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目录 1

第一章蛋白质的透析、冷冻干燥及一些基本分析方法 1

任梅轩 1

一、样品处理 1

（一）透析 1

（二）冷冻干燥 2

二、分析方法 3

（一）灰分测定 3

（三）总氮量的测定 4

（二）水分测定 4

（四）酰胺氮的测定 8

（五）蛋白质浓度的测定 11

1．缩脲法 12

2．Folin－酚试剂法 14

3．紫外吸收法 16

第二章蛋白质、多肽及氨基酸的显色反应 16

潘家秀徐俊杰任梅轩 16

一、纸上显色法 16

（一）茚三酮法 16

（二）吲？醌法 18

（四）氯气显色法 20

（三）pH指示剂显色法 20

（五）个别氨基酸的特殊显色法 22

1．甘氨酸的显色 22

2．酪氨酸的显色 22

3．组氨酸、酪氨酸及它们的多肽的显色 24

4．精氨酸的显色 24

5．半胱氨酸及胱氨酸的显色 24

6．脯氨酸的显色 24

（六）蛋白质的特殊显色法 24

1．蛋白质的显色法 24

2．脂蛋白的显色法 24

（一）茚三酮溶液显色法 27

3．醣蛋白的显色法 27

二、溶液显色法 27

（二）Folin－酚试剂显色法 28

（三）直接光谱测定法 29

1．肽键测定法 29

2．酪氨酸和色氨酸测定法 30

（四）色氨酸的测定 30

第三章蛋白质及多肽的氨基酸分析 34

潘家秀徐俊杰任梅轩戚正武 34

一、绪言 34

2．影响氨基酸Rf值的几种主要因素 35

1．层析的机制 35

二、滤纸层析法 35

（一）基本原理 35

3．影响层析斑点、形状、大小和溶剂前沿的几种因素 51

（二）室温滤纸层析法 51

1．样品处理及点样 51

2．溶剂系统 51

（三）高温滤纸层析法 58

（四）小纸快速层析（小层析） 59

（五）定性检定和定量比色测定 61

3．单向和双向层析 61

三、高压电泳高温层析双向纸上分离法 63

（一）操作步骤 63

1．高压电泳 63

2．高温层析 65

（二）讨论 65

四、二硝基氟苯法 66

（一）原理 66

3．DNP－氨基酸的抽提 67

2．二硝基氟苯作用 67

4．二硝基酚（DNP-OH）的去除 67

（二）实验部分 67

1．水解与水解液处理 67

5．DNP－氨基酸的检定 71

6．改正因数的测定 71

（三）计算 71

五、氨基酸柱层析定量分析法 71

（一）原理 71

3．样品的处理、上柱和收集 72

5．树脂再生 72

4．定量测定步骤 72

2．缓冲液的配制 72

1．树脂的浮选、处理和装柱 72

（二）实验部分 72

（三）实验结果计算 81

（四）讨论 86

第四章蛋白质及多肽的末端分析技术 95

任梅轩 95

序言 95

一、N－端测定 96

（一）二硝基氟苯法（FDNB法） 96

1．原理 96

2．二硝基氟苯（FDNB）的制备 110

2．异硫氰酸苯酯的制备 113

3．苯乙内酰硫脲氨基酸（简称PTH－氨基酸）的制备 113

1．原理 113

（二）异硫氰酸苯酯法（PTH法） 113

4．苯氨基硫甲酰蛋白或肽（简称PTC－蛋白或肽）的生成 113

5．PTC－蛋白或肽的环化作用 113

6．苯乙内酰硫脲氨基酸的鉴定 113

7．N－末端计算方法及回收率 113

6．DNP－氨基酸的鉴定 113

5．DNP－蛋白的水解及DNP－氨基酸的抽提 113

4．DNP－蛋白的制备 113

3．DNP－氨基酸的制备 113

8．实例 113

1．原理 119

3．肼解步骤 119

2．无水肼的制备 119

4．回收率 119

（一）肼解法 119

二、C－端测定 119

7．实例 119

5．实例 124

（二）羧肽酶法 124

1．原理 124

2．羧肽酶的制备 124

3．羧肽酶的重结晶与二异丙氟磷酯（DFP）处理 124

4．测定方法 124

5．实例 135

第五章区带电泳 135

潘家秀张友尚 135

一、区带电泳 135

（一）绪言 135

1．基本原理 136

（二）区带电泳的分类和比较 138

2．电泳的分类 138

（一）绪言 142

二、高压纸上电泳 142

（二）装置 143

1．高压电源 148

3．样品处理 150

5．电泳 150

4．点样 150

6．烘干 150

2．纸的选择和裁剪 150

1．缓冲液的选择与配制 150

（三）操作步骤 150

2．电泳器 150

7．显色 158

（四）关于区带异常现象的分析 158

（五）示例 158

三、粉末电泳 162

（一）淀粉平板电泳 162

1．绪言 162

2．操作步骤 162

3．分离示例 166

（二）纤维素粉平板电泳 166

1．绪言 166

2．纤维素粉板的制备和操作步骤 166

四、琼脂平板电泳 167

（一）绪言 167

3．分离示例 167

（二）装置 168

（三）操作步骤 169

1．琼脂的净化 169

2．制板 169

3．缓冲液的选择与配制 169

7．电泳 176

9．制备电泳 176

8．区带检出 176

（四）讨论 176

6．电压的选择 176

5．加样方法 176

4．样品的处理 176

第六章逆流分溶 180

戚正武徐俊杰 180

一、绪言 180

二、基本原理 181

三、逆流分溶的理论曲线 184

四、影响分溶理论曲线的几个因素 186

（一）K值 186

（二）分离因子β 186

（三）容积因子α 187

（四）曲线相对宽度△r相对 188

（五）转移次数 190

（六）偏差因素 191

（一）基本操作法 193

五、逆流分溶的操作方法 193

（二）单提取法 194

（三）轮转法 194

（四）方块法 195

（五）逐段法 196

六、逆流分溶仪 197

七、溶剂系统和实验温度的选择 202

（一）溶剂系统的选择 202

（二）温度的选择 203

八、实验步骤 211

（一）溶剂系统的配制 211

（二）分溶管的洗滌 211

（三）下相溶剂的加入 211

（六）振荡次数、定清时间和转移次数的选择 212

（四）预行 212

（五）样品的加入 212

（七）测定方法 213

（八）样品的回收 214

（九）分溶管的洗滌 215

（十）分溶曲线的绘制及计算 215

九、实例 216

（一）逆流分溶法作为分离之用 216

（二）逆流分溶法作为分析之用 217

（三）分子量的测定 225

十、逆流分溶法的特点和应用范围 226

附录1酸碱指示剂 229

附录2缓冲液之配制方法 230

附录3氨基酸的一些物理常数表 236