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第一章 光学显微镜 1

第一节 普通光学显微镜 1

一、光学显微镜成像原理 1

二、光学显微镜基本结构 2

三、光学显微镜技术指标 4

四、光学显微镜照明技术 7

五、光学显微镜使用与保养 8

第二节 倒置显微镜 9

第三节 相差显微镜 10

一、相差显微镜成像原理 10

二、相差显微镜装置 12

第四节 荧光显微镜 13

一、荧光的产生 13

二、荧光显微镜组成 14

三、荧光素 16

四、荧光显微镜主要用途 16

五、荧光显微镜使用的主要注意事项 17

第五节 激光扫描共聚焦显微镜 18

一、激光扫描共聚焦显微镜工作原理 18

二、激光扫描共聚焦显微镜扫描方式 19

三、激光扫描共聚焦显微镜技术特点 21

四、激光扫描共聚焦显微镜主要用途 21

第二章 光镜标本基本制作技术 24

第一节 取材及固定 24

一、动物致死 24

二、取材及注意事项 25

三、组织固定 26

四、固定液 28

第二节 固定后处理及石蜡切片 34

一、组织修整 34

二、组织洗涤 35

三、组织脱水 35

四、组织透明 37

五、组织浸蜡 38

六、石蜡包埋 39

七、石蜡切片 40

第三节 冰冻切片 43

一、冰冻切片原理 44

二、冰冻切片过程 44

三、冰冻切片注意事项 45

第四节 振动切片 45

一、振动切片原理 46

二、振动切片过程 46

三、振动切片注意事项 47

第五节 苏木素-伊红染色方法 48

一、染料与染色 48

二、苏木素-伊红染色基本原理 49

三、苏木素-伊红染液配制 49

四、脱蜡、水洗、脱水和透明等的作用 52

五、染色程序 53

六、染色注意事项 54

第三章 光镜标本特殊染色技术 56

第一节 固有结缔组织特殊染色方法 56

一、胶原纤维特殊染色 56

二、弹性纤维特殊染色 58

三、网状纤维特殊染色 60

四、胶原纤维、弹性纤维和网状纤维特殊染色 62

五、巨噬细胞与成纤维细胞天青-伊红-瑞氏染色 63

六、浆细胞天青A-伊红染色 63

七、肥大细胞中性红染色 63

第二节 血液和骨髓涂片特殊染色方法 64

一、Wright染色 64

二、Giemsa染色 65

三、Wright-Giemsa混合染色 65

第三节 肌组织特殊染色方法 66

一、Mallory磷钨酸苏木素染色 66

二、心肌闰盘碘酸钠-苏木素块染 67

三、Nagar-Olsen染色 67

第四节 神经组织特殊染色方法 68

一、神经元胞体特殊染色 68

二、尼氏体特殊染色 71

三、神经纤维特殊染色 72

四、神经末梢特殊染色 75

五、突触特殊染色 76

六、髓鞘特殊染色 77

七、溃变神经纤维特殊染色 79

八、神经胶质细胞特殊染色 80

第五节 内分泌系统特殊染色方法 84

一、弥散神经内分泌系统细胞特殊染色 84

二、脑垂体细胞特殊染色 88

三、胰岛特殊染色 90

第六节 肝脏特殊染色方法 92

一、贮脂细胞特殊染色 92

二、肝巨噬细胞特殊染色 93

三、胆小管特殊染色 93

第四章 光镜标本组织（细胞）化学技术 95

第一节 组织（细胞）化学基本方法 95

一、固定 95

二、染色显示 95

第二节 核酸的组织（细胞）化学方法 97

一、Feulgen反应显示DNA 97

二、荧光Feulgen反应显示DNA 98

三、Schiff试剂块染显示DNA 99

四、甲基绿-派洛宁改良法显示核酸 99

五、Hoechst 33342荧光显示DNA 100

六、吖啶橙荧光显示核酸 100

七、吖啶橙荧光区别死活细胞 101

第三节 蛋白质组织（细胞）化学方法 101

一、氨基显示 102

二、羧基显示 103

三、碱性蛋白质显示 104

四、酪氨酸、色氨酸和精氨酸显示 105

五、双硫键和SH基显示 107

第四节 脂类组织（细胞）化学方法 108

一、标本处理 109

二、染色显示 109

第五节 碳水化合物组织（细胞）化学方法 115

一、固定 115

二、染色显示 116

第六节 酶组织（细胞）化学方法 123

一、酶基本概念和种类 123

二、酶的保存 123

三、影响酶活性的因素 124

四、捕捉反应的种类 124

五、对照片使用 124

六、注意事项 125

七、常用酶组织（细胞）化学方法 125

第五章 光镜标本免疫组织（细胞）化学技术 142

第一节 免疫组织（细胞）化学基本方法 142

一、取材、固定及切片等材料准备 142

二、基本方法 144

第二节 免疫荧光组织（细胞）化学方法 150

一、荧光素 150

二、免疫荧光组织（细胞）化学法 151

三、注意事项 153

第三节 免疫酶组织（细胞）化学方法 154

一、标记用酶 154

二、标记用酶显色 155

三、标本复染、脱水、透明和封片 158

四、酶标抗体方法 159

五、非标记抗体酶方法 160

六、注意事项 164

第四节 亲和免疫组织（细胞）化学方法 164

一、生物素-（链霉）亲和素免疫组织（细胞）化学法 165

二、葡萄球菌A蛋白免疫组织（细胞）化学法 169

第五节 双重免疫组织（细胞）化学方法 169

一、双重免疫荧光组织（细胞）化学法 169

二、双重免疫酶组织（细胞）化学法 172

三、连续切片双重免疫酶组织（细胞）化学法 178

四、注意事项 179

第六章 光镜标本杂交组织（细胞）化学技术 181

第一节 杂交组织（细胞）化学基本方法 181

一、样本固定 181

二、杂交前准备 182

三、杂交 185

四、杂交后处理 186

五、显色 187

六、对照组设计和结果判断 189

第二节 DNA分子杂交组织（细胞）化学方法 189

一、生物素标记DNA探针检测靶DNA 190

二、碱性磷酸酶标记寡核苷酸探针检测靶DNA 192

三、荧光标记DNA探针检测染色质或染色体 194

第三节 RNA分子杂交组织（细胞）化学方法 200

一、cRNA探针检测组织中RNA 200

二、cDNA探针检测体外培养细胞中RNA 205

三、寡核苷酸探针检测组织切片中RNA 207

第四节 原位PCR方法 210

一、直接法原位PCR 210

二、间接法原位PCR 212

三、原位反转录PCR 214

四、原位免疫PCR 216

第五节 双重杂交组织（细胞）化学方法和原位杂交与免疫组化双重染色方法 217

一、双重杂交组织（细胞）化学法 218

二、原位杂交与免疫组化双重染色法 220

第七章 光镜标本显微摄影技术 222

第一节 显微摄影术常用装置 222

一、显微摄影用显微镜 222

二、显微摄影装置 223

第二节 感光材料与性能 227

一、光学显微摄影的感光材料 227

二、数码相机的技术指标 229

第三节 曝光时间及滤色片选择 230

一、曝光时间确定 230

二、滤色片使用 231

第四节 显微摄影操作 233

一、光学相机显微摄影操作步骤 233

二、数码相机显微摄影操作步骤 233

三、放大倍数确认 234

四、显微摄影的注意事项 235

第五节 胶片冲洗及照片扩印 236

一、黑白胶片和照片的显、定影液配方 236

二、黑白胶片冲洗（显影罐中显影） 238

三、黑白照片印相与放大 238

第八章 光镜标本显微图像处理与分析技术 240

第一节 光镜标本显微图像分析系统 240

一、光镜标本显微图像分析系统硬件组成 240

二、光镜标本显微图像分析系统软件组成 242

第二节 生物光镜标本显微图像处理 244

一、图像预处理 245

二、图像分割 248

三、生物光镜标本显微图像特点 253

第三节 生物显微图像分析 255

一、二维几何参数测量 255

二、体视学参数测量 257

三、光度学参数测量 265

第四节 生物显微图像分析质量控制 268

一、图像分析的误差因素 268

二、图像分析误差的计算 270

三、图像分析的误差控制 271

参考文献 272

附录1 生物光镜标本技术中常用缓冲液配制 273

附录2 生物光镜标本技术中常用参考杂志 282

附录3 生物光镜标本技术中常用参考网站 284