生物化学技术原理及应用PDF电子书下载

第一节 材料的选择与处理 3

一 材料的选择 3

第一章 生命大分子物质的制备 3

二材料的处理 4

第二节 确立测定方法 5

一 目的与要求 5

二 常用的测定方法 5

第三节 细胞的破碎 8

一 机械破碎 9

二 溶胀和自溶 9

一 抽提的含义 10

二 抽提有效成分的影响因子 10

三 化学处理 10

第四节 抽提 10

四 生物酶降解 10

第五节 浓缩 13

一 沉淀法 14

二 吸附法 14

三 超过滤法 14

四 透析法 14

一 纯化方案的设计 15

第六节 纯化方案的设计与评价 15

五 减压蒸馏法 15

六 冰冻干燥法 15

二 纯化方案的评价 17

第七节 有效成分纯度和性质的分析 18

第八节 应用实例 18

思考题与参考文献 19

一 基本原理 23

二 制备蛋白质 23

第一节 基本原理与沉淀类型 23

第二章 沉淀法 23

三 制备核酸 33

第二节 应用实例 36

一 脾磷酸二酯酶的纯化 36

二 细菌染色化DNA的制备 36

思考题与参考文献 37

第三章 吸附层析 39

第一节 吸附柱层析 40

一 常用术语 40

二 基本原理 41

三 吸附剂 42

四 洗脱剂 45

五 层析柱的制备与层析操作 45

六 应用与实例 48

第二节 薄层层析 51

一 操作及注意事项 52

二 应用实例 58

第三节 聚酰胺簿膜层析 59

一 基本原理 59

二 应用实例 59

思考题与参考文献 63

第四章 疏水层析 64

第一节 基本原理 64

第二节 操作与应用 65

一 层析拄的制备 65

二 加样与洗脱 66

三 应用实例 66

思考题与参考文献 69

第五章 离子交换层析 70

第一节 基本原理 70

一 分类 72

第二节 离子交换剂的分类及性质 72

二 性质 80

第三节 离子交换剂与缓冲液的选择 88

一 离了交换剂的选择 88

二 缓冲液的选择 89

三 加样量的确定 92

第四节 操作 92

一 离子交换剂的处理、再生和转型 92

二 分离物质的交换 93

三 物质的洗脱与收集 94

一 制备、纯化生命物质 96

第五节 应用 96

二 测定蛋白质的等电点 99

思考题与参考文献 100

第六章 凝胶过滤 101

第一节 凝胶的分类及性质 101

一 葡聚糖凝胶 102

二 琼脂糖凝胶 104

三 聚丙烯酰胺凝胶 106

四 Sephacry1 106

五 Superdex 108

第二节 基本原理 109

一 凝胶的选择和处理 111

第三节 操作 111

二 凝胶柱的制备 112

三 加样与洗脱 113

四 凝胶住的再生及保存 117

第四节 应用 118

一 脱盐和浓缩 118

二 分离生命物质 118

三 去热源物质 120

四 测定分子质量 120

思考题与参考文献 123

五 其他 123

第七章 亲和层析 124

第一节 基本原理 124

第二节 操作 126

一 基质的选择 126

二 配体的选择 127

三 亲和吸附剂的制备 129

四 特异性吸附 131

五 分离大分子物质 132

一 在配体和基质之间引入“手臂” 134

六 亲和层析柱的再生 134

第三节 提高吸附剂的操作容量 134

二 增加配体取代的程序 135

三 配体与基质以最小的链连接 137

四 基质多孔性的影响 137

五 其他 137

第四节 应用实例 138

一 纯化大分子物质 138

二 研究酶的结构与功能 141

三 实例 142

思考题与参考文献 145

第一节 基本原理 146

一 多缓冲剂和多缓冲剂交换剂 146

二 聚焦层析原理 147

第二节 操作 150

一 多缓冲剂的选择 150

二 多缓冲交换剂用量的确定 150

三 多缓冲交换剂的处理 151

四 样品的准备 152

五 上样和洗脱 152

一 分离模型蛋白质 153

六 样品中多缓冲剂的去除 153

第三节 应用 153

二 分离复杂的物质 154

三 鉴定某些酶的性质 154

思考题与参考文献 156

第九章 高效液相色谱 157

第一节 基本原理 158

第二节 反相高效液相色谱 161

一 固定相、流动相和色谱柱 162

二 分离纯化糖基化白蛋白肽片段 164

一 定性和定量分析 166

第三节 应用 166

二 测定酶活性 167

三 测定蛋白质分子质量 167

四 分离核酸和蛋白质 168

思考题与参考文献 174

第十章 固定化的酶与微生物 175

第一节 制备方法 176

一 固定化酶 176

二 固定化微生物 179

一 酶的相对活力 180

第二节 制品的性质 180

二 活力曲线与最适pH值 181

三 稳定性 182

四 米氏常数 183

五 其他 184

第三节 应用 184

一 工业方面 184

二 医学方面 185

三 生化分析方面 186

四 应用实例 188

思考题与参考文献 190

第十一章 标记 193

第一节 核酸标记 193

一 标记物的制备及类型 193

二 非核素标记 194

三 核素标记 208

四 标记物纯化 211

五 探针的鉴定 213

六 应用实例 216

一 标记方法 220

第二节 蛋白质(酶、抗体)标记 220

二 核素和非核素标记 226

思考题与参考文献 234

第十二章 重组DNA 235

第一节 重组DNA的部件 236

一 工具酶 236

二 载体 238

三 目的基因 241

第二节 重组 247

一 黏性末端连接法 247

四 T-A连接法 249

五 同聚物加尾连接法 249

二 平端连接法 249

三 平黏连接法 249

六 人工接头连接法 250

第三节 DNA扩增 252

一 重组DNA导入宿主细胞 252

二 重组体的筛选与鉴定 254

三 表达产物的纯化 256

三 RCR扩增及其产物纯化 257

二 反转录合成第一链cDNA 257

一 分离总RNA和mRNA 257

第四节 应用实例 257

四 PCR产物的克隆 258

五 重组质粒的提取及限制性内切核酸酶分析 258

思考题与参考文献 260

第十三章 DNA序列测定 260

第一节 双脱氧链终止法 260

一 基本原理 260

二 载体系统 262

三 测序试剂 265

四 测序操作 268

五 变性电泳 271

六 序列读取 271

第二节 PCR法 273

一 直接测序 273

二 循环测序 274

第三节 化学降解法 275

一 测序原理 276

二 一般程序 277

三 具体操作 277

四 应用实例 280

思考题与参考文献 281

第十四章 生物芯片 282

第一节 基因芯片 282

一 基本原理和工作流程 282

二 制备及操作 285

三 应用实例 291

第二节 蛋白质芯片 296

一 原理及特点 297

二 制备与操作 297

三 应用实例 299

一 芯片实验室的特点 303

第三节 芯片实验室 303

二 应用实例 304

思考题与参考文献 307

第十五章 聚合酶链反应 308

第一节 基本原理 308

一 反应系统 308

二 反应过程及条件 313

第二节 PCR的类型 315

一 普通PCR 315

三 反转录PCR 316

二 原位PCR 316

四 反向PCR 317

五 不对称PCR 318

六 巢式PCR 318

七 彩色PCR 319

第三节 应用 320

一 构建cDNA文库 320

二 直接测序 320

三 标记DNA探针 320

四 寻找新基因 320

思考题与参考文献 321

五 检测环境中的致病菌与指示菌 321

第十六章 细胞凋亡 322

第一节 基本原理与主要特性 322

一 基本原理 322

二 主要特性 334

第二节 检测细胞凋亡的方法 337

一 形态学 337

二 DNA片段 339

三 酶活性与组蛋白 340

四 流式细胞仪 342

一 抗肿瘤药物的研究和开发 344

二 疾病的诊断和治 344

第三节 应用 344

思考题与参考文献 346

第十七章 生物传感器 347

一 离子选择电极 348

二 生物活性材料 349

一 类型 350

二 制备 350

第二节 类型与制备 350

第三节 应用 351

一 工业方面 351

二 医学方面 352

三 环境监测方面 353

思考题与参考文献 353

第十八章 电泳 355

第一节 基本原理 356

第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 358

一 基本原理 359

二 一般操作 364

第三节 琼脂糖凝胶和半干式聚丙烯酰胺凝胶电泳 383

一 琼脂糖凝胶电泳 384

三 半干式聚丙烯酰胺凝胶电泳（分离DNA） 387

第四节 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 388

一 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 389

二 尿素-聚丙类酰胺凝胶电泳 390

三 SDS-尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳 391

第五节 聚丙烯酰胺凝胶电聚焦 392

一 基本原理 393

二 载体两性电解质的理化性质 393

三 载体两性电解质的pH范围与用量选择 394

四 测定蛋白质等电点的操作 395

第六节 毛细管电泳 399

一 基本原理与类型 399

二 电泳装置 402

三 应用实例 405

第七节 印迹法(转移电泳) 407

一 基本原理 408

二 操作及注意事项 409

三 应用 411

思考题与参考文献 413

一 抗体的性质 414

第十九章 免疫分析 414

第一节 抗体的性质、制备及纯化 414

二 多克隆抗体的制备 415

三 单克隆抗体的制备 421

四 抗体的检测 425

五 抗体的纯化 428

第二节 抗原抗体反应 430

一 凝集反应 430

二 免疫扩散 434

三 免疫电泳 436

五 免疫微球测定 449

四 固相免疫吸附（含ELISA） 449

思考题与参考文献 454

第二十章 气相色谱 456

第一节 基本原理 457

一 常用术语 457

二 原理 458

第二节 气相色谱仪的构造 460

一 载气流速的控制和测量 460

四 色谱柱 461

三 恒温室 461

二 进样系统 461

五 检定器 465

第三节 操作 466

一 操作要点 466

二 条件的选择 467

第四节 定性和定量检测 467

一 定性检测 467

二 定量检测 468

二 分析核酸 472

三 分析糖类物质 472

一 分析蛋白质和氨基酸 472

第五节 应用 472

四 分析脂肪酸 473

五 分析农药 474

思考题与参考文献 474

参考文献 475

附录 484

一、 常用数据 484

二、 常用缓冲液的配制 494

缩写词索引 499