生物化学实验技术PDF电子书下载

第一部分　理论部分 3

1.1 离心技术 3

1.1.1 离心沉降速率影响因素 3

1.1.2　沉降系数 4

1.1.3 离心设备 5

1.1.4 制备超离心法 7

1.1.5 离心操作的注意事项 9

参考文献 10

1.2　层析技术 11

1.2.1 层析的基本概念 11

1.2.2　层析的基本理论 12

1.2.3 层析法的分类 13

1.2.4　柱层析的基本装置及操作 14

1.2.5 常用的层析方法 16

参考文献 20

1.3 电泳技术 21

1.3.1 电泳的基本原理 21

1.3.2 影响电泳的主要因素 21

1.3.3 电泳的分类 23

1.3.4 电泳系统 23

1.3.5 醋酸纤维素薄膜电泳 24

1.3.6　聚丙烯酰胺凝胶电泳 25

1.3.7 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 27

1.3.8 连续梯度电泳 27

1.3.9 等电点聚焦电泳 28

1.3.10 双向电泳 29

1.3.11 琼脂糖凝胶电泳 29

1.3.12 毛细管电泳 29

参考文献 30

1.4　生物大分子的制备 31

1.4.1 生物大分子制备的前处理 31

1.4.2 生物大分子的分离纯化 33

参考文献 40

第二部分　基本实验 43

2.1　基础训练 43

2.1.1 生物化学实验要求 43

2.1.2 生物样品的采取、处理与保存 44

2.1.3 高等植物材料丙酮粉的制备 47

2.1.4　缓冲溶液的配制和氨基酸两性性质测定 48

参考文献 51

2.2　蛋白质和氨基酸实验 52

2.2.1 蛋白质的两性性质及等电点的测定 52

2.2.2氨基酸的薄层层析 54

2.2.3 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量 55

2.2.4 紫外吸收法测定蛋白质含量 57

2.2.5 双缩脲法测定蛋白质含量 58

2.2.6 Folin-酚法测定蛋白质含量 60

2.2.7 蛋白质的沉淀与变性反应 62

2.2.8　蛋白质脱盐（透析和凝胶过滤） 64

2.2.9 用DNS法鉴定蛋白质或多肽的N端氨基酸 67

2.2.10　等电点聚焦电泳法测定蛋白质的等电点 69

参考文献 72

2.3　酶学实验 74

2.3.1　酶的基本性质 74

2.3.2　过氧化氢酶活力的测定 77

2.3.3　脲酶（urease）Km值简易测定法 79

2.3.4 淀粉酶活力测定 81

2.3.5 转氨酶活性鉴定（纸层析法） 84

2.3.6 植物苯丙氨酸解氨酶（PAL）的提取及活性测定 86

2.3.7 同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳 88

参考文献 92

2.4　分子生物学基础实验 93

2.4.1 质粒DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测 93

2.4.2　聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA 97

2.4.3 大肠杆菌感受态的制备和转化实验 99

2.4.4 PCR产物的T-A克隆及重组子的蓝白斑筛选 103

2.4.5 植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 106

参考文献 108

2.5　糖、脂、维生素实验 109

2.5.1 蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量 109

2.5.2　还原糖含量测定——砷钼酸比色法 111

2.5.3　糖的薄层层析 113

2.5.4 维生素A的含量测定 115

2.5.5 维生素C含量测定——2,6-二氯酚靛酚法 118

2.5.6　粗脂肪含量的测定——索氏抽提法 120

参考文献 122

第三部分　综合性实验 125

3.1　酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究 125

3.1.1 蔗糖酶的提取与部分纯化 126

3.1.2 离子交换柱层析纯化蔗糖酶 128

3.1.3　蔗糖酶各级分活性及蛋白质含量的测定 130

3.1.4 分离产物的SDS-PAGE电泳检测 133

3.1.5 反应时间对产物浓度的影响 135

3.1.6 pH对蔗糖酶活性的影响 136

3.1.7 温度对蔗糖酶活性的影响和反应活化能的测定 138

3.1.8　底物浓度对催化反应速度的影响及米氏常数Km和最大反应速度Vmax的测定 139

3.1.9　尿素（脲）抑制蔗糖酶的实验 140

参考文献 143

3.2　溶菌酶的分离纯化 144

3.2.1 溶菌酶的粗提液的制备 144

3.2.2 离子交换柱层析纯化溶菌酶 145

3.2.3 溶菌酶的透析与浓缩 147

3.2.4　凝胶过滤层析纯化溶菌酶 149

3.2.5　溶菌酶的活性测定 150

3.2.6　溶菌酶纯度的鉴定 152

参考文献 154

3.3　猪血超氧化物歧化酶的分离纯化、活性测定及同工酶鉴定 155

3.3.1 猪血SOD的提取纯化 156

3.3.2　超氧化物歧化酶活性测定 157

3.3.3 SOD同工酶鉴定 159

参考文献 161

3.4　种子蛋白质系统分析 163

3.4.1 种子蛋白质含量测定（凯氏定氮法） 163

3.4.2　种子蛋白质氨基酸组分分析（氨基酸自动分析仪法） 165

3.4.3 种子蛋白质组分分析（连续累进提取法） 166

3.4.4 种子蛋白质亚基分析（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法） 168

参考文献 170

第四部分 附录 175

一、实验室安全及防护知识 175

二、各种仪器的使用注意事项 177

三、凝胶数据表 181

四、常用缓冲溶液的配制方法 184

五、硫酸铵饱和度的常用表 189

六、离心力与离心机转速测算表 191