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目录 1

第一章　引论 1

1.1　酶的概念 1

1.2　酶的催化特性 2

1.2.1　酶催化效率高 2

1.2.2　酶催化专一性强 2

1.2.3　酶对环境极敏感 2

1.2.4　酶在机体内受到严格的调控 2

1.3　酶的分类和命名 2

1.3.1 酶的国际分类命名系统 2

1.3.2　其它习惯归类命名法 5

1.4　酶的应用与应用酶学 6

1.4.1　酶的应用概说 6

1.4.2　酶学在几个应用领域的发展 7

1.4.3　应用酶学概念的提出 9

主要参考文献 10

第二章　酶催化作用的结构基础 11

2.1　酶分子结构概貌 11

2.1.1　酶蛋白的结构特征 11

2.1.2　酶分子的功能部位 15

2.1.3　酶分子氨基酸残基的功能类型 16

2.2　酶的活性部位 17

2.2.1　酶活性部位化学结构的鉴定 18

2.2.2　催化部位与底物结合部位 21

2.2.3 活性部位的重要残基或基团 23

2.2.4　酶活性部位区域的一级结构 24

2.2.5　几种氨基酸残基在酶活性部位的作用 24

2.3　酶的辅因子 26

2.3.1　辅酶和辅基 27

2.3.2　金属辅因子 35

2.4.1 结构残基和别构部位 37

2.4　酶分子的结构残基和非贡献残基 37

2.4.2 别构部位与活性部位的区别和联系 39

2.4.3　非贡献残基在酶分子中的作用 42

主要参考文献 45

第三章　酶生物合成的调节·酶的分泌 46

3.1 概述 46

3.1.1　酶合成调节与酶的生产 46

3.1.2　酶的分泌与酶的生产 46

3.1.3 不同生物细胞中蛋白质合成的特点 48

3.2　酶合成的调节 50

3.2.1 细胞增殖周期与酶的合成 50

3.2.2　酶的诱导和阻遏 51

3.2.3 营养源对酶合成的调节作用 55

3.2.4　RNA聚合酶与转录调控的关系 58

3.2.5　转译的调节 58

3.3.1　蛋白质分泌的假说 60

3.3　酶的分泌 60

3.3.2　跨膜运送的模型 61

3.3.3　信号肽及跨膜信息 61

3.3.4 同转译分泌和转译后分泌 62

3.3.5 真菌细胞的蛋白质分泌途径 63

3.3.6　革兰氏阴性细菌酶分泌问题的实际考虑 64

主要参考文献 65

第四章　酶在生物体的分布及酶组织化学原理 67

4.1　酶在生物体的分布 67

4.1.1　人和高等动物的酶分布 67

4.1.2　植物酶分布的某些特点 70

4.1.3 细胞亚微结构中酶的分布 73

4.2　酶组织化学的基本概念 76

4.2.1 酶组织化学的基本步骤 77

4.3　酶组织化学证明法的一般原理 79

4.2.3　酶组织化学必备的条件 79

4.2.2　酶的真反应和假反应 79

4.3.1　金属-金属盐法 80

4.3.2　偶联偶氮色素法（偶氮色素法） 81

4.3.3 色素形成法 82

4.3.4 色素底物法和色素染色法 83

4.3.5　标记底物法 84

4.3.6　底物薄膜法 84

4.3.7　底物荧光法 84

4.3.8　偏光显微镜法 84

4.3.9　免疫荧光法 84

4.3.10　酶标抗体法 85

4.3.11 合成法 86

4.3.12　锇黑法 86

主要参考文献 87

5.1.1　应用酶学中酶动力学的研究对象 88

5.1　酶反应的基础动力学 88

第五章　应用酶学中的物理化学原理 88

5.1.2　单底物反应动力学 89

5.1.3　双底物反应动力学 94

5.1.4　多底物反应动力学 97

5.2　酶的热力学基础和酶的热稳定性 97

5.2.1　酶催化反应的热力学性质 97

5.2.2　酶的热稳定性 100

5.2.3　酶促反应的“最适”温度 104

5.3　pH值、压力和非水介质对酶促反应的影响 104

5.3.1　pH值影响的一般表征 104

5.3.2　pH对酶、酶-底物复合物的影响 106

5.3.3　pH通过对底物离解作用的影响而影响酶反应速度 109

5.3.4　压力对酶促反应的影响 110

5.3.5　酶在非水介质中的反应 111

5.4.2　氧化还原电位 112

5.4.1　氧化还原的概念 112

5.4　氧化还原与酶作用 112

5.4.3　氧化还原与酶作用 114

5.4.4　金属酶类 115

主要参考文献 122

第六章　酶的抑制与激活 123

6.1 酶抑制和激活作用的分类 123

6.1.1　普通抑制与激活 123

6.1.2　底物或产物抑制与激活 124

6.1.3　别构抑制与激活 124

6.1.4 不可逆与可逆效应的区别 124

6.2　普通可逆抑制与激活作用动力学 125

6.2.1　竞争性抑制与激活 125

6.2.2　非竞争性抑制与激活 128

6.2.3　反竞争性抑制和混和抑制 129

6.3.1 底物抑制 132

6.3　底物抑制与产物抑制 132

6.3.2　产物抑制 133

6.4　别构抑制和别构激活 134

6.4.1　别构抑制和别构激活现象 134

6.4.2　别构酶的动力学性质 135

6.4.3　解释别构效应的两个模型要点 139

6.5　酶激活剂和抑制剂 142

6.5.1 酶激活剂及其应用 142

6.5.2　酶抑制剂及其应用 147

主要参考文献 153

第七章　酶分析法 155

7.1　酶分析法的一般概念 155

7.1.1　酶分析法的特征 155

7.1.2　酶分析法的意义 156

7.2　酶活力的测定 156

7.2.1　酶活力单位和反应初速度 156

7.2.2　反应条件的确定 158

7.2.3　测定方法 160

7.3　酶法分析 165

7.3.1　单酶反应定量法 165

7.3.2　偶联酶反应定量法 169

7.4　酶循环分析法 172

7.5 固定化酶在酶分析中的应用 174

7.5.1　酶（膜）电极 175

7.5.2　酶柱（管）感应分析器 176

主要参考文献 177

第八章　酶制剂的生产 178

8.1　概述 178

8.2　微生物酶的发酵生产 178

8.2.1　酶生产菌 178

8.2.3　生产菌种子制备 180

8.2.2　微生物酶制剂生产工艺流程 180

8.2.4　发酵方法 182

8.2.5　发酵条件 183

8.2.6　发酵生产设备概要 186

8.3　动植物原料酶的生产和组织培养 190

8.3.1　原料选取 190

8.3.2　取材的时宜 190

8.3.3　组织（细胞）培养法生产酶制剂的前景 191

3.4　酶的回收与成型 192

8.4.1　酶回收工艺流程设计原则 192

8.4.2　细胞破碎和酶液收集 192

8.4.3　净化处理 192

8.4.4　浓缩 193

8.4.5　分离和纯化 193

8.4.6　酶的剂型与保存 194

8.5.1　淀粉酶制剂的生产 195

8.5　酶制剂生产实例 195

8.5.2　菠萝蛋白酶生产工艺 197

主要参考文献 198

第九章　酶分离提纯和结晶的原理 199

9.1　酶分离提纯的一般程序 199

9.1.1　材料选择及其前处理 199

9.1.2　粗分级 201

9.1.3　液-液双水相萃取技术 203

9.1.4　细分级 206

9.2　酶分离纯化过程常用的几项技术 207

9.2.1 离心技术 207

9.2.2　吸附柱色谱法 209

9.2.3　离子交换色谱法 210

9.2.4　凝胶过滤色谱法 213

9.2.5　亲和色谱法 217

9.2.7　电泳法 219

9.2.6　其它色谱法 219

9.2.8　聚焦色谱法 221

9.2.9　膜分离技术 222

92.10　酶的结晶 227

9.3　酶的纯度鉴定及酶的保存 228

9.3.1　酶的纯度鉴定 228

9.3.2　酶的保存 229

主要参考文献 231

第十章　固定化酶 233

10.1　概述 233

10.1.1 固定化酶的涵义 233

10.1.2 固定化酶的优点与缺点 233

10.1.3　研究固定化酶的理论意义 234

10.2　固定化酶的制备 235

10.2.1 固定化酶制备的一般原则 235

10.2.2　酶的固定化方法 235

10.2.3　辅酶及偶联酶系的固定化 242

10.2.4　固定化多酶反应系统 243

10.3　固定化酶的性质 244

10.3.1 固定化对反应系统的影响 244

10.3.2 固定化酶的动力学性质 245

10.3.3 固定化酶反应条件的变化 247

10.3.4　固定化酶的稳定性 248

10.4　固定化细胞和固定化细胞器 250

10.4.1 细胞固定化方法 250

10.4.2 固定化对细胞生命活动的影响 251

10.4.3 固定化细胞器 251

10.5　酶反应器和固定化酶（细胞）的应用 252

10.5.1　酶反应器 252

10.5.2 固定化酶（细胞）的应用 254

主要参考文献 258

11.2　化学酶工程 260

11.2.1 自然酶的开发应用 260

11.1　基本概念 260

第十一章　酶工程 260

11.2.2　酶的化学修饰 261

11.2.3　酶的固定化 263

11.2.4　人工酶的研制 263

11.3　生物酶工程 264

11.3.1　酶基因的克隆和表达 264

11.3.2　酶基因的遗传修饰 265

11.3.3　酶的遗传设计 272

11.4　酶工程的一些新成就及新兴研究领域 273

主要参考文献 274

第十二章　工具酶 276

12.1　概述 276

12.2　基因工程中的工具酶 276

12.2.1 限制性核酸内切酶 276

12.2.2 DNA聚合酶 282

12.2.3　连接酶 283

12.2.4 用于基因工程的其它酶类 284

12.3　医药用工具酶 285

12.3.1　酶的诊断——血清酶 285

12.3.2　诊断用酶 291

12.3.3　治疗用酶 293

12.4　多肽链和糖链顺序分析用工具酶 296

12.4.1 多肽链氨基酸顺序分析用工具酶 296

12.4.2　糖链顺序分析用工具酶 297

主要参考文献 299

第十三章 同工酶分析技术 301

13.1　概述 301

13.1.1 同工酶的发现和应用 301

13.1.2 酶的多种形式和同工酶 301

13.1.3 同工酶的分类 302

13.1.4 同工酶的命名 303

13.2 同工酶的分离和活性检测 304

13.2.1 醋酸纤维素薄膜电泳法 304

13.2.2　淀粉凝胶电泳法 305

13.2.3　聚丙烯酰胺凝胶电泳法 305

13.2.4　薄层等电聚焦电泳 307

13.3　同工酶的鉴定 307

13.3.1　酶的表面多样性鉴定 307

13.3.2　专一性相近的酶的多种形式鉴定 309

13.3.3 同工酶类型鉴定 310

13.4　酶谱分析中的几项新技术 316

13.4.1 电泳酶谱复印技术 316

13.4.2 两种酶谱的同时显示 317

13.4.3　酶谱带分子量测定 317

13.4.4　酶谱的袖珍计算机描绘方法 318

主要参考文献 318