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第一篇 组织学技术的基本理论与技术 2

第一章 概论 2

一、组织学技术的发展与应用 2

二、组织制片方法分类 2

第二章 组织制片基本技术 3

一、动物麻醉法 3

二、动物取材 3

（一）动物选择 4

（二）组织取材的方法 5

1．肌组织取材 5

2．消化系统取材 6

3．泌尿系统取材 8

4．呼吸系统取材 9

5．循环系统取材 9

6．淋巴器官取材 10

7．生殖系统取材 11

8．神经系统取材 11

9．特殊感官取材 12

三、固定和固定液 13

（一）固定的目的和意义 13

（二）固定的方法 14

（三）组织固定与温度的关系 15

（四）固定应注意的几个问题 15

（五）固定液 15

单纯固定液 16

1．福马林 16

2．乙醇 17

3．丙酮 18

4．氯化汞 18

5．重铬酸钾 18

6．铬酸 19

7．苦味酸 19

8．锇酸 20

9．醋酸 21

10．三氯醋酸 21

混合固定液 21

1．甲醛混合固定液 21

2．酒精混合固定液 22

3．丙酮混合固定液 22

4．氯化汞混合固定液 23

5．重铬酸钾混合固定液 23

6．铬酸混合固定液 24

7．锇酸混合固定液 25

8．苦味酸混合固定液 26

9．三氯醋酸混合固定液 27

10．改良固定液 27

四、组织冲洗、脱水与透明 28

（一）组织冲洗 28

（二）组织脱水 29

1．脱水剂 29

2．脱水方法 29

3．正丁醇脱水过程 30

（三）组织透明 31

五、组织渗蜡与包埋 32

（一）渗蜡 32

（二）包埋 33

六、组织切片 36

（一）切片机 36

1．回转切片机 36

2．滑动切片机 36

3．冷冻切片机 37

（二）切片刀 37

（三）磨切片刀的器具及磨刀法 37

1．磨刀器具 37

2．人工磨刀法 38

3．自动磨刀机技术 38

（四）切片技术 39

1．石蜡切片法 39

2．石蜡切片常遇到的问题及解决的方法 40

3．切片附贴 41

（1）贴片剂和用具 42

（2）贴片方法 42

4．火棉胶切片法 43

（1）火棉胶配法 43

（2）火棉胶常规制片过程 43

（3）快速火棉胶包埋法 45

5．冰冻切片法 46

（1）冰冻切片与切片机 46

（2）氯乙烷冰冻切片法 46

（3）二氧化碳冰冻切片法 46

（4）半导体致冷器冰冻切片法 47

（5）低温冷冻切片机切片法 48

七、染料与染色 48

（一）染色简史 48

（二）染料分类与化学结构 48

1．染料来源：天然染料 48

（1）苏木精 49

（2）胭脂红 49

（3）地衣红 49

2．人工合成染料 50

（1）硝基类 50

（2 ）亚硝基类 50

（3）醌型苯环类 50

（4）？叮染料类 51

（5）醌亚胺染料类 52

（6）偶氮染料类 53

（7）蒽醌染料类 55

（三）染料的性质 55

1．发色团 56

（1）酸性发色团 56

（2）碱性发色团 56

2．助色团 56

3．染料与助色团的关系 57

4．染料的应用 58

5．染色的基本原理 59

（1）染色的物理现象 59

（2）染色的化学现象 59

（3）染色的物理化学现象 59

6．媒染剂促染剂和分化剂 60

（1）媒染剂 60

（2）促染剂 61

（3）分化剂 61

八、常规染色技术 61

（一）苏木精的化学特性 61

（二）各种苏木精染色液的配制 63

1．Ehrlich氏苏木精 63

2．Delafield氏苏木精 63

3．Harri氏苏木精 63

4．Mayer氏苏木精 63

5．Co1e氏苏木精 64

6．Carazzi氏苏木精 64

7．Hansen氏苏木精 64

（三）伊红y的化学特性 65

（四）伊红y的？染剂和染色液 65

（五）H、E染色的步骤和方法 65

（六）常规H、E染色应注意的问题 67

（七）整块组织H、E染色技术 68

1．染色步骤和方法 68

2．整块组织苏木精染色对不同组织时间的估计 68

第二篇 细胞与组织的特殊染色技术 70

第一章 细胞学特染技术 70

一、马蛔虫卵或猪蛔虫卵巢显示细胞分裂方法 70

1．Flemming's改良法 70

2．Heiden hain's铁苏木精法 71

二、植物细胞洋葱根显示细胞分裂方法 71

三、染色体和中心体显示法 72

四、线粒体特染技术 73

（一）Regaud's线粒体染色法 74

（二）Bensley's线粒体染色法 75

（三）Altmann's线粒体显示法 75

（四）Benda's线粒体显示法 76

（五）线粒体Luxol快兰——焰红快染技术 77

五、高尔基复合体显示法 78

（一）Da—Fano's高尔基复合体显示法 78

（二）Mcdonald's高尔基复合体改良法 79

（三）Cajal's硝酸铀高尔基复合体显示法 79

（四）高尔基复合体Elftman's直接浸银法 80

（五）高尔基复合体锇酸浸银法 81

六、动物淀粉显示方法 81

（一）动物淀粉Best's卡红染色法 82

（二）奥新兰动物淀粉染色 82

（三）Langhan's碘显示糖元法 83

第二章 上皮组织特殊制片 83

一、上皮剥离标本 83

（一）鳞状上皮细胞甲基兰染色 83

（二）柱状上皮细胞制片 84

（三）假复层纤毛柱状上皮制片 84

二、间皮——肠系膜铺片镀银法 84

三、间皮细胞快速镀银法 84

四、内皮细胞银染法 85

五、表皮铺片显示细胞基膜染色法 85

六、剥落上皮细胞EA36染色法 86

第三章 结缔组织染色 86

一、纤维性结缔组织染色 87

（一）疏松结缔组织纤维和细胞成分染色 87

1．皮下组织H、E——地衣红染色法（台盘兰注射） 87

2．皮下组织铺片地衣红——亮绿染色法 88

3．肠系膜铺片特染法 88

4．Heidenhain AzAn结缔组织染色法 89

（二）纤维性结缔组织各种纤维成分染色 90

弹性纤维 90

1．Weigert's弹性纤维染色法 90

2．弹性纤维Weigert改良Moore法 91

3．醛复红弹性纤维染色法 92

4．碱性兰B弹性纤维染色法 92

胶元纤维 93

1．Van Gie son's胶元纤维染色法 93

2．Ma s son's三色染色法 94

3．胶元纤维弹性纤维和肌纤维染色 94

4．Van Gieson—orcein合并染色法（本室改良法） 95

网状纤维 96

1．Gordon和Sweet网状纤维染色法 96

2．Foot's网状纤维镀银法 96

3．Gomori's网状纤维显示法 97

4．Humason's等网状纤维、胶原纤维及弹性纤维混合染色法 97

5．本室改良网状纤维、胶元纤维和弹性纤维联合染色法 99

6．网状纤维镀银法一览表 100

（三）结缔组织细胞成分特殊染色法 103

1．成纤维细胞铁苏木精染色 103

2．组织细胞与成纤维细胞天青——伊红——瑞特氏染色法 103

3．肥大细胞奥新兰——沙黄染色 104

4．肥大细胞硫堇染色 104

5．肥大细胞俾士麦褐染色法 104

6．肥大细胞中性红染色法 105

7．肥大细胞醛复红——奥新兰染色 105

8．甲苯胺兰肥大细胞染色法 105

9．浆细胞Lillie's天青A——伊红染色法 106

10．浆细胞美兰—天青Ⅱ—焰红染色 106

11．浆细胞Unna's多色性甲基兰染色 107

12．浆细胞甲基绿——派喏宁染色法 107

二、骨与软骨 107

（一）骨磨片染色技术 108

1．骨磨片空气封闭制片法 108

2．骨磨片酸性复红染色法 108

3．骨磨片镀银法 109

4．骨磨片大力紫（或结晶紫）染色法 109

（二）骨组织脱钙、切片及染色 109

1．脱钙剂配制 110

2．单纯脱钙液 110

3．混合脱钙液 111

4．硬骨组织的化学脱钙法 111

5．骨组织电解脱钙法 112

6．脱钙骨火棉胶包埋及切片方法 112

7．脱钙骨切片特染 113

（1）Schmorl's硫堇——苦味酸染色 113

（2）Von Kossa's脱钙骨镀银法 114

（3）Lorch's骨的硷性磷酸酶与磷酸盐显色法 115

（三）软骨及骨发生特染技术 115

1．软骨酸性复红——胺尼林兰——Weigert来复红染色 116

2．透明软骨俾士麦褐—甲基绿染色 116

3．弹性软骨地衣红——亮绿染色 117

4．骨发生西素红S——多色性甲基兰染色 117

5．软骨成骨与膜内成骨Koneff's染色法 118

三、血液与骨髓 118

（一）血液骨髓涂片技术 119

（二）涂片的染色技术 119

（三）血膜制片技术 120

（四）血液骨髓常用染色方法 120

1．Wright's染色法 120

2．Giemsa's染色法 121

3．Wright's与Giemsa's联合染色法 122

4．May—Grüwald's血液骨髓染色法 122

5．Schiff's——甲基兰 123

（五）血液和骨髓切片染色技术 123

1．血液切片May—Grünwald's液——伊红染色法 123

2．骨髓切片德氏苏木精——天青——伊红染色法 124

3．Wolbach's Gi emsa骨髓切片染色 125

4．Barreff's骨髓切片染色法 125

（六）网织红细胞与白细胞特殊染色 126

1．网织红细胞煌焦油兰染色法 126

2．网织红细胞煌焦油兰（或天青Ⅰ）枸椽酸钠染色法 126

3．嗜碱性粒细胞甲苯胺兰染色法 127

4．淋巴细胞甲基绿—派喏宁染色法 127

（七）血细胞超活体染色技术 128

1．中性红和耶那氏绿单项超活体染色 128

2．中性红和耶那氏绿混合超活体染色 128

3．中性红和耶那氏绿混合湿层超活体染色 129

第四章 肌肉组织特染方法 130

一、骨骼肌 130

（一）骨骼肌苏木精——荧光桃红染色法 130

（二）Mallory磷钨酸苏木素（PTAH）染色法 131

（三）Heidenhain铁铵矾苏木素染色 132

二、心肌 133

（一）心传导束纤维高碘酸—Schiff's试剂显示法 133

（二）心肌润盘碘酸钠苏木素整块组织染色 133

三、平滑肌 134

平滑肌分离制片染色技术 134

第五章 神经组织特殊染色技术 135

一、Golgi's神经细胞及突起镀银法 135

二、Golgi's—COX法 136

三、Cajal's神经原纤维镀银法 136

四、Caja1's六法突触显示法 137

五、Colgi—jen's突触镀银法 137

六、Cajal's吡啶银法（一） 138

七、Cajal's吡啶银法（二） 138

八、尼氏小体CV、T、M、T合并染色法 139

九、尼氏体石碳酸复红染色法 139

十、比萨斯克氏神经组织染色法 140

十一、神经胶质细胞Ca jal's镀银法 140

十二、少突胶质细胞和小胶质细胞Grino改良法 141

十三、DelRio—Hortega's小胶质和少突胶质细胞镀银法 142

十四、神经胶质细胞Penfield改良法 143

十五、大脑皮质细胞分层及各类神经胶质细胞石蜡切片镀银法 143

十六、少突胶质和小胶质细胞Marchall法 144

十七、Ranson's游离神经末梢染色 144

十八、运动云板、肌梭及腱梭镀金技术 145

十九、Luxo1快兰—焦油紫正常髓鞘及尼氏体染色法 145

二十、Weil髓鞘染色法 146

二十一、髓鞘鐭酸染色法 147

二十二、Spielmeyer's髓鞘冰冻切片染色法 147

二十三、威格特氏（Weigert's）神经髓鞘染色法 148

二十四、变性髓鞘Nauta和Gygax染色法 149

二十五、Fink Heimer变性髓鞘染色法 150

二十六、变性髓鞘新镀银方法 151

二十七、Bielschow sky—Gros肠肌神经丛镀银技术 152

二十八、中枢神经系统神经终足铬——银浸染技术 153

二十九、乙酸胆碱酯酶与硝酸银混合法显示轴突及运动终板 154

第六章 消化系统特染技术 155

一、胃底腺三种细胞Luxol—PAS—桔黄G特染法 156

二、胃腺细胞Ma11ory's玫瑰红——亚甲兰——天青Ⅱ染色法 156

内分泌细胞（APUD系）染色法 157

一、内分泌细胞简易镀银术 157

二、Solcia—Capella's内分泌细胞染色法 158

三、Ma s son's内分泌细胞镀银法（块染） 158

四、嗜银细胞甲基胺——银法 159

五、Schmorl's嗜银细胞显示法 159

六、嗜银细胞重氮盐显示法 160

潘氏细胞特染法 160

一、潘氏细胞甲基化Best's卡红法 160

二、氨基黑B潘氏细胞染色法 161

三、潘氏细胞天青——伊红染色法 161

肝脏胆微管显示法 161

一、Kopsch's胆微管镀银法 162

二、毛细胆管毗啶银法 162

三、胆微管铁矾苏木精显示法 162

四、肝储脂细胞镀金法 163

五、肝枯否氏细胞显示法 163

胰岛细胞特染方法 164

一、Gomosi's铬矾苏木素和荧光桃红染色法 164

二、胰岛细胞Gomori改良染色法 165

三、胰岛A、B及D细胞偶氮胭脂红—丽春红桔黄G—亮绿特染法 165

四、胰岛细胞硝酸银—醛复红—铅苏木素特染技术 166

第七章 呼吸系统特染技术 167

一、呼吸系统取材技术 167

二、肺胶元纤维、弹性纤维及平滑肌特染法 168

三、肺弹性纤维染色法 168

四、肺网状纤维染色 169

五、肺泡Ⅰ型和Ⅱ型细胞锇酸——碘酸钠染色法（Mcnary） 169

六、肺K细胞Solcia改良法染色 169

第八章 循环系统特殊染色 170

一、动脉弹性纤维苏木精——复制伊红染色 170

二、血管注射切片技术 171

（一）血管注射色素配制 171

（二）血管注射方法 171

1．单色注射法 171

2．双色注射法 172

第九章 泌尿生殖系统特殊染色 173

一、肾小球旁器官细胞Bowie's染色法 173

二、性染色体染色技术 174

第十章 内分泌系统特染技术 175

一、甲状腺滤泡旁细胞天青A染色 175

二、甲状腺滤泡旁细胞镀银法（块染） 175

三、肾上腺脂滴染色法 176

四、肾上腺嗜铬细胞G iemsa染色法 177

五、肾上腺嗜铬细胞镀铬法 177

六、脑垂体PAS—桔黄G—甲基兰染色法 177

七、Monroe—Formmer's垂体染色 178

八、垂体前叶促甲状腺素细胞、促性腺素细胞及嗜碱性细胞特染法 178

九、脑垂体细胞分类染色法 179

第十一章 特殊感官制片技术 180

一、内耳制片技术 180

（一）内耳块染石蜡切片法 180

（二）内耳火棉胶制片方法 181

二、眼球制片技术 183

（一）眼球火棉胶制片法 183

（二）眼球石蜡切片法 183

（三）视网膜切片染色技术 184

三、皮肤 184

（一）皮肤黑色素Dopa反应法 184

（二）细胞间桥铁苏木精染色法 185

（三）皮肤朗格罕细胞显示法 186

内耳双极神经原镀银法 186

第三篇 组织化学技术 188

第一章 概论 188

一、组织化学的应用范围 188

二、应用组织化学方法的特性和要点 188

三、组织化学的进展概况 188

第二章 组织化学的固定技术 189

第三章 核酸组织化学 190

一、脱氧核糖核酸（DNA）Feulgen反应 191

二、脱氧核糖核酸（DNA）NAH-Feulgen法 193

三、DAN与RNA甲基绿——派喏宁显示法 194

四、DNA与RNASchiff's试剂——甲基兰染色法 195

五、DNA、多糖与蛋白质合并染色法 195

第四章 糖元及多糖类 197

一、糖元及多糖高碘酸—Schiff's氏剂显示法（PAS法） 197

二、糖元PAS块染技术 198

三、阿利新兰显示酸性粘液物质 200

四、酸性与中性粘液物质阿利新兰-PAS法（Mowry 1956） 200

五、硫酸化和羧化粘液物质醛复红——阿利新兰染色 201

第五章 蛋白质的组织化学 202

一、酪氨酸Millon反应 202

二、碱性核蛋白固绿显示法 202

三、蛋白质汞溴酚兰显示法 203

四、蛋白质结合SH基D.D.D显示法 203

五、精氨酸坂口反应法 205

第六章 脂类染色技术 206

一、苏丹Ⅵ（猩红）中性脂肪染色法 206

二、中性和酸性脂类Nile兰染色法 207

三、中性脂肪苏丹混合染色法 207

四、油红O中性脂肪染色法 208

五、鐭酸显示脂肪方法 208

六、苏丹黑B（SBB）染色法 209

七、磷脂Baker's酸性苏木精显示法 210

第七章 酶组织化学 211

一、水解酶 212

（一）碱性磷酸酶钙—钴法 212

（二）碱性磷酸酶萘酚磷酸显示法 213

（三）碱性磷酸酶萘酚AS—BI法 214

（四）碱性磷酸酶与糖元联合染色法 215

（五）酸性磷酸酶Mac Donald改良法 216

（六）酸性磷酸酶偶氮偶联法 216

（七）酸性磷酸酶铅法 217

（八）酸性磷酸酶萘酚AS—BI法 218

（九）三磷酸腺苷酶显示法（Wachstein等） 219

（十）Padykula—Herman ATP酶钙钴法 219

（十一）ATP酶柠檬酸铅法（小川） 220

（十二）5'—核苷酸酶铅法 220

（十三）葡萄糖—6—磷酸酶铅法 221

（十四）非特异性酯酶偶氮偶联法 221

（十五）酸性非特异性酯酶（ANAE）显示法 222

（十六）酯酶Gomori吐温铅法 223

（十七）磷脂酶硫化铅法 224

（十八）胆硷脂酶乙酰硫胆碱显示法 224

（十九）ACHE及CHE的铜——铅——硫胆碱法 225

（二十）氨基肽酶同时偶联法 225

二、脱氢酶 226

（一）琥珀酸脱氢酶兰四氮盐法 226

（二）琥珀酸脱氢酶新四氮盐法 227

（三）白细胞离心琥珀酸脱氢酶显示法 227

（四）乳酸脱氢酶显示法 229

（五）乳酸脱氢酶Barka Anderson法 230

（六）乳酸脱氢酶同功酶PVA法 230

（七）葡萄糖—6—磷酸脱氢酶法 231

（八）苹果酸脱氢酶法 231

（九）异柠檬酸脱氢酶Barka Anderson法 232

三、氧化酶与过氧化物酶 233

（一）DOPA氧化酶法 233

（二）过氧化物酶二胺基联苯胺法 233

（三）辣根过氧化酶（HRP）示踪法 234

（四）HRP逆行追踪神经系统新方法 234

（五）细胞色素氧化酶法 235

（六）过氧化物酶显示法 236

（七）单胺氧化酶显示法 237

（八）单胺氧化酶亚铁氰化铜法 237

第八章 荧光染色技术 238

一、荧光的基本概念 238

二、荧光染料 239

三、DNA荧光Feulgen染色法 239

四、DNA、蛋白质双重荧光组化技术 240

五、DNA与RNA吖啶橙荧光染色 240

六、荧光PAS反应 241

七、淀粉样物质刚果红荧光染色法 241

八、类脂中性红荧光染色 241

九、核仁（核小体）吖啶橙——甲基绿荧光染色 242

十、曲利本兰显示弹性纤维的荧光染色技术 242

第九章 单胺递质荧光组化技术 243

一、生物单胺递质荧光组化技术应用 244

二、显示单胺类物质荧光组化实验技术和原理 245

（一）甲醛诱发显示去甲肾上腺素（NE）的荧光组化方法 245

（二）多聚甲醛诱发显示神经纤维和肥大细胞中单胺荧光组化法 245

（三）甲醛诱发单胺荧光化学反应 245

（四）乙醛酸诱发显示单胺荧光法 247

（五）乙醛酸诱发单胺荧光化学反应 247

（六）显示组织胺的邻苯二醛荧光组化法 248

（七）组织胺与邻苯二醛化学反应 249

第十章 实验室溶液的配制 249

一、百分比浓度溶液 249

二、当量浓度溶液计算 250

三、克分子浓度溶液计算 252

四、各类缓冲溶液配制附表 252

五、标准缓冲液的配制 254

六、玻璃器皿洗涤方法 258

第四篇 胚胎学技术 260

一、鸡胚整装片技术 260

二、胚眙连续切片技术 261

第五篇 显微摄影技术 262

一、全自动显微摄影及其装置 262

二、自动摄影装置组件 262

三、自动摄影的方法与程序 263

（一）全自动黑白显微摄影方法和程序 263

（二）全自动彩色显微摄影技术 264

（三）半自动显微摄影技术 265

各种胶卷感光度换算表 267

四、彩色荧光照相倒易律失效的解决方法 267

五、显微照相底片放大倍数计算方法 268

六、玻片标本曝光补偿 269

七、常用黑白摄影胶片和照片冲洗技术 270

（一）显影和显影剂配方 270

（二）停影和定影 270

（三）水洗和干燥 271

（四）照片放大（印相）显影液配方 271

八、常见彩色摄影胶卷和照片冲洗技术 271

（一）彩色负片冲洗及配方 271

1．保定油溶剂彩色负片冲洗技术 271

2．保定上海水溶性负片冲洗和配方技术 272

3．柯达（kodok）彩色Ⅱ型负片冲洗配方技术 272

4．柯达彩色（负片）相纸冲洗配方技术 273

（二）柯达（kodak）彩色反转片E—6配方冲洗技术 273

1．E—6溶液配制 273

2．冲洗的几个重要技术问题 274

3．E—6冲洗程序 275

4．E—6冲洗步骤简表 276

5．问题分析 277

6．E—6反转冲洗液的保存 277