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第一章 恶性肿瘤发生的分子机制 1

第一节 分子肿瘤学概述 1

一、恶性肿瘤细胞的生物学特性 1

二、恶性肿瘤发生的机制 2

第二节 癌基因致癌的分子机制 2

一、病毒癌基因 2

二、细胞癌基因与病毒癌基因的关系 5

三、原癌基因激活机制与肿瘤发生 6

四、原癌基因表达产物及其分类 10

第三节 抑癌基因及其抑癌基因的致癌机制 11

一、抑癌基因 11

二、抑癌基因的作用及各种抑癌基因的致癌机制 11

三、抑癌基因改变的分子基础 15

第四节 肿瘤恶性表型的其他相关基因 15

第五节 研究恶性肿瘤分子机制的医学意义 16

第二章 细胞凋亡及基因调控 18

第一节 细胞凋亡的特征 18

第二节 影响细胞凋亡的因素 20

一、诱导细胞凋亡的因素或因子 20

二、细胞生长因子去除后的细胞凋亡 21

三、细胞凋亡的抑制 22

第三节 细胞凋亡相关基因及其调控的分子机制 23

一、ced基因家族 23

二、bcl-2基因家族 23

三、ICE家族 24

四、其他基因与蛋白 26

第四节 细胞凋亡实验常用的检测方法 27

一、检测药物对肿瘤细胞的抑制效应的MTT法 27

二、荧光法 27

三、DNA琼脂糖凝胶电泳法 27

四、透射电镜形态学观察法 28

五、流式细胞仪检测法 28

六、其他方法 29

第五节 bcl-2凋亡基因表达的检测技术 29

一、原理 29

二、方法 29

第六节 细胞凋亡的医学意义 31

一、凋亡在发生学中的作用 31

二、凋亡与疾病 32

第三章 基因治疗的原理和策略 33

第一节 基因治疗的概念及遵循原则 33

第二节 基因治疗的程序 33

一、目的基因的准备 33

二、受体细胞（靶细胞）的选择和培养 34

三、载体的选择 34

四、目的基因导入靶细胞的基因转移方法 34

第三节 基因治疗的策略 37

一、缺陷基因的基因置换疗法 37

二、基因修饰疗法 37

三、基因失活疗法 37

第四节 基因治疗的临床应用 37

一、遗传病的基因治疗 37

二、肿瘤的基因治疗 38

三、抗病毒的基因治疗 43

第五节 基因治疗的问题与前景 44

一、基因治疗的问题 44

二、基因治疗的前景 44

第四章 肿瘤基因治疗的研究进展 45

第一节 选择肿瘤基因治疗策略的原则及研究进展 45

一、特异性基因治疗策略 45

二、非特异性杀伤肿瘤细胞策略 47

三、选择基因治疗策略的“三性”原则 48

四、结论与展望 49

第二节 肿瘤基因治疗靶基因选择的研究进展 49

一、抑制癌基因的活性 49

二、恢复抑癌基因活性 50

三、抑制血管生成 50

四、免疫基因治疗 51

五、自杀基因疗法 51

六、肿瘤多药耐药基因治疗 51

七、目前肿瘤基因治疗研究面临的主要问题及展望 52

第三节 生物类基因治疗载体的特性和选择的研究进展 54

一、病毒载体 55

二、细菌载体 59

三、人工染色体载体 59

第四节 基因治疗中非病毒载体的种类和基因导入方法 60

一、介导DNA转移的物理方法 60

二、阳性脂质体介导法 62

三、阳离子多聚物介导法 62

四、复合载体导入法 63

五、抗体介导的基因转移 64

六、新型纳米材料 64

七、细胞转导肽介导的靶向基因传递系统 65

第五节 siRNA和RNAi 65

一、RNAi的发现过程 65

二、RNAi机制 66

三、dsRNA的构建 66

四、RNAi的应用 67

第六节 肿瘤基因治疗新思路 68

一、肿瘤基因治疗的反思 68

二、裂癌溶瘤病毒的应用 69

参考文献 72

第五章 人IL-24基因克隆、重组表达及抗肿瘤效应 80

第一节 IL-24的发现及其生物学特性 80

一、IL-24基因的结构及特点 80

二、IL-24的生理生化特征 81

三、IL-24受体 82

四、IL-24信号转导 82

五、IL-24的生物学作用 82

六、前景展望 83

第二节 IL-24基因治疗肿瘤机制 84

一、IL-24与癌基因和抑癌基因 84

二、IL-24与肿瘤细胞凋亡 84

三、IL-24与血管内皮 85

四、IL-24与信号传导 85

五、IL-24与诱导细胞分化 86

六、IL-24与细胞周期 86

第三节 人IL-24基因克隆、重组表达 86

一、人IL-24基因克隆和测序 86

二、人IL-24基因与pBV220表达质粒的重组和在E.Coli中的表达 87

三、人IL-24基因与pET-21a（＋）表达质粒的重组和在E.Coli中的表达 88

四、人IL-24基因与pcDNA 3.0真核表达质粒的构建和表达及其抑瘤效应 88

第四节 rhIL-24蛋白对黑色素瘤细胞的体内外抑瘤效应 96

一、皮肤黑色素瘤的治疗 96

二、rhIL-24蛋白对B16黑色素瘤细胞的体内外抑制作用 98

三、rhIL-24蛋白对A375黑色素瘤细胞的体内外抑制作用 101

第五节 rhIL-24蛋白对肺癌的抑瘤效应 107

一、IL-24与肺癌 107

二、rhIL-24对A549肺癌细胞的体内外抑制作用 109

第六节 rhIL-24蛋白对胃癌的抑瘤效应 113

一、rhIL-24蛋白对SGC7901胃癌细胞的体外抑制作用 113

二、rhIL-24蛋白对胃癌细胞荷瘤裸鼠的体内抑瘤效应 115

第七节 rhIL-24蛋白对Hela细胞的抑制作用 119

第八节 rhIL-24蛋白对乳腺癌的体内抑瘤效应 122

第九节 在原核细胞和CHO细胞中表达的rhIL-24蛋白的免疫刺激活性及血管形成抑制作用 127

一、在原核细胞中表达的rhIL-24蛋白的免疫刺激活性检测 127

二、在原核细胞中表达的rhIL-24蛋白抑制血管形成的功能 127

三、在CHO细胞中表达的rhIL-24蛋白的免疫刺激功能 128

四、在CHO细胞中表达的rhIL-24蛋白对血管形成的抑制作用 128

参考文献 130

第六章 hIL-24基因与腺病毒载体构建及抗肿瘤的基因治疗 136

第一节 hIL-24基因与腺病毒载体的构建与鉴定 137

一、hIL-24转移载体质粒的构建 137

二、重组腺病毒载体构建 138

三、重组病毒子的获得 138

四、重组病毒子鉴定及效价测定 138

第二节 Ad.hIL-24对肝癌细胞及其移植瘤的体内外的抑制作用及机制 139

一、Ad.hIL-24对SMMC 7721肝癌细胞的体外生长抑制作用和诱导细胞凋亡的功能 139

二、Ad.hIL-24对肝癌荷瘤裸鼠的体内抗瘤效应 142

三、Ad.hIL-24对H22腹水型肝癌荷瘤小鼠的抑瘤效应和对免疫功能的影响 146

第三节 Ad.hIL-24对胰腺癌细胞及其移植瘤的体内外抑制作用 148

一、Ad.hIL-24对胰腺癌PATU8988细胞的体外抑制作用 149

二、Ad.hIL-24抑制裸鼠体内肿瘤的生长 151

第四节 Ad.hIL-24对Hep-2喉癌细胞的生长抑制及诱导细胞凋亡作用 153

参考文献 158

第七章 肿瘤生长抑制因子基因（ING4）的基因克隆和肿瘤基因治疗 160

第一节 ING4基因的发现与作用机制 160

一、ING4基因结构与定位 160

二、ING4基因在肿瘤中的表达异常与突变 160

三、ING4基因的作用机制 161

第二节 ING4基因克隆、重组表达和抑瘤效应及机制 163

一、ING4基因克隆和pcDNA3.0重组表达质粒的构建与鉴定 163

二、ING4基因重组表达质粒对Hela细胞的抗肿瘤效应 165

三、ING4基因重组表达质粒对肝癌细胞SMMC7721的抗肿瘤效应 166

第三节 mING4基因腺病毒表达载体的构建和对肝癌细胞的抑制作用 168

一、mING4基因腺病毒载体的构建 168

二、mING4基因腺病毒载体对肝癌细胞的抑制作用 170

第四节 Ad.(m→h)ING4对A549肺癌细胞体内外生长的抑制作用及机制 172

一、mING4基因的人源化改造及腺病毒载体的构建 172

二、Ad.(m→h)ING4对A549肺癌细胞生长的体外抑制作用及机制 176

三、Ad.(m→h)ING4的体内抗肿瘤作用 178

四、Ad.(m→h)ING4对A549肺癌细胞分泌VEGF和IL-6,IL-8的影响 179

五、Ad.(m→h)ING4对A549肺癌细胞体外转移浸润及MMP-2,MMP-9表达的影响 183

第五节 Ad.(m→h)ING4对K562白血病细胞凋亡的影响 186

第六节 Ad.hING4诱导C6鼠胶质瘤细胞凋亡 189

第七节 Ad.hING4对SGC7901人胃癌细胞的影响 193

第八节 Ad.hING4诱导乳腺癌细胞的凋亡 195

参考文献 197

第八章 PTEN抑癌基因克隆、重组表达和基因治疗 202

第一节 PTEN与肿瘤 202

一、PTEN命名与结构 202

二、PTEN的生物学功能 203

三、PTEN的作用机制 204

四、PTEN的突变与肿瘤的关系 205

五、以PTEN为靶点的研究 206

第二节 PTEN基因克隆和腺病毒载体构建及鉴定 207

一、PTEN基因克隆 207

二、重组腺病毒载体的构建及鉴定 207

三、重组病毒子Ad.PTEN的包装及鉴定 208

第三节 Ad.PTEN对A549肺癌细胞体内外生长的影响 209

一、Ad.PTEN体外对A549肺癌细胞生长的影响 209

二、Ad.PTEN对A549肺癌细胞荷瘤裸鼠的肿瘤抑制作用 211

第四节 Ad.PTEN对A549肺癌细胞分泌VEGF和IL-6,IL-8的影响 212

第五节 Ad.PTEN对ECV304细胞生长及分泌VEGF的影响 215

参考文献 217

第九章 E1A基因克隆和裂解型腺病毒载体构建及对肿瘤的基因治疗 220

第一节 E1A与肿瘤 220

一、E1A基因结构及功能 220

二、E1A基因的抗肿瘤作用机制 220

第二节 E1A基因克隆和裂解型腺病毒载体构建及鉴定 222

一、E1A转移质粒的构建 222

二、重组腺病毒质粒的获得 222

三、重组病毒子的获得 223

四、病毒效价的测定 224

五、重组病毒子的鉴定 224

第三节 rAd.E1A对肝癌细胞的体内外生长抑制作用及机制 225

一、rAd.E1A对肝癌细胞的体外生长抑制作用及机制 225

二、rAd.E1A对肝癌细胞的体内生长抑制作用及机制 228

第四节 rAd.E1A对H22腹水型肝癌细胞荷瘤小鼠移植瘤的抑瘤效应及对免疫功能的影响 232

第五节 rAd.E1A对ECV304人血管内皮细胞的影响 234

参考文献 236

第十章 IL-17F基因克隆、重组表达和基因治疗 239

第一节 IL-17F的发现及生物学特性 239

一、染色体定位和基因结构 239

二、表达谱 240

三、同源性分析和蛋白结构 240

四、受体及信号传导 241

五、主要生物学活性 241

第二节 hIL-17F基因克隆及在大肠杆菌中的表达 243

第三节 hIL-17F融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其生物学活性的研究 246

一、GST-hIL-17F融合蛋白的表达 246

二、GST-hIL-17F对ECV304细胞的生长抑制作用 248

三、GST-hIL-17F对鸡胚绒毛尿囊膜血管形成的影响 249

第四节 反转录病毒表达hIL-17F对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响 250

参考文献 257

第十一章 人VEGF发夹状核酶基因对肿瘤基因的治疗 260

第一节 VEGF与肿瘤发生及其发夹状核酶抗肿瘤作用机制 260

第二节 人VEGF发夹状核酶对肝癌细胞体内外抑瘤效应 263

参考文献 269

第十二章 人抑瘤素M基因（hOSM）表达和抑瘤效应 271

第一节 抑瘤素M的生物学特性及作用机制 271

第二节 hOSM基因克隆及在COS7细胞中瞬时表达 273

第三节 hOSM基因在WI38细胞中的表达及其功能 276

第四节 hOSM基因重组反转录病毒载体的构建及鉴定 279

参考文献 283

第十三章 干扰素λ1（IFN-λ1）和干扰素ε（IFN-ε）的抗肿瘤效应 285

第一节 新型Ⅰ类干扰素 285

一、干扰素的分类 285

二、新型Ⅰ类干扰素的生物学特性 285

三、Ⅰ类干扰素受体 286

四、Ⅰ类干扰素信号传导通路 287

五、新型Ⅰ类干扰素的功能 287

第二节 hIFN-ε在CHO细胞中的表达及其生物学活性的研究 289

第三节 hIFN-λ和hIFN-ε基因在WI38细胞中的表达及其活性比较 292

参考文献 296

第十四章 人白血病抑制因子基因（hLIF）表达的抗肿瘤效应 298

第一节 白血病抑制因子 298

一、LIF的结构及其作用机制 298

二、LIF与胚胎干细胞 299

三、LIF与造血系统 299

四、LIF与神经系统 300

五、LIF与骨骼改建 300

六、LIF与内分泌系统 301

七、LIF与HIV-1感染 301

第二节 反转录病毒载体介导的hLIF基因真核稳定表达体系的建立 302

第三节 rhLIF与hIL-24基因协同诱导HL60细胞的凋亡 305

参考文献 310

后记 312