蛋白质工程PDF电子书下载

第一章 总论 1

第一节 蛋白质工程的诞生 1

第二节 蛋白质工程的研究途径及其主要环节 3

第三节 蛋白质工程的工作定义及各类研究策略 6

第二章 蛋白质工程的主要研究方法——基因工程方法 11

第一节 寡核苷酸片段及基因的人工合成 11

1.1寡聚DNA片段合成的历史和意义 11

1.2寡聚DNA的合成方法 12

1.3基因合成 26

第二节 目的基因的克隆和分析 49

2.1克隆目的基因的策略及步骤 49

2.2源DNA的制备 50

2.3基因库的构建 53

2.4筛选目的基因的方法 57

2.5目的基因的结构分析 63

2.6克隆目的基因实例分析 64

第三节 目的基因的定位诱变和随机诱变 69

3.1定位诱变技术 69

3.2随机诱变 73

第四节 目的基因的表达 76

4.1大肠杆菌表达目的基因的“载体—宿主”系统 77

4.2枯草杆菌表达外源基因的“载体—宿主”系统 85

4.3酵母细胞表达外源基因的“载体—宿主”系统 88

4.4高等真核细胞的外源基因表达系统 89

第一节 盐析 94

1.1盐析原理 94

第三章 蛋白质工程的研究方法——蛋白质的纯化和鉴定 94

1.2硫酸铵是盐析的最佳盐类 95

1.3硫酸铵盐析 95

第二节 脱盐 97

2.1透析法 97

2.2凝胶柱层析 97

第三节 离子交换层析 98

3.1离子交换剂的类型 99

3.2离子交换剂的吸附能力 101

3.4缓冲液的选择 102

3.3各种离子交换适用的pH范围 102

3.5根据蛋白质的等电点来选择交换剂 104

3.6柱的选择、交换剂处理、再生和保存 104

3.7洗脱 105

3.8脱盐和浓缩 106

第四节 凝胶过滤层析 106

4.1凝胶的类别及使用范围 107

4.2使用凝胶层析应注意的问题 108

第五节 亲和层析 110

5.1供配基连接已活化的基质种类 110

5.2免疫亲和层析 111

5.3染料配基亲和层析 112

6.1电泳分析 114

第六节 蛋白质和酶的纯度鉴定 114

6.2不连续的盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳 115

第四章 蛋白质工程研究方法——蛋白质结构的分析方法 125

第一节 蛋白质晶体学方法 125

1.1概论 125

1.2单晶衍射法原理 126

1.3晶态蛋白质的结构分析 134

第二节 二维核磁共振方法 158

2.1核磁共振波谱学基本概念 158

2.2二维核磁共振波谱（2DNMR）基本原理 160

2.3用二维核磁共振波谱方法测定蛋白质空间结构的主要方法 164

第三节 蛋白质折叠的研究方法 171

3.1变复性过程的热力学与动力学研究 172

3.2折叠中间体与折叠途径 177

第四节 蛋白质的分子力学和分子动力学的研究 180

4.1分子力场 180

4.2能量极小化方法 183

4.3分子动力学方法 185

第五节 蛋白质工程计算机辅助分子设计 189

5.1蛋白质空间结构预测 189

5.2自由能的计算 192

第六节 蛋白质的序列分析 194

6.1蛋白质序列分析发展概况 194

6.2蛋白质序列分析在战术上的进展 195

6.4超微量蛋白质序列分析 198

6.3蛋白质序列分析的战略 198

第五章 蛋白质工程的主要研究方法——蛋白质功能的研究方法 205

第一节 酶学方法 205

1.1稳态动力学 205

1.2酶活性的测定与动力学常数的求算 211

1.3前稳态动力学 214

第二节 激素、生长因子和受本蛋白质的研究方法 219

2.1蛋白质和多肽激素功能的研究方法 220

2.2多肽生长因子研究方法 238

2.3受体蛋白质功能的研究方法 240

第三节 免疫活性蛋白质功能的研究方法 248

3.1概况 248

3.2抗体研究方法 249

3.3淋巴细胞表面标志的研究方法 271

3.4淋巴因子的研究方法 278

第四节 核酸结合蛋白的研究方法 283

4.1核酸结合蛋白的“螺旋—转折—螺旋”结构 283

4.2核酸结合蛋白的“锌指”结构 287

4.3核酸结合蛋白的“亮氨酸拉链”结构 289

4.4研究核酸结合蛋白质的几种方法 290

第六章 蛋白质工程的应用和发展前景 293

第一节 蛋白质结构与功能的理论研究 293

第二节 实际应用 301

2.1工业用酶的改造 301

2.2工业用酶的重建 317

编后语 319