基因重组及定点突变 64

第2节　DNA的体外重组与突变：用重叠区扩增法进行基因拼接 69

第3节　应用PCR插入子对合成基因进行框架内克隆 74

第4节　用巨型引物PCR方法进行基因突变和基因融合 82

第5节　单个反应管内完成快速、有效的基因突变 86

第6节　用耐热连接酶制造突变 91

第7节　用三步PCR介导接头分区诱变 94

第8节　Flip-PCR介导序列倒置 97

第9节　SELEX组合分析——寻找高亲和力核酸配体的方法 99

第四章　相邻未知DNA的克隆 113

第1节　快速扩增cDNA末端：RACE策略 113

第2节　单侧特异性PCR扩增基因调控区 116

第3节　用末端修饰法扩增cDNA相邻序列和基因组片段 120

第4节向第一链cDNA 3′端锚着固定序列：在克隆稀有全长mRNA中的应用 129

第5节　用欢乐PCR法在DNA克隆内快速定向移行 138

第6节　反式PCR：克隆cDNA末端的有效方法 141

第7节　用锚着PCR从基因组文库中快速扩增基因末端 144

第8节　用外显子扩增法从酵母人工染色体（YAC）中分离外显子序列 147

第五章　文库构建与筛选 162

第1节　用磁珠和PCR方法自小量RNA构建cDNA文库 162

第2节　通过对cDNA群体的顺次细分法提高低丰余度cDNA的平均丰余度 169

第3节　用少量细胞构建cDNA文库 178

第4节　应用非放射性方法对重组文库进行快速筛选 184

第5节　用PCR筛选cDNA文库 189

第6节　用亚文库法对稀有克隆进行富集和筛选 190

第六章　PCR在差异显示和减法技术中的应用 201

第1节　用分子选择法对cDNA序列丰度进行正常化 201

第2节　用磁珠和PCR进行减法cDNA克隆 208

第3节　扣除cDNA的PCR更新法 218

第4节　应用PCR进行cDNA文库的差式筛选 228

第5节　用DDRT-PCR鉴定和克隆差异表达的基因 235

第6节　基因组扣除方案 243

第7节　DNA/RNA指纹图：任意引物PCR法（AP-PCR） 249

第七章　基因家族成员的克隆 265

第1节　用简并寡核苷酸引物和PCR克隆基因家族成员 265

第2节　具最低序列相似性的基因扩增：次黄核苷酸在简并引物中的应用 272

第3节　如何设计用于扩增基因家族中特定成员或亚群的PCR引物 276

第4节　根据统计学资料设计引物 282

附录1　DNA片段末端内切酶切割效率 290

附录2　不同物种对密码子使用的偏向性比较 292