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第1章 细胞生理 1

1.1一些细胞器的分离 1

1.1.1离体叶绿体的制备 1

1.1.1.1破碎叶绿体的制备 1

1.1.1.2完整叶绿体的制备 2

1.1.2质膜微囊泡的分离及纯化技术 3

1.1.3液泡膜微囊的制备 5

1.1.4过氧化物酶体的分离 6

1.1.5乙醛酸循环体的分离 8

1.1.6脂质体的分离及制备 9

1.2原生质体的分离 10

1.3去液泡原生质体的制备 13

1.4细胞突变体的诱发、选择和鉴定 14

1.4.1 用低浓度N－乙基－N－亚硝基脲（ENU）诱变烟草原生质体，筛选抗氯酸盐和硝酸还原酶缺陷突变体 14

1.4.2紫外线（UV）诱变烟草叶肉原生质体筛选抗缬氨酸突变体 15

1.5细胞生物学研究中的流式细胞技术 17

1.5.1测定细胞周期 18

1.5.2测定细胞内游离Ca2＋ 20

1.5.3测定细胞内蛋白质含量 21

1.5.4测量同一细胞中的蛋白质和核酸 22

第2章 植物的离体培养 23

2.1胡萝卜体细胞培养 23

2.2离体根培养 24

2.2.1番茄或紫花苜蓿的离体根尖的培养法 24

2.2.2水稻离体根段上的胚胎发生 26

2.3茎尖培养和脱毒 26

2.3.1菊花生长点培养法（目的：脱病毒） 27

2.3.2杜鹃花的芽培养法（目的：丛芽繁殖） 28

2.4花器官和叶片的培养 29

2.4.1花器官培养 29

2.4.2叶片培养 30

2.5胚培养 30

2.5.1无核葡萄胚培养（液－固两步培养的工作流程） 31

2.5.2水稻幼胚培养 32

2.6胚乳培养 32

2.7薄层细胞培养 34

2.8小孢子培养 35

2.9悬浮细胞培养 37

2.10原生质体培养 38

2.10.1水稻原生质体的分离及培养 40

2.10.2原生质体存活率、密度及产量的测定 41

2.10.3原生质体植板率的测定 42

2.11原生质体融合 43

2.11.1植物原生质体的PEG融合技术 43

2.11.2植物原生质体电融合 46

2.11.3碘乙酸－罗丹明原生质体融合筛选体系的建立及杂交后代的鉴定 47

2.12植物的无性快繁技术 49

2.12.1 由叶组织诱导不定芽——非洲紫罗兰的快速繁殖 51

2.12.2由腋芽诱导丛生芽——薄荷的快速繁殖 52

2.12.3甘蓝下胚轴通过愈伤组织培养再诱导产生不定芽 52

2.12.4 日本茄F1离体快速繁殖 53

2.13离体培养条件下的花芽分化 54

第3章 水分生理和矿质营养 55

3.1水势的测定 55

3.1.1压力室法 55

3.1.2热电偶湿度计法 56

3.2水分利用效率（WUE）的测定 58

3.2.1单叶水分利用效率 58

3.2.2个体或群体水分利用效率 59

3.2.2.1盆栽法 59

3.2.2.2碳同位素辨别率法 59

3.3蒸腾速率的测定 60

3.3.1气孔蒸腾的测定 60

3.3.2角质层蒸腾的测定 63

3.3.2.1用稳态气孔计测算角质层蒸腾 63

3.3.2.2离体叶片连续称重同步测定气孔和角质层蒸腾 64

3.4植物根系对离子的吸收和运输 66

3.4.1液泡膜H＋-ATPase活性的测定 66

3.4.2质膜H＋-ATPase活性的测定 67

3.4.3测定植物全细胞跨膜钾离子流的膜片钳技术（以蚕豆保卫细胞原生质体为例） 68

3.4.4用平面脂双层技术测定离子通道活性 71

3.5植物的溶液培养及缺元素培养 74

3.6水孔蛋白的检测 78

3.6.1水渗透性检测法 78

3.6.2水扩散透性检测法 80

第4章 光合作用 83

4.1叶片光合速率的测定 83

4.1.1气流法测定叶片的光合速率 83

4.1.2氧电极法测定叶片的光合作用放氧 86

4.1.3改进干重法测定光合作用速率 87

4.2叶片表观光合量子效率的测定 89

4.3光呼吸的测定 91

4.3.1 叶片光呼吸的测定 91

4.3.2乙醇酸氧化酶活性的测定 92

4.4二氧化碳补偿点的测定 93

4.5光合作用中有关色素的测定 95

4.5.1叶绿素测定 95

4.5.2 β－胡萝卜素测定 96

4.5.3植物叶片中δ－氨基乙酰丙酸的测定 97

4.6光系统Ⅱ反应中心的提取及测定 98

4.6.1光系统Ⅱ颗粒的制备 98

4.6.2光系统Ⅱ反应中心复合物的制备 99

4.6.3缺失不同外周多肽的光系统Ⅱ颗粒的制备 100

4.6.4原子吸收光谱测定光系统Ⅱ中Mn的含量 101

4.6.5光系统Ⅱ中EPR信号Ⅱ的测定 101

4.7紫细菌光合反应中心的提纯 102

4.8 叶绿体膜上Mg2＋-ATPase活性的测定 104

4.9叶绿体偶联因子（CF1）提取、纯化及ATPase活性测定 104

4.10叶绿体光合磷酸化活力的测定（32pi标记法） 106

4.11叶绿体Hill反应活力的测定 108

4.12叶绿素荧光和延迟荧光的测定与分析 109

4.13生物发光法测定植物组织中的腺苷酸含量 111

4.14二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶（Rubisco）羧化活性的测定 113

4.15二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶（Rubisco）加氧活性的测定 115

第5章 呼吸及碳水化合物代谢 117

5.1呼吸速率的测定 117

5.2磷酸化酶活性的测定 117

5.3磷酸果糖激酶活性的测定 118

5.4果糖－1，6－二磷酸酯酶活性的测定 119

5.5磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性的测定 120

5.6焦磷酸：果糖－6－磷酸－1－磷酸转移酶活性的测定 121

5.7丙酮酸激酶活性的测定 122

5.8α－和β－淀粉酶活性的测定 123

5.9淀粉合成酶、ADPG焦磷酸化酶和UDPG焦磷酸化酶活性的测定 124

5.10蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶活性的测定 126

5.11植物材料中可溶性糖的测定 127

5.12β-1，3－葡聚糖酶活性的测定 128

5.13几丁酶活性的测定 129

5.14几种糖苷酶活性的测定 130

5.15淀粉的测定 131

5.15.1总淀粉量的测定 131

5.15.2直链淀粉和支链淀粉的测定 131

第6章 氮代谢 133

6.1总氮量的测定——微量凯氏（Kjeldahl）定氮法 133

6.1.1蛋白质氮的测定 134

6.1.2非蛋白质氮的测定 134

6.2非蛋白质氮的组分分析 135

6.2.1氨基氮的测定 135

6.2.2羧基的测定 136

6.2.3酰胺氮（谷酰胺、天冬酰胺和酰胺总量）的测定 137

6.3氨态氮的测定 138

6.4硝态或硝酸态氮的测定 139

6.5尿素含量的测定 140

6.6蛋白质的提取和测定 141

6.6.1蛋白质组分的分析 143

6.6.2蛋白质分子量的测定 144

6.6.3蛋白质等电点的测定 146

6.6.4蛋白质中氨基酸组分的分析 147

6.6.5赖氨酸含量的测定 148

6.6.6谷胱甘酞含量的测定 149

6.7蛋白酶（肽酶）活性的测定 149

6.8脲酶的提取和活性测定 151

6.9硝酸还原酶的提取和活性测定 152

6.10转氨酶（GOT和GPT）的提取和活性测定 154

6.11谷氨酸脱氢酶的提取和活性测定 156

6.12谷酰胺合成酶的提取和活性测定 157

6.13天冬酰胺酶的提取和活性测定 158

6.14酪氨酸酶的提取和活性测定 159

6.15色氨酸合成酶的提取和活性测定 160

6.16色氨酸转氨酶和色氨酸脱羧酶的提取和活性测定 161

6.17谷氨酸脱羧酶的提取和活性测定 162

6.18根瘤菌的结瘤能力和根瘤固氮活性的测定 164

6.19豆科植物固氮中能量利用的相对效率测定 165

6.20根瘤菌和植物组织培养之间固氮联合体的建立方法 165

6.21植物体内固氮内生菌的分离和鉴定 167

6.22根瘤菌类菌体的制备 168

6.23豆血红蛋白的提取与纯化 169

6.24豆科植物与根瘤菌共生中凝集素和脂多糖的分离和纯化 169

6.25蓝藻异型细胞的分离 171

6.26生物固氮研究中常用的测定固氮活性的方法 171

6.26.1 15N示踪法 172

6.26.2微量氨扩散法 173

6.26.3乙炔还原法 174

6.26.4酰脲含量的测定 175

6.27固氮酶的两个组分蛋白的分离和纯化 176

6.28钼铁蛋白中铁钼辅因子（FeMCo）的分离 177

6.29离体固氮酶固氮活性的测定 178

6.30固氮酶的需还原剂ATP水解和需ATP放氢的测定 179

6.31氢酶活性的测定 180

6.32固氮微生物遗传学研究中的突变体分离 181

6.32.1根瘤菌共生（sym）突变体的分离 182

6.32.2固氮菌nif突变体的分离 183

第7章 脂类代谢 184

7.1粗脂肪的提取和测定 184

7.2植物的脂肪酸组分分析 185

7.2.1植物油中不饱和脂肪酸的测定 185

7.2.2不饱和脂肪酸结构的分析 187

7.2.3芥酸的测定 188

7.2.3.1气相色谱法 188

7.2.3.2混浊法 188

7.2.4γ－亚麻酸含量测定 188

7.3脂肪氧化的分析 189

7.3.1酸价的测定 189

7.3.2皂化值的测定 190

7.3.3碘价的测定 190

7.3.4过氧化值的测定 191

7.3.5植物脂肪酸氧化 192

7.4脂类酶的分析 193

7.4.1脂肪酶的分离纯化及活性测定 193

7.4.2脂肪水解酶活性的测定 195

7.4.3脂肪氧化酶活性的测定 196

7.4.4磷脂酶活性的测定 198

7.4.5脂酰基载体蛋白（ACP）的提取 199

7.4.6酯酶同工酶的垂直板不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 199

7.4.7酸性磷酸酶的定位研究法 201

7.4.8酯酶的分离、纯化与活性测定 202

7.5磷脂和糖脂的测定 203

7.5.1磷脂的测定 203

7.5.2糖脂的测定 205

第8章 次生物质代谢 207

8.1生物碱 207

8.1.1吲哚生物碱含量的测定 207

8.1.2烟碱含量的测定 207

8.1.3喜树碱含量的测定 209

8.1.4异胡豆甙（strictosidine）合成酶活性的测定 210

8.1.5牻牛儿醇－10－脱氢酶活性的测定 211

8.2皂甙 212

8.2.1人参皂甙含量的测定 212

8.2.2黄芪甲甙含量的测定 214

8.2.3茶皂素含量的测定 215

8.3萘醌－紫草素含量的测定 216

8.4萜 217

8.4.1丹参酮含量的测定 217

8.4.2紫杉醇含量的测定 218

8.4.3倍半萜棉毒素含量的测定 219

8.4.4倍半萜合成酶活性的测定 220

8.4.5 3－羟基－3－甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGR）活性的测定 220

8.5 黄酮 222

8.5.1黄酮含量的测定 222

8.5.2异黄酮含量的测定 222

8.6酚 223

8.6.1多酚含量的测定 223

8.6.2儿茶素含量的测定 224

8.7其他 226

8.7.1精油的分析 226

8.7.2烟草中焦油含量的测定 227

8.7.3缩酚酸含量的测定 229

第9章 生长与发育 231

9.1 光敏色素 231

9.1.1光敏色素调控反应的鉴定 231

9.1.2隐花色素调控反应的鉴定 232

9.1.3光敏色素的提取与纯化 233

9.1.4光敏色素的测定 234

9.1.5获得不同光质辐射的方法 235

9.1.6光形态建成 236

9.1.7拟南芥种子萌发的光敏色素及激素调控 236

9.1.8外源植物激素对拟南芥种子萌发的影响 237

9.1.9白芥菜籽苗中的高辐照度反应 238

9.1.10蕨类植物孢子体发育中的蓝光反应 239

9.2信息传导 239

9.2.1 植物细胞信号转导研究中常用药理学试剂 239

9.2.2植物细胞G蛋白的检测 241

9.2.3细胞质中自由钙离子浓度的荧光探针测定法 243

9.2.4络合平衡体系中自由钙离子的微机计算方法 246

9.2.5疏水亲和层析法纯化钙调素（CaM） 248

9.2.6叶绿体类囊体膜磷酸酯酶的提取和测定 249

9.2.7 3′－5′－环腺苷酸磷酸二脂酶（PDE）的提取与CaM活性的测定 250

9.2.8酶联免疫法（ELISA）测定CaM总量 251

9.2.9尼克酸胺腺嘌呤二核苷酸激酶（NAD ase）法定量钙调素 252

9.2.10生物素标记钙调素检测钙调素结合蛋白 255

9.2.11 蛋白质磷酸化活性的测定 256

9.2.12植物细胞壁蛋白的提取和测定 258

9.3胚胎和种子发育 259

9.3.1拟南芥（Arabidopsis thaliana）的杂交方法 259

9.3.2水稻胚胎发育的观察（透明法） 261

9.3.3水稻种子储藏蛋白的分离 261

9.3.4拟南芥的萌发和培养 262

9.4营养器官的生长发育 263

9.4.1植物发育过程中组织和器官内几种同工酶的凝胶电泳分析 263

9.4.1.1过氧化物酶 264

9.4.1.2过氧化氢酶 265

9.4.1.3植物酯酶 266

9.4.2植物生长的测定（包括瞬时生长的测定） 266

9.4.2.1胚芽鞘伸长生长的测定 267

9.4.2.2细胞壁延展性的测量 267

9.4.2.3 与细胞壁离子型结合和共价型结合的过氧化物酶的提取 269

9.4.2.4细胞壁中异联酪氨酸的提取和鉴定 269

第10章 植物激素 271

10.1植物激素的提取 271

10.2植物激素的测定 272

10.2.1毛细管气相色谱法测定脱落酸 272

10.2.2气相色谱法测定乙烯、ACC和MACC 274

10.2.3气相色谱结合连续流动采气法测定乙烯 276

10.2.4气质联用（GCMS）法测定内源赤霉素 277

10.2.5高压液相色谱法测定内源细胞分裂素 280

10.2.6荧光分光光度法测定吲哚乙酸 281

10.2.7植物激素的免疫定量分析 283

10.2.7.1固相抗体型ELSA法测定ABA 283

10.2.7.2固相抗原型ELISA法测定IAA 284

10.3植物激素的生物检定 285

10.3.1莴苣种子的发芽试验 286

10.3.2莴苣下胚轴的伸长试验 286

10.3.3燕麦幼苗芽鞘法 287

10.3.4燕麦幼苗伸长生长检定法 287

10.3.5水稻幼苗生长试验 288

10.3.6α－淀粉酶生物检定法 288

10.3.7细胞分裂素的检定 289

10.3.8叶绿素生物合成实验 289

10.3.9侧芽生长抑制实验 290

10.3.10气孔关闭实验 291

10.3.11豌豆上胚轴的乙烯反应 292

10.3.12黄化水稻幼苗第二叶片弯曲法 293

第11章 环境和抗逆生理 294

11.1植物膜类脂的分析 294

11.2植物膜脂脂肪酸的分析 297

11.3膜相变与流动性分析 298

11.3.1差示扫描量热法 298

11.3.2顺磁共振波谱法 300

11.3.3荧光分光光度与荧光偏振法 301

11.4植物细胞质膜透性的测定 302

11.5游离脯氨酸的测定 303

11.6甜菜碱含量的测定 303

11.7丙二醛的测定 305

11.8甜菜碱醛脱氢酶的分离和活性测定 306

11.8.1甜菜碱醛脱氢酶的分离纯化 306

11.8.2甜菜碱醛脱氢酶活性的测定 307

11.9植物体内氧自由基的测定和清除 308

11.10热激蛋白的分离纯化 309

11.11盐胁迫蛋白的测定 311

11.12醇脱氢酶活性及同工酶测定 312

11.12.1醇脱氢酶活性的测定 313

11.12.2 ADH司工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳 313

11.13超氧物歧化酶及其同工酶的活性测定和同工酶显示 314

11.13.1 SOD活性的测定 314

11.13.2 SOD同工酶的显示 315

11.14抗坏血酸含量及抗坏血酸过氧化物酶活性的测定 315

11.14.1抗坏血酸含量的测定 315

11.14.2抗坏血酸过氧化物酶（AsA.POD）活性的测定 316

11.15多酚氧化酶活性的测定 317

11.15.1氧电极法 317

11.15.2比色法 317

11.16苯丙氨酸解氨酶（PAL）的提取、纯化及活性测定 318

11.16.1 PAL的提取——离心和盐析法的应用 318

11.16.2 PAL的纯化——分子筛和离子交换层析的应用 319

11.16.3 PAL的进一步纯化——亲和层析法的应用 321

11.16.4 PAL活性的测定——紫外分光光度计的应用 322

11.16.5 PAL纯度的初步鉴定——聚丙烯胺凝胶电泳的应用 323

11.17 5′－核苷酸酶活性的测定 324

11.18检测植物组织冰冻致死温度的差热分析法 325

11.19空间生命科学中几种常用方法 327

11.19.1微重力的地面模拟 327

11.19.1.1原理 327

11.19.1.2回转器回转作用的力学问题 327

11.19.1.3常用的回转器 330

11.19.2重力感受位点－平衡石的观察 331

11.19.3空间重离子辐射的核径迹探测法 332

11.19.4细胞染色体损伤的检测方法 333

11.19.5测定D3NA损伤的32pi后标记法 334

第12章 分子生物学 336

12.1植物组织中核酸类物质的分离和提取 336

12.1.1 DNA的快速分离和提取 336

12.1.1.1 SDS法 336

12.1.1.2十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）法 337

12.1.2从含有特殊物质的组织中分离核酸 337

12.1.2.1 DNA的分离和提取 337

12.1.2.2 RNA的分离和提取 339

12.1.3叶绿体中DNA的分离和提取 340

12.2植物组织的各种基因转化体系 341

12.2.1根癌农杆菌介导的烟草叶块组织转化 341

12.2.2根癌农杆菌介导的水稻幼胚转化 342

12.2.3真空渗透法转化拟南芥 344

12.2.4原生质体的PEG转化法 345

12.2.5基因枪导入基因的方法 346

12.3植物体内常用报道基因的检测方法 347

12.3.1 GUS基因的检测 347

12.3.2 CAT基因的检测 348

12.3.3 Opine基因的检测 349

12.4特定基因的分离和检测方法 350

12.4.1 cDNA文库的构建与筛选 350

12.4.2转座因子标签法分离植物基因 352

12.4.3 PCR方法 354

12.4.3.1 PCR的一般方法 354

12.4.3.2植物组织的直接PCR 356

12.4.4原位杂交 356

12.5 EMS诱变法筛选拟南芥突变体 358

第13章 现代农业技术 360

13.1现代温室的特点及其功能简介 360

13.2上海型智能温室 361

13.3葡萄的快速工厂化育苗 364

13.4球茎（根）花卉的花期调节 364

13.5促进果实成熟和上色 365

13.6用植物生长调节剂保花保果 366

13.7岩棉栽培 366

13.8基质栽培 368

13.9营养液膜 370

13.10几种切花的保鲜技术 372

附录： 374

Ⅰ. 植物组织培养常用的几种基本培养基（成分浓度单位rmg/L） 374

Ⅱ. 组织培养常用的植物激素、生长调节物质及一些药品 376

Ⅲ. 一些常用的缓冲溶液 376

Ⅳ. 一般化学试剂的分级 379

Ⅴ. 实验中常见化合物的分子量 379

Ⅵ. 常用酸、碱和其它化合物的浓度 381

Ⅶ. 摩尔数与摩尔浓度 381

Ⅷ. 植物生理学中常用计量单位及其换算表 382

Ⅸ. 几种蛋白质的物理性质 387

Ⅹ. 用于生物研究的放射性同位素 387

Ⅺ. 易变质及需要特殊方法保存的试剂 389

Ⅻ. 各种冷却剂的组成及冷却效果表 389

ⅩⅢ. 酸碱指示剂 390

ⅪⅤ. 离心力和离心机转速测算表 391

ⅩⅤ. 光的能量单位之间的关系 392

ⅩⅥ. 用考马斯亮蓝G250测定蛋白质 392

ⅩⅦ. SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 394

ⅩⅦ-Ⅰ 垂直板电泳 394

ⅩⅦ-Ⅱ双向电泳 397

ⅩⅦ-Ⅲ 3H标记蛋白放射自显影 399

ⅩⅧ. 平板凝胶的简易快速干燥 400

ⅪⅩ. 密度梯度超离心技术 401

ⅪⅩ-Ⅰ 速率区带技术（rate.zonal） 401

ⅪⅩ-Ⅱ 等比重技术（isopycnic） 407

ⅩⅩ. 安发马西生物技术公司简介 412

ⅩⅪ.华美生物工程公司简介 413

ⅩⅫ. 美国贝克曼库尔特公司（BECKMANCOULTER）简介 413

ⅩⅩⅢ. 美国Cole-Parmer仪器公司简介 413

ⅩⅩⅣ. 美国新布伦兹威克科学仪器公司简介 414