分析生物化学技术PDF电子书下载

第1章　绪论 1

1.1　分析生物化学的重要性 3

1.1.1　过程分析和监测 3

1.1.2　重大发现 4

1.1.3　生命科学研究 5

1.2　分析方法的选择 6

1.2.1　方法选择的基本原则 6

1.2.2　选择前应了解的信息 7

1.2.3　分析的一般步骤 8

1.2.4　仪器分析 8

1.2.5　生理学分析 9

1.2.6　诊断试剂盒检测 10

1.3　实验数据的变异及其处理 10

1.3.1　偶然误差 10

1.3.2　系统误差 12

1.4　方法可靠性的评估 14

1.4.1 精密度 14

1.4.2　准确度 17

1.4.3　专一性 21

1.4.4　灵敏度 22

1.4.5　定量限 22

1.4.6　线性范围 22

1.4.7　耐用性 23

1.5　质量管理和控制 23

1.5.1　Shewart平均值质量控制法 24

1.5.2　Cusum质量控制法 25

1.6　样品的保存与处理 26

1.7　实验结果处理和报告 27

1.7.1　实验原始记录和标签 27

1.7.2　计量单位的挑选 27

1.7.3　标准曲线 27

1.7.4　检测报告 28

参考文献 29

第2章　电泳学基础 30

2.1　移动界面系统 31

2.1.1　静止浓度界面 31

2.1.2　强电解质构成的MBS 32

2.1.3　弱电解质形成的MBS 34

2.1.4 MBS在电泳中的应用 34

2.2　移动反应界面 39

2.2.1 强电解质形成的MRB 39

2.2.2　弱电解质形成的MRB 40

2.2.3　判别式 42

2.2.4 Deman-Rigole's方程 43

2.2.5　静止反应界面 43

2.2.6　Pospichal方程 44

2.2.7　应用 44

2.3　基本电泳模式 47

2.3.1 区带电泳 47

2.3.2　等速电泳 48

2.3.3　等电聚焦电泳 49

2.4　符号及其意义 50

参考文献 52

第3章　凝胶电泳 55

3.1　醋酸纤维素薄膜电泳 56

3.1.1　原理 56

3.1.2　方法 57

3.1.3　应用 58

3.2　聚丙烯酰胺凝胶电泳 59

3.2.1　原理 59

3.2.2　类型 59

3.2.3　条件选择 60

3.2.4　应用 61

3.3 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 62

3.3.1　原理 62

3.3.2　方法 63

3.3.3　运行条件 67

3.3.4　电泳结果处理 67

3.3.5　应用 68

3.4　琼脂糖凝胶电泳 68

3.4.1　琼脂糖化学 68

3.4.2　核酸电泳 68

3.4.3　染色 69

3.4.4　免疫电泳 70

3.4.5　应用 70

3.5　等电聚焦电泳 71

3.5.1 原理 71

3.5.2　载体两性电解质 71

3.5.3　方法 73

3.5.4　条件选择 75

3.5.5　应用 76

3.6 双向电泳 77

3.6.1　概述 77

3.6.2　双向电泳原理 77

3.6.3　模式选择 77

3.6.4　应用 78

3.7 印迹技术 78

3.7.1 基本原理 78

3.7.2 DNA印迹法 79

3.7.3 RNA印迹法 79

3.7.4　蛋白质印迹法 80

3.8　新进展 81

3.8.1 脉冲场凝胶电泳 81

3.8.2　单细胞凝胶电泳 82

3.8.3　变性梯度凝胶电泳 82

参考文献 83

第4章　高效毛细管电泳 85

4.1　仪器 86

4.1.1 毛细管 87

4.1.2　高压电源 87

4.1.3　检测器 87

4.1.4　数据采集处理系统 89

4.1.5　柱恒温系统 89

4.2 电渗流 90

4.2.1 电渗流形成机理 90

4.2.2　电渗流的影响因素 90

4.3 电泳模式 91

4.3.1　毛细管区带电泳 91

4.3.2　毛细管等速电泳 91

4.3.3　毛细管等电聚焦电泳 92

4.3.4　胶束电动毛细管色谱 93

4.3.5　非水相毛细管电泳 93

4.3.6　毛细管凝胶电泳 94

4.4　进样方式 95

4.4.1 电动进样 95

4.4.2　压力进样 95

4.4.3　扩散进样 95

4.4.4　流动注射进样 96

4.5　分离条件选择 96

4.5.1　分离条件选择策略 96

4.5.2　无机离子 97

4.5.3　手性物质 97

4.5.4　蛋白质 98

4.5.5　核酸 99

4.6　应用 99

4.6.1　药物分析 99

4.6.2　环境分析 101

4.6.3　临床分析 102

4.6.4　蛋白质分析 103

4.6.5　核酸分析 104

4.6.6　多糖分析 104

4.7 新进展 105

4.7.1　阵列毛细管电泳 105

4.7.2　芯片毛细管电泳 106

参考文献 106

第5章　PCR技术 109

5.1　基本原理和方法 110

5.1.1　基本过程 110

5.1.2　反应体系的组成与反应条件 112

5.1.3　材料设备及试剂 113

5.1.4　操作步骤 114

5.1.5　模板的制备 114

5.1.6 PCR扩增产物分析 117

5.1.7　PCR产物的纯化 118

5.2　PCR的引物设计 119

5.2.1　引物设计的基本原理 119

5.2.2　引物设计的基本原则 119

5.3 PCR常见问题 122

5.3.1　假阳性及解决方案 122

5.3.2　PCR污染的预防措施 123

5.3.3　假阴性及解决方案 124

5.4 常用基本操作方法及主要用途 125

5.4.1 反转录PCR 125

5.4.2 多重PCR 127

5.4.3 套式PCR 128

5.4.4 不对称PCR 128

5.4.5 反向PCR 129

5.4.6 锚定PCR 129

5.4.7 标记PCR和彩色PCR 129

5.4.8 免疫PCR 130

5.4.9 原位PCR技术 130

5.4.10 实时荧光定量PCR 131

5.5 PCR技术的应用 132

5.5.1 PCR在生物学领域的应用 132

5.5.2 PCR技术在医学检验中的应用 132

参考文献 133

第6章　核酸序列分析 135

6.1　核酸的多态性分析 136

6.1.1 DNA长度多态性分析 136

6.1.2　微卫星DNA分析 139

6.1.3　单核苷酸多态性分析 140

6.1.4　微生物群落核酸多态性分析 142

6.2　芯片杂交技术 145

6.2.1 基因芯片的种类与制作方法 146

6.2.2　样品与芯片的分子杂交 149

6.2.3　生物芯片的光学检测和数据处理 142

6.2.4　生物芯片应用 150

6.3 DNA序列分析 152

6.3.1　传统的测序方法 152

6.3.2　新一代454测序法 156

6.3.3 DNA测序技术的发展与展望 158

参考文献 159

第7章　酶联免疫吸附分析 160

7.1 基础知识 161

7.1.1　抗原 161

7.1.2　抗体 161

7.1.3　抗原抗体反应 162

7.1.4　标记免疫分析 164

7.1.5　酶免疫测定 164

7.2　原理与方法 164

7.2.1 基本原理 164

7.2.2 ELISA方法 165

7.3 ELISA仪器 168

7.4 ELISA试剂 169

7.4.1　免疫吸附剂 169

7.4.2　结合物 172

7.4.3　底物 174

7.4.4　洗涤液 175

7.4.5　终止液 175

7.4.6　对照品 175

7.4.7　标准品 176

7.5　操作要领 176

7.5.1　样品的采集与保存 176

7.5.2　试剂的准备 177

7.5.3　加样 177

7.5.4　保温 177

7.5.5　洗涤 178

7.5.6　显色 178

7.5.7　比色 179

7.5.8　结果判断 179

7.6　应用 181

7.6.1 临床诊断 181

7.6.2　生命科学研究 182

7.6.3　预防医学 182

参考文献 183

第8章　蛋白质分析 184

8.1　蛋白质化学 185

8.1.1 氨基酸 185

8.1.2　肽键 186

8.1.3　一般性质 186

8.1.4　蛋白质结构 187

8.2　蛋白质浓度测定 188

8.2.1　凯氏定氮法 188

8.2.2　紫外吸收法 189

8.2.3　Lowry法及其改进方法 191

8.2.4　考马斯亮蓝法 192

8.3　蛋白质纯度分析 192

8.3.1　纯度鉴定原则 192

8.3.2　常用纯度检测方法 193

8.4　分子量测定 194

8.4.1 SDS-PAGE法 194

8.4.2　凝胶过滤色谱法 194

8.4.3　生物质谱法 195

8.5 蛋白质等电点测定 195

8.5.1 凝胶等电聚焦电泳法 195

8.5.2　毛细管等电聚焦电泳法 196

8.5.3　聚焦色谱法 197

8.6　C端分析 197

8.6.1 羧肽酶法 197

8.6.2　肼解法 198

8.7　N端分析 198

8.7.1 FDNB法 199

8.7.2　DNS-Cl法 199

8.7.3　Edman降解法 200

8.8 肽谱分析 201

8.9 氨基酸组成分析 202

8.9.1　蛋白质水解 202

8.9.2　氨基酸衍生 203

8.9.3　氨基酸分离检测 205

8.10　蛋白质结构分析 206

8.10.1　一级结构分析 206

8.10.2　二级结构分析 207

8.10.3　三级结构分析 208

8.10.4　亚单位分析 209

8.10.5　二硫键分析 210

参考文献 211

附录 212