家蚕生物反应器PDF电子书下载

第一章 家蚕的分子生物学 1

第一节 家蚕的生物学特性 1

1生活史 1

2蚕的外部形态 2

3家蚕的生长与发育 2

4养蚕的环境标准 3

第二节 杆状病毒基因组学 3

1杆状病毒及其侵染机制 3

2杆状病毒基因组学研究 7

3杆状病毒基因结构与功能 20

第三节 蚕蛹的小RNA研究 35

1蚕蛹小RNA的研究 35

2蛹mRNA-like小RNA的研究 43

第四节 家蚕蛹cDNA文库的构建和蛋白质组学 75

1家蚕蛹cDNA文库的构建 75

2家蚕蛹蛋白质组学 79

第五节 基于家蚕杆状病毒表面展示技术的膜蛋白组学 90

1基于家蚕杆状病毒表面展示技术分离膜蛋白的方法 91

第二章 以核型多角体病毒为载体的昆虫表达系统 98

第一节 昆虫细胞/NPV表达系统的原理和经典操作方法 98

1原理 98

2转移载体质粒的构建 98

3重组病毒的组建和筛选 101

第二节 最新发展的改进型操作方法 102

1 NPV DNA线性化 102

2 NPV DNA线性化并删除ORF1629 103

3在S．cerevisiae中YAC介导的NPV重组 103

4在E．coli中转座子介导的NPV重组 104

5体外定点重组 104

6 Bac to Bac系统 105

7杆状病毒表面展示技术 109

第三节 外源基因的表达、转录及转译后加工 112

1真核生物、病毒、细菌、霉菌等多种来源基因的表达 112

2转录后加工 112

3糖基化 113

4磷酸化、脂肪酰化和酰胺化 113

5蛋白水解 114

6细胞内定位和分泌 114

7高级结构的形成 114

第四节 昆虫细胞/NPV表达系统的优越性和缺陷 115

1昆虫细胞/NPV表达系统的优越性 115

2家蚕/BmNPV表达系统相对于Sf细胞/AcMNPV表达系统的优势 115

第五节 BmBacPAK病毒的组建 116

1 BmBacPAK病毒的组建技术 116

2 BmBacPAK病毒 118

第六节 BmBacPAK载体病毒在家蚕细胞中进行报告基因的表达 121

1质粒的构建 121

第七节 家蚕核型多角体病毒p26基因及同源重复区hr3的克隆和序列分析 125

第八节 家蚕核型多角体病毒同源重复区hr5的克隆和序列分析 128

1 BmNPV DNA KpnⅠ-D片段的克隆及两端序列分析 128

2 BmNPV hr5全序列分析 128

第九节 BmNPV hr5的重复起始区功能 130

1含BmNPV hr5结构的质粒在BmNPV感染的BmN细胞中的复制 130

2 pB hr5和pB hr5 a质粒在AcMNPV感染的Sf21细胞中的复制 131

3 AcMNPV的hr序列是一种增强子 131

4不同NPV在不同宿主细胞中功能和结构不同 132

第三章 家蚕组织细胞系的构建 133

第一节 家蚕细胞研究概述 133

1全能性和多能性昆虫干细胞 134

2限制性和单能性昆虫干细胞 137

第二节 家蚕组织细胞系的建立 140

1细胞系的核型分析 140

2细胞系的有丝分裂 141

3细胞系的同工酶检测 142

4细胞对BmNPV的敏感性分析 142

5家蚕胚胎细胞系的构建 143

6家蚕卵巢细胞系的建系方法 144

附录 145

1细胞培养用液的配制与消毒 145

2培养细胞的细胞生物学 147

3家蚕细胞显微注射技术 154

第四章 家蚕生物反应器及其应用 157

第一节 何谓家蚕生物反应器 157

1家蚕生物反应器的定义、分类及建立方法 157

2转基因家蚕 157

3家蚕杆状病毒表达载体系统（BmNPV） 159

第二节 利用家蚕生物反应器生产生物制品 162

1多肽与蛋白质类药物给药系统的研究状况 162

2家蚕生物反应器生产重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 169

3家蚕生物反应器表达霍乱毒素B亚基（CTB）与胰岛素B链融合蛋白对治疗糖尿病的研究 190

4家蚕生物反应器表达的人破骨细胞形成抑制因子及其突变体生物活性研究 230

5重组人促红细胞生成素（EPO）胶囊的药效学研究 235

6家蚕杆状病毒表达系统表达的人乳铁蛋白rhLF的药效学研究 237

第五章 家蚕生物反应器的应用前景 241

1家蚕生物反应器的特点 242

2家蚕生物反应器的主要应用方向 243

3家蚕生物反应器的主要应用现状 244

4家蚕生物反应器发展趋势 246

5家蚕生物反应器生产新型人用禽流感疫苗 247

第六章 家蚕生物反应器生产生物制品的标准 281

1重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子胶囊中试产品制造和检定规程草案 281

附件一 rhGM-CSF生物活性测定 285

附件二 外源病毒污染检查 287

附件三 ELISA检测rhGM-CSF含量 287

附件四 蛋白质电泳 288

附件五 家蚕表达的rhGM-CSF的纯化 289

2重组人的促红生成素（EPO）胶囊的中试产品制造和检定规程草案 290

附件一 ELISA检测EPO含量 294

附件二 家蚕表达的EPO的纯化 295

3重组人胰岛素（CTB）胶囊中试产品制造和检定规程草案 295

附件一 外源病毒污染检查 299

附件二 ELISA检测CTB含量 299

附件三 蛋白质电泳 300

附件四 家蚕表达人胰岛素（CTB）的纯化 302

4重组人破骨细胞形成抑制因子（OPG）胶囊中试产品制造和检定规程草案 302

5重组人乳铁蛋白（hLF）胶囊中试产品制造和检定规程草案 306

附件一 外源病毒污染检查 310

附件二 ELISA检测hLF含量 310

附件三 蛋白质电泳 311

附件四 家蚕表达的hLF的纯化 312

参考文献 314