实验动物配子与胚胎基本操作技术PDF电子书下载

1 实验准备 1

1.1 实验器具的清洗、消毒和灭菌 1

1.1.1 器具的清洗 1

1.1.2 器具和培养液的灭菌 1

1.2 培养液（培养基）的制备 2

1.2.1 培养液的现称现溶配制法 2

1.2.2 培养液的等渗液混合配制法 3

1.3 处死实验动物 5

1.3.1 安乐处死法的种类 5

1.3.2 颈椎脱臼法 6

1.3.3 麻醉药法 6

1.4 生殖器的摘出 6

1.5 麻醉法 8

1.5.1 小型实验动物巴比妥麻醉法 8

1.5.2 家兔巴比妥麻醉法 8

1.6 阴道涂片检查法 8

1.6.1 小鼠、大鼠阴道涂片检查法 9

1.6.2 豚鼠阴道涂片检查法 10

2 精子实验 12

2.1 精液（精子）的采集 12

2.1.1 附睾尾部精子的采集 12

2.1.2 家兔精液的采集 12

2.2 精液（精子）检查法 14

2.2.1 肉眼检查 14

2.2.2 精子的显微镜检查 14

2.3 精液（精子）的保存法 18

2.3.1 精子或精液的液态保存 18

2.3.2 精液（精子）的冷冻保存 18

2.4 精子顶体反应的判定 20

2.5 精子获能的判定 22

2.6 人工授精法 25

2.6.1 小鼠和大鼠的人工授精 25

2.6.2 家兔的人工授精 25

3 胚胎（卵子）实验 27

3.1 胚胎（卵子）的采集 27

3.1.1 采集胚胎的准备 27

3.1.2 输卵管胚胎的采集 27

3.2 诱发排卵法 31

3.2.1 超数排卵法 31

3.2.2 诱发排卵法 33

3.3 胚胎的长期保存 33

3.3.1 小鼠胚胎的冷冻保存 34

3.3.2 小鼠胚胎的玻璃化保存 35

3.4 胚胎的培养 37

3.5 胚胎移植 39

3.5.1 输卵管结扎鼠 39

3.5.2 小鼠胚胎移植 40

3.5.3 家兔胚胎移植 42

3.6 卵子核相判定法 44

3.7 免疫手术（内细胞团分离）法 46

3.7.1 小鼠囊胚内细胞团细胞的分离 46

3.8 卵子（胚胎）的染色体标本制作 48

4 基本实验 52

4.1 卵母细胞的体外成熟 52

4.2 小鼠的体外受精 53

4.3 胚胎分割（同卵双生法） 54

4.3.1 2-8细胞期胚卵裂球的分离法 55

4.3.2 分离2细胞胚制作同卵双生子 55

4.4 嵌合体制作 57

4.4.1 制作嵌合体的集合法 57

4.4.2 制作嵌合体的注入法 58

4.5 诱发孤雌生殖法 59

4.5.1 酒精处理法 60

4.5.2 电刺激法 61

4.5.3 锶诱导法 62

4.6 4倍体胚制作 62

4.6.1 细胞电融合法 63

4.6.2 细胞骨架抑制剂法 63

4.7 胚胎性别PCR法鉴定 64

4.7.1 有关PCR法 64

4.7.2 胚胎的操作 65

4.7.3 胚胎的PCR法鉴定性别 65

4.8 克隆动物的核移植技术 67

4.8.1 用于核移植的器械与仪器 67

4.8.2 核移植操作 67

4.9 转基因动物制作法 71

4.10 显微授精法 72

4.11 胚胎干细胞系的建立 74

参考文献 77