实时荧光PCR技术PDF电子书下载

第1章　临床PCR技术的发展历史及趋势 1

第一节　PCR的起源和耐热DNA聚合酶的应用 1

一、PCR的起源 1

二、耐热DNA聚合酶的应用 2

第二节　PCR的基本原理 3

第三节　PCR的反应动力学 5

第四节　PCR扩增体系和扩增条件 5

一、PCR扩增体系 5

二、PCR扩增条件 8

三、PCR扩增结果分析 10

第五节　PCR的主要特点与发展情况 11

一、主要特点 11

二、发展情况 12

第2章　实时荧光PCR技术的发展历程、基本原理和方法 14

第一节　发展历程 14

第二节　基本原理 15

一、PCR扩增的理论模式 15

二、实时荧光PCR的理论基础 16

三、TaqMan实时荧光PCR的基本原理 17

四、双链DNA交联荧光染料实时荧光PCR的基本原理 19

五、双杂交探针实时荧光PCR的基本原理 20

六、分子信标实时荧光PCR的基本原理 21

七、蝎形探针实时荧光PCR的基本原理 22

八、数字实时荧光PCR的基本原理 24

第三节　引物和探针的特点 25

一、引物特点 26

二、探针特点 26

第3章 临床PCR实验室的设计及质量管理体系的建立 30

第一节　临床PCR实验室的标本接收及分区规划设计 30

一、标本接收要求 30

二、实验室分区设计原则及工作流程 31

第二节　实验室质量管理体系的建立 38

一、实验室质量管理概述 38

二、实验室质量管理的特点 40

三、质量体系文件的特性、作用与编写 40

第三节　实验室记录管理 55

一、记录的种类 55

二、记录的标志 55

三、记录填写要求 56

四、记录的封面和目录 58

五、记录保存与管理 58

第四节　实验室认可与验收 60

一、实验室认可 60

二、实验室认可与认证的区别 60

三、实验室认可与验收的关系 61

第4章　PCR检验标本的采集、运送、保存及核酸提取 63

第一节　标本采集、运送与保存 63

一、标本采集 63

二、标本运送与保存 65

第二节　常见标本的处理和保存 66

一、血液标本 66

二、痰标本 66

三、其他标本 68

第三节　标本中PCR抑制物 70

一、抑制物的来源及其作用机制 70

二、常见抑制物的作用机制及对策 71

第四节　核酸提取方法 73

一、DNA提取的经典方法 73

二、RNA的提取 74

三、核酸提取的改良方法 76

第5章 实时荧光PCR测定的数据处理 85

第一节　基本概念 85

第二节　实时荧光PCR外标绝对定量的数学模型 87

一、基本计算公式的推导 87

二、纵坐标为起始拷贝数对数值横坐标为Ct值时的数学模型 88

三、纵坐标为Ct值横坐标为起始拷贝数时的数学模型 88

第三节　实时荧光PCR相对定量数学模型 90

一、校正曲线法 90

二、2-△△Ct法 90

三、2-△△Ct的改良法 92

四、多重PCR法 94

第四节　用曲线拟合的方法进行数据处理 95

一、Liu与Saint的方法 95

二、Ramakers等的方法 96

三、Tichopad A等的方法 96

第6章　实时荧光PCR仪及其发展 98

第一节　PCR仪的发展历史及基本原理 98

一、空气驱动循环PCR仪 98

二、变温金属块PCR仪 99

第二节　实时荧光PCR仪简介 99

一、美国ABI公司的实时荧光PCR仪 100

二、美国Cepheid公司的Smart Cycler实时荧光PCR仪 103

三、美国Bio-Rad公司的实时荧光PCR仪 103

四、美国Stratagene公司的实时荧光PCR仪 105

五、Roche公司的LightCycler实时荧光PCR仪 106

六、Corbert的RotorGene实时荧光PCR仪 106

第三节　实时荧光PCR仪选择 108

第四节　实时荧光PCR仪的使用与维护 109

一、使用 109

二、维护 110

第7章 临床PCR检验仪器设备 111

第一节　天平 111

一、电子分析天平 111

二、影响称量重现性的因素 112

三、天平的选择 113

四、维护和校准 113

第二节　离心机 115

一、基本原理 115

二、离心力和相对离心力 115

三、离心时间 116

四、离心转子的选择 116

五、离心管 119

六、分类依据 119

七、使用和维护 120

第三节　微量加样器 122

一、基本原理 122

二、加样器的选择依据 123

三、使用原则 125

四、操作原则 125

五、操作步骤 126

六、维护与校准 129

七、加样器常见故障及其排除 133

第8章　PCR检验的质量保证 135

第一节　概述 135

一、基本概念 135

二、质量保证、室内质控和室间质评的关系 137

第二节　测定前质量控制 138

一、实验室环境及仪器设备管理 138

二、理想的试剂 140

三、标准化操作程序 142

四、重视人员培训 143

五、主要污染源与防污染措施 143

第三节　核酸样本分离纯化与质量控制 146

一、分离纯化 146

二、质量控制 147

第四节　统计学质量控制 148

一、理想的质控样本 148

二、质控样本的设置、数量及排列顺序 149

三、统计学质控的特点 149

四、阳性样本测定重复性统计质控方法 150

五、假阳性的统计质控方法 156

六、室内质控数据的评价 160

七、室内质控的局限性 162

第五节　室间质量评价 162

一、评价程序设计 163

二、对测定技术的评价 166

三、室间质量评价的局限性 167

第9章　病毒核酸检测的标准物质 170

第一节　概述 170

一、基本概念 170

二、标准物质种类和溯源的关系 172

第二节　检测用标准物质的制备 173

一、原材料选择原则和分装 173

二、均匀性和稳定性 174

三、定值 176

四、标准物质的保存 178

五、临床意义 178

六、应用前景 179

第10章　甲型肝炎病毒实时荧光PCR检测 185

第11章 乙型肝炎病毒实时荧光PCR检测 190

第一节　非变异乙型肝炎病毒检测 190

第二节　变异乙型肝炎病毒检测 199

一、前C1896位及BCP变异检测 200

二、变异YMDD检测 201

第三节　HBV cccDNA的检测 203

第四节 HBV基因型的检测 204

第五节 HBV RNA检测 207

第六节　HBV全基因组测定 208

第12章　丙型肝炎病毒实时荧光RT-PCR检测 213

第一节　丙型肝炎病毒检测 213

第二节　丙型肝炎病毒基因分型检测 223

第13章　人免疫缺陷病毒-1实时荧光RT-PCR检测 229

第14章　人乳头瘤病毒实时荧光PCR检测 240

第15章 巨细胞病毒实时荧光PCR检测 256

第16章 严重急性呼吸综合征冠状病毒实时荧光RT-PCR检测 272

第17章　EB病毒实时荧光PCR检测 291

第18章　流感病毒实时荧光RT-PCR检测 299

第19章　沙眼衣原体实时荧光PCR检测 313

第20章　结核杆菌实时荧光PCR检测 325

第21章　淋病奈瑟菌实时荧光PCR检测 338

第22章 幽门螺杆菌实时荧光PCR检测 351

第23章　肺炎支原体实时荧光PCR检测 363

第24章 刚地弓形虫实时荧光PCR检测 369

第25章　解脲支原体实时荧光PCR检测 377