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第一章 组织培养 1

第一节 基本培养技术 1

一、基本操作和培养技术 1

二、常规组织培养法 15

三、特殊组织培养法 18

第二节 组织培养用液 24

一、水 24

二、平衡盐溶液 25

三、常用试剂 27

四、常用培养液 30

第三节 传代细胞的培养 34

一、贴壁细胞的传代培养 34

二、悬浮细胞的传代培养 36

第四节 细胞克隆技术 36

一、低密度细胞悬液的制备 37

二、多孔板克隆细胞法 37

三、Puck法检测克隆形成率 38

四、软琼脂克隆形成法 39

五、琼脂平板克隆培养 39

六、饲细胞层克隆法 40

第五节 各种器官组织的培养 40

一、神经组织细胞的培养 40

二、动脉壁平滑肌细胞培养 43

三、骨髓细胞的培养 44

四、人表皮细胞的培养 45

五、气管上皮细胞的培养 46

六、乳腺上皮细胞的培养 48

七、血管内皮细胞的培养 49

八、肝细胞的培养 51

九、胰岛组织的培养 52

第六节 组织培养技术的应用研究 54

一、药物测试中的组织培养 55

二、杂交瘤技术中的细胞培养 59

三、组织培养技术的其他应用 64

第二章 组织化学 67

第一节 概述 67

一、组织化学的基本概念 67

二、组织化学技术的基本要求 67

第二节 组织化学标本的制备 68

一、组织的固定 68

二、组织切片的制备 70

第三节 光镜组织化学 72

一、多糖的显示 72

二、核酸的显示法 75

三、脂类的显示 78

四、醛复红染色法 82

五、酶类的显示法 83

第四节 电镜组织化学 110

一、电镜组织化学的基本程序 110

二、糖类的电镜组织化学 111

三、脂类的电镜组织化学 114

四、酶类的电镜组织化学 115

第三章 免疫组织化学 140

第一节 概述 140

一、免疫组织化学的基本概念 140

二、免疫组织化学技术的基本要求 140

第二节 抗原与抗体 141

一、抗原 141

二、抗体 141

第三节 免疫组织化学技术的原理 142

一、免疫荧光技术 143

二、免疫酶技术 144

三、亲合素－生物素技术 146

四、免疫胶体金技术 147

第四节 免疫组织化学标本的制备 148

一、组织的固定 148

二、组织包埋和切片 149

第五节 免疫组织化学染色程序 150

一、光镜免疫组织化学单标记染色程序 151

二、光镜免疫组织化学双标记染色程序 156

三、电镜免疫组织化学单标记染色程序 159

四、电镜免疫组织化学双标记染色程序 162

第六节 抗原修复的应用 166

一、抗原化学修复法 166

二、抗原物理化学修复法 166

第四章 原位杂交组织化学 169

第一节 原位杂交的基本程序 169

一、组织取材与处理 169

二、杂交前处理 170

三、杂交反应 171

四、杂交后处理 173

五、杂交体的检测 173

六、对照试验 174

第二节 原位杂交技术的操作程序 174

一、细胞和组织切片的制作 174

二、预杂交（以双链探针检测DNA为例） 177

三、杂交反应 178

四、杂交后处理 178

五、标记与检测 178

六、地高辛标记探针原位杂交的操作程序 182

第三节 原位杂交结合免疫组织化学双标记 183

一、同位素原位杂交与免疫组织化学PAP结合法 184

二、地高辛标记与免疫组织化学PAP结合法 185

三、PCR与原位杂交结合法 187

第四节 双重标记原位杂交 188

一、射性同位素和非放射性标记探针结合的双重标记原位杂交 188

二、非放射性标记探针的双重标记原位杂交 189

第五节 薄片组织和整体组织原位杂交 190

一、薄片组织的原位杂交 190

二、整体组织原位杂交 191

第六节 电镜原位杂交 195

一、电镜原位杂交基本操作步骤 195

二、蛋白A－金－生物素标记DNA探针电镜原位杂交 195

三、地高辛标记rRNA探针电镜原位杂交 197

四、同位素标记cRNA探针电镜原位杂交 199

五、电镜原位杂交应注意的问题 199

第五章 定量组织化学技术 201

第一节 目测定量术 201

第二节 显微分光光度术 202

一、显微分光光度计的原理 202

二、显微分光光度计的组成 202

三、显微分光光度计测量的基本方法 203

第三节 图象分析系统 204

一、图象分析系统的基本原理 205

二、图象分析系统的组成 205

三、图象分析系统的工作程序 206

第六章 流式细胞术和激光扫描共聚焦显微术 213

第一节 流式细胞术 213

一、概述 213

二、流式细胞仪的工作原理 213

三、流式细胞仪的功用 214

四、流式细胞仪样本的制备 214

五、染色方法 216

六、人外周血T淋巴细胞亚群的检测 218

七、DNA倍体分析 219

八、Bcl－2基因蛋白的分析 219

第二节 激光扫描共聚焦显微术 220

一、仪器系统组成 220

二、工作原理 220

三、主要特性 220

四、基本功能 222

五、几种荧光染色法 225

第七章 凋亡细胞的检测 231

第一节 凋亡细胞的形态学检测 231

一、光学显微镜观察法 232

二、透射电子显微镜观察法 235

第二节 凋亡细胞的流式细胞术检测 236

一、PI染色法 237

二、Hoechst－PI染色法 238

三、荧光素标记测定法 239

四、Annexin法 241

第三节 凋亡细胞的TUNEL法检测 241

一、过氧化物酶标记测定法 241

二、荧光素标记测定法 244

三、生物素－dUTP/酶标亲和素测定法 246

第四节 细胞凋亡相关蛋白和酶的检测 248

一、Fas抗原的检测 248

二、Bc1－2蛋白的检测 250

三、P53蛋白的检测 250

四、caspase3活性的检测 251

五、PARP活性的测定 252

第五节 细胞凋亡DNA裂解的检测 253

一、细胞凋亡DNA裂解的生化检测法 253

二、细胞凋亡DNA裂解的免疫化学检测法 254

三、细胞凋亡DNA裂解的分子生物学检测法 256

附录 259

附录一 组织化学常用缓冲液 259

附录二 免疫组织化学常用溶液 269

附录三 原位杂交组织化学常用溶液 284

附录四 中英文名词对照索引 289