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第一章 医用光学显微镜使用技术 1

第一节 概述 1

第二节 显微镜的基本结构 1

一、光学系统 1

二、机械系统 1

三、照明部分 3

第三节 显微镜的使用与保管 3

一、显微镜的调试与使用方法 3

二、显微镜的维护、清洁与保管 5

第四节 其他常见医用光学显微镜简介 5

一、相差显微镜技术 5

二、荧光显微镜技术 7

第五节 本章实训 9

【实训项目一】医用普通光学显微镜的使用 9

【实训项目二】倒置相差显微镜的使用 10

第二章 玻片标本的制作与染色技术 11

第一节 玻片标本的制作 11

一、玻片标本类型 11

二、常用玻片标本的制作方法 12

第二节 玻片标本的染色 13

一、染料分类及染色原理 13

二、几种常用染料 14

三、常用染料的染色方法 15

第三节 本章实训 17

【实训项目】血液涂片制作及瑞氏染色 17

第三章 化学基本操作 19

第一节 常用化学实验器材的识别及清洗 19

一、常用化学实验器材的识别 19

二、几种常用清洁液的配制和应用 19

三、玻璃仪器清洗方法 24

第二节 常用量器的使用 25

一、托盘天平的使用 25

二、吸量管、移液管的使用 25

三、容量瓶的校准与使用方法 27

第三节 固体与液体物质的量取 29

一、粉末状固体药品的取用 29

二、块状固体药品的取用 29

三、液体药品的取用 29

第四节 试剂的配制方法及质量保证 30

一、化学试剂的规格 30

二、各种浓溶液的配制方法及质量保证 31

第五节 物质的溶解、过滤和蒸发 32

一、溶解 32

二、过滤 32

三、蒸发 32

第六节 分析天平的使用 33

一、分析天平的分类 33

二、分析天平的结构 33

三、分析天平的称量方法 33

四、称量练习 36

第七节 玻璃工操作和塞子钻孔 37

一、玻璃工操作 37

二、塞子钻孔 38

第八节 本章实训 39

【实训项目一】氯化钠的提纯 39

【实训项目二】分析天平的使用 41

第四章 离心技术 42

第一节 离心分离原理 42

一、基本原理 42

二、离心力 42

三、相对离心力 42

四、沉降速度 43

五、沉降系数 43

六、沉降时间（离心时间） 43

第二节 离心机的分类及用途 43

一、离心机的分类 43

二、离心机的基本结构 44

三、离心技术在医学实验中的应用 44

第三节 常见离心机的操作程序及注意事项 45

一、普通低速离心机的操作程序 45

二、微量台式高速离心机的操作程序 46

三、LG10-2.4A型高速离心机操作程序 47

四、Beckman冷冻离心机操作程序 48

第四节 本章实训 50

【实训项目】血清标本的分离与储存 50

第五章 电泳技术 52

第一节 电泳的基本原理及用途 52

一、基本原理 52

二、几种电泳技术的用途 53

第二节 电泳装置的组成 53

一、电泳仪（直流电源） 54

二、电泳槽 55

第三节 本章实训 55

【实训项目一】醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质 55

【实训项目二】琼脂糖凝胶电泳分离DNA 57

第六章 分光光度技术 60

第一节 基本原理及用途 60

一、分光光度计的基本原理 60

二、分光光度计的应用 61

第二节 分光光度计的基本构成 62

一、光源 62

二、单色器 63

三、吸收池 63

四、检测器 63

五、信号显示系统 64

第三节 几种常见分光光度计的使用 64

一、721分光光度计的基本操作 64

二、722分光光度计的基本操作 64

三、UV-730紫外-可见分光光度计的基本操作 65

第四节 本章实训 66

【实训项目一】Spectrumlab 22 PC分光光度计的使用及硫氰酸汞比色法测定血清氯化物 66

【实训项目二】UV-730紫外-可见分光光度计的使用及硫氰酸汞比色法测定血清氯化物 68

第七章 蛋白质分离纯化技术简介 71

第一节 蛋白质分离纯化的一般程序 71

第二节 材料选择及前处理 71

一、材料的选择 71

二、组织和细胞的破碎方法 72

第三节 蛋白质粗分离方法 73

一、盐析法 73

二、等电点沉淀法 74

三、低温有机溶剂沉淀法 74

第四节 蛋白质的进一步纯化 74

一、凝胶过滤层析法 75

二、离子交换层析法 75

三、亲和层析法 75

第五节 本章实训 76

【实训项目】盐析法纯化免疫球蛋白 76

第八章 层析技术 79

第一节 概述 79

一、层析技术的分类 79

二、层析法的基本原理 80

第二节 层析参数 80

一、层析流出曲线 80

二、保留值 81

第三节 几种常用层析法 82

一、离子交换柱层析法 82

二、凝胶柱层析法 83

三、亲和层析法 84

四、薄层层析法 84

第四节 本章实训 88

【实训项目一】离子交换层析法测定血液样品中糖化血红蛋白含量 88

【实训项目二】葡聚糖SephadexG-150分离血清蛋白质 89

【实训项目三】薄层层析法分析食品中的着色剂 91

第九章 动物免疫血清制备 94

第一节 免疫原的制备 94

一、免疫原的制备 94

二、免疫佐剂的制备 94

第二节 动物免疫接种及抗血清制备 95

一、动物免疫接种 95

二、动物抗血清的采集 96

三、抗血清的分离 96

第三节 抗体的纯化、鉴定及保存 96

一、抗体的纯化和鉴定 96

二、抗体的保存 97

第四节 本章实训 97

【实训项目一】绵羊红细胞抗原及免疫血清制备 97

【实训项目二】动物免疫血清的鉴定和保存 99

第十章 核酸的分离纯化技术 101

第一节 核酸分离纯化技术的基本原则 101

第二节 苯酚／氯仿抽提DNA的原理及要求 102

一、核酸提取的主要步骤 102

二、苯酚／氯仿抽提DNA的原理 103

三、试剂配制要求及作用 103

第三节 碱变性法提取质粒DNA 103

一、提取DNA的目的 103

二、碱裂解法原理 104

三、主要试剂及作用 104

四、碱变性抽提质粒DNA的主要步骤 104

第四节 真核细胞总RNA的提取 105

一、异硫氰酸胍／苯酚／氯仿抽提法分离总RNA的原理 105

二、抑制RNA酶的活性 105

第五节 核酸定量技术 105

一、核酸定量方法及原理 105

二、分光光度法测定核酸浓度的方法 106

第六节 本章实训 107

【实训项目一】大肠杆菌染色体DNA的分离纯化 107

【实训项目二】碱变性法小量提取PUC质粒 109

【实训项目三】一步法提取培养的真核细胞总RNA 111

第十一章 无菌技术 113

第一节 消毒与灭菌技术 113

一、消毒与灭菌概念 113

二、常用的消毒灭菌方法 114

第二节 无菌操作 118

一、无菌器材 118

二、无菌操作环境 119

三、无菌操作方法 120

第十二章 细胞培养技术 121

第一节 细胞培养室的布局要求 121

一、无菌操作室 121

二、缓冲室 121

三、准备室 122

第二节 细胞培养的一般程序 122

一、准备工作 122

二、取材 124

三、传代细胞培养 125

四、细胞的冻存与复苏 127

主要参考文献 129