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第一章 区带离心法入门 1

1.1．离心法在生物学中的主要应用 1

目 录 1

1.2．离心技术 2

1.2.1．分析超速离心法 2

1.2.2．差速沉淀法 4

1.2.3．速率区带离心法 6

1.2.4．等密度区带离心法 7

1.3.1．离心机 9

1.3．离心机和转头的发展 9

1.3.2．转头材料 11

1.3.3．转头形状 11

1.3.4．区带转头 12

1.4．离心技术的使用和限制 16

1.5．离心机实验室的设计 19

1.6．离心机的安全性 21

1.6.1．转头毁坏的原因和预防办法 21

1.6.1.2．腐蚀 23

1.6.1.1．过速 23

1.6.1.3．疲劳 24

1.6.1.4．高密度的梯度液 24

1.6.1.5．真空破坏 25

1.6.1.6．转头内液体冻结 25

1.6.2．离心机操作中的其它注意事项 25

1.6.2.1．靠近运转的转头 25

1.6.2.2．液雾的形成 26

1.6.2.3．电子线路的安全性 26

1.6.2.6．漏水 27

1.6.2.7．可燃的溶剂 27

1.6.2.4．转头的平衡和组装 27

1.6.2.5．离心机和转头的配合 27

1.7．转头的保养 28

1.7.1．转头的选择 28

1.7.2．制造转头材料的性质和保养 28

1.7.3．转头的洗涤和干燥 32

1.7.4．组装、拆卸和贮存 33

1.7.5．每个转头的保养 33

1.8．转头的保证寿命 35

第二章离心分离的理论 37

2.1．速率区带分离的理论 37

第九章密度梯度离心展望 2 38

2.1.1．颗粒的沉降理论 38

2.1.2．样品区带的稳定性 41

2.1.3．沉降区带的稳定性 47

2.2．等密度区带法的理论 49

2.2.1．等密度区带法分离的区带形状 49

2.2.2．密度梯度溶质在离心场中的再分布 50

2.2.3．转头对梯度形状的影响 53

2.3．密度梯度溶质对亚细胞结构的影响 54

第三章离心分离的条件 59

3.1．方法的选择 59

3.2．转头的选择 64

3.3．密度梯度材料 68

3.3.1．碱金属盐 68

3.3.2．小的亲水有机分子 69

3.3.3．高分子量的有机化合物 71

3.3.4．其它类型的密度梯度材料 72

3.3.5．梯度材料的选择 78

3.4.1．速率区带分离的梯度 79

3.4．梯度的选择 79

3.4.2．等密度分离的梯度 81

3.4.3．复合梯度的设计 82

第四章在普通转头中的离心 87

4.1．速率区带离心 87

4.1.1．密度梯度的制备 87

4.1.2．将样品铺于梯度上 93

4.1.3．离心 94

4.1.4．收取梯度 97

4.1.5．监测所替换的梯度 101

4.2．等密度区带离心 103

4.2.1．密度梯度的制备 103

4.2.2．将样品铺到梯度上 105

4.2.3．离心 106

4.2.4．替换和监测梯度 106

第五章在区带转头中的离心 108

5.1.1．转头的结构 110

5.1．普通的非再定向的区带转头 110

5.1.2．区带转头的类型 120

5.1.2.1．A-Ⅻ转头 120

5.1.2.2．Z-15转头 121

5.1.2.3．HS转头 122

5.1.2.4．B-Ⅳ转头 123

5.1.2.5．B-ⅩⅣ和B-ⅩⅤ转头 124

5.1.2.6．B-ⅩⅩⅨ和B-ⅩⅩⅩ转头 125

5.1.2.7．一次型和连续流动型可互换的转头 127

5.1.2.8．连续流动转头 129

6.1.2.9．其它转头 130

5.1.3．区带转头的操作 131

5.1.3.1．离心的准备 132

5.1.3.2．加梯度 141

5.1.3.3．加样品 143

5.1.3.4．加速、转动和减速 150

5.1.3.5．取样 155

5.1.3.6．监测和部分收集 161

5.1.4．附属装备 166

5.1.4.1．梯度仪 167

5.1.4.2．泵 168

5.1.4.3．折射仪和密度计 169

5.1.4.5．流动池 171

5.1.4.4．分光光度计、比色计和紫外计 171

5.1.4.6．温度计 172

5.1.4.7．灌注泵 172

5.1.4.8．闪频光源 172

5.1.4.9．记录器 172

5.1.4.10．冷却装备 173

5.1.4.11．次要的附件 173

5.1.4.12．部分收集器 174

5.1.4.13．积分仪 175

5.2．再定向区带转头 175

第六章 密度梯度离心部分收集各级分的分析 183

6.1．各级分的酶和化学分析 183

6.2．各级分的电子显微镜检测 184

6.3．密度梯度分离结果的分析 185

6.4．沉降系数的计算 189

第七章密度梯度离心的应用 190

7.1．活细胞的分离 190

7.2．哺乳动物组织细胞器的分离 193

7.2.1．粗制核级分的再分离和大片质膜的分离 194

7.2.1.1．提纯细胞核 196

7.2.2．线粒体级分的再分离 197

7.2.3．溶酶体级分的再分离 198

7.2.4．微粒体的再分离 202

7.2.5．分离核糖核蛋白体 206

7.2.6．染色质的分离 209

7.3．分离植物细胞的亚细胞结构 210

7.4．从单细胞生物分离亚细胞成分 213

7.5．大分子的分离 216

7.5.1．核酸 216

7.5.2．蛋白质 219

7.6．密度梯度离心在生物化学中的其它应用 220

7.6.1．血清脂蛋白的分离 220

7.6.2．分离病毒 223

7.7．密度梯度离心的其它应用 226

第八章离心分离时出现的假象 227

8.1．离心期间对颗粒的损伤 227

8.1.1．由沉淀引起的损伤 228

8.1.2．由高流体静压引起的损伤 229

8.1.3．由高浓度的梯度溶质引起的损伤 229

8.2．影响密度梯度收集的各级分精确测定的因素 230

8.2.1．梯度溶质和测定分离组分时所用试剂间的反应 231

8.2.2．对分析仪器操作的影响 232

8.2.3．梯度溶质对检定灵敏度的干扰 232

8.3.1．颗粒密度 234

8.3．测定颗粒密度和沉降系数中的误差 . 234

8.3.2．沉降系数 235

9.1．离心机设计 239

9.2．离心转头的发展 240

9.3．辅助系统的发展 242

9.4．离心方法的应用 243

附录 245

参考文献 253