实用组织学技术PDF电子书下载

第一章　实验室设备及常用试剂 1

一、主要设备 1

（一）显微镜 1

（二）切片机及其他设备 4

二、常用试剂 6

第二章　取材及固定 8

一、动物的处死 8

二、取材与固定 8

三、固定剂 9

（一）各种试剂的一般性能 9

（二）常用的混合固定剂 11

四、利用微波照射固定生物标本简介 18

第三章　组织固定后的处理与切片 22

一、组织固定后的处理 22

（一）冲洗或漂洗 22

（二）脱水 22

（三）透明或媒浸 23

（四）二甲氧基丙烷石蜡包埋法 25

二、其他各种包埋法与切片法 27

第四章　染料、染色与常用染液染色法 36

一、染料 36

（一）天然染料 36

（二）人工合成染料 37

二、染色 42

（一）活体染色 42

（二）固定后染色 42

（三）染色时常会遇到的问题及其处理 45

三、常用染液染色法 46

（一）细胞核的染色 46

（二）细胞质常用染料的染色 56

（三）脂肪染料 57

第五章　细胞器与分裂期染色体 58

一、高尔基复合体 58

（一）Cajal铀银法 58

（二）Da Fano钴银法 59

（三）Aoyama镉银法 60

（四）Ludford锇酸法 60

二、线粒体 60

（一）Regaud铁矾苏木精法 60

（二）Aeidenhain铁矾苏木精法 61

（三）Altmann苯胺－酸性品红改变法 62

（四）Harmond坚牢绿法 63

三、细胞分裂期的中心体与染色体 64

（一）取材 64

（二）固定与切片 64

（三）染色法 64

第六章　纤维性结缔组织与细胞 67

一、胶原纤维 67

（一）Heidenhain“AZAN”三色法 67

（二）AZAN改变法 68

（三）Mallory三色法 68

（四）武兆发改良Mallory一步三色法 69

（五）Masson染色法（改变法之一） 69

（六）Masson染色法（改变法之二） 70

（七）Van Gieson染色法 71

二、弹性纤维 71

（一）Schmorl染色法 71

（二）台盼蓝活体染色荧光观察法 72

（三）Masson三色染色法 72

（四）Verhoeff碘-苏木精染色法 73

三、网状纤维 74

四、巨噬细胞与成纤维细胞 77

（一）注射台盼蓝显示法 78

（二）天青－伊红－瑞氏染色法 78

五、浆细胞 79

（一）甲基绿－派洛宁染色法 79

（二）天青A－伊红染色法 79

六、肥大细胞 80

（一）中性红染色法 80

（二）硫堇染色法 80

（三）甲基胺蓝染色法 80

（四）肥大细胞的腹腔液离心沉淀法 81

（五）阿利新蓝－番红法 81

（六）肥大细胞颗粒酸性品红染色法 81

第七章　软骨和骨 83

一、软骨 83

（一）透明软骨茜素红－美蓝染色法 83

（二）透明软骨的临界电解质浓度法 84

（三）PAS法 84

（四）弹性软骨染色法 84

（五）纤维软骨染色法 84

二、骨 84

（一）磨骨 84

（二）脱钙骨 85

（三）脱钙剂与脱钙 87

（四）染色 89

（五）电镜超微结构骨组织标本制备法 89

（六）骨碱性磷酸酶与磷酸盐显示法 90

第八章　血液及骨髓 92

一、血液和骨髓涂片法 92

（一）血液涂片 92

（二）骨髓涂片 93

二、涂片染色 94

（一）瑞氏染色 94

（二）吉姆萨染色 94

（三）Wright-Giemsa染液混合染色 95

三、网织红细胞活体染色 95

（一）网织红细胞试管染色法 95

（二）网织红细胞玻片染色法 96

四、骨髓切片常规染色 96

（一）制作骨髓切片 96

（二）骨髓切片常规染色 96

五、血细胞的组织化学反应 98

（一）核酸 98

（二）多糖 99

（三）含铁血黄素 99

（四）酶 100

六、血细胞酶的细胞化学超微结构观察法 107

（一）分离外周血中的白细胞 107

（二）分离外周血中的无粒白细胞 108

（三）分离外周血内的粒细胞 109

（四）分离外周血内的血小板 110

（五）血细胞常规电镜细胞化学标本制作 111

（六）白细胞过氧化物酶电镜标本制作 112

（七）白细胞碱性磷酸酶电镜标本制作柠檬酸铅法 113

（八）白细胞酸性磷酸酶电镜标本制作 113

七、多能造血干细胞（CFU-S）的测定法 115

（一）外源性CFU-S测定法 115

（二）内源性CFU-S测定法 118

（三）本实验技术建立的意义 118

八、巨核系祖细胞（CFU-Meg）的体外培养 118

（一）小鼠巨核系祖细胞的体外培养 118

（二）小鼠巨核细胞集落的胆碱酯酶染色法 120

（三）人巨核系祖细胞的体外培养 121

九、粒－单系祖细胞（CFU-GM）的体外培养 122

（一）小鼠粒－单系祖细胞的体外培养 122

（二）人粒－单系祖细胞的体外培养 124

十、红系造血祖细胞（BFU-E）的体外培养 124

（一）实验设备与器材 125

（二）准备试剂 125

十一、人植物血凝素白细胞条件培养液（PHA-LCM）制备 126

十二、小鼠美洲商陆脾细胞条件培养液（PWN-SCM）制备 126

十三、培养步骤和方法 127

十四、培养结果 128

第九章　肌肉组织 129

一、骨骼肌 129

（一）Gomori三色染色一步法 129

（二）磷钨酸苏木精快染法 130

（三）磷钨酸苏木精慢染法 131

（四）骨骼肌组织活检的酶组化法 132

（五）Ralis等（1977）肌纤维染色法 136

二、心肌 136

三、平滑肌 137

第十章　神经组织 139

一、Golgi法显示神经元胞体形态 139

二、Golgi-Cox法显示神经元胞体形态 142

三、灌注的快速Golgi法 143

四、神经元胞体的尼氏体染色法 144

（一）硫堇染色法显示尼氏体 145

（二）棓花青染色法显示尼氏体 145

五、神经元纤维与轴索的银染法 146

（一）Holmes镀银法 146

（二）LindeR镀银法（1978） 147

（三）Sevier-Munger改变法 148

（四）Cajal水合氯醛（Ⅵ）法 149

六、肠肌丛镀银法 150

七、氯化金法显示完整的运动终板、肌梭、腱梭和环层小体（Ranvier改变法） 150

（一）氯化金法之一 150

（二）氯化金法之二 151

八、美蓝活体染色显示周边神经终末结构 151

九、髓鞘的染色 153

（一）Pal-Weigert法 154

（二）劳克坚牢蓝法 155

（三）施－兰氏切迹染色法 156

十、溃变纤维显示法 157

（一）Marchi法的Swank-Davenport改变法 157

（二）Eager法显示溃变轴索 157

（三）Ebbesson-Robinson双重银法 158

十一、神经胶质 159

（一）Del Rio-Hortega碳酸银法显示小胶质细胞（Penfield改良法） 159

（二）Grono法显示少突胶质细胞 161

（三）Ramon Y Cajal氯化金升汞法显示星状胶质细胞 162

（四）Marchalls法显示小胶质和少突胶质细胞 163

（五）Golgi法显示少突胶质细胞 163

（六）Scoff改变法石蜡或冰冻切片显示三种神经胶质细胞 164

十二、脑的大厚片制作法 165

（一）Mülligan的脑块浸染法 165

（二）脑的各部结构大面积火棉胶切片法 166

十三、中枢神经组织超薄大片的制作技术 167

十四、辣根过氧化物酶（HRP）微量注射与离子透入法（轴突传递法的应用） 168

（一）辣根过氧化物酶微量注射法 168

（二）辣根过氧化物酶离子透入法 170

（三）四甲基联苯胺显色法 171

第十一章　血管注射技术 173

第十二章　消化系统和呼吸系统 176

一、消化系统 176

（一）常规苏木精－伊红染色法 176

（二）过碘酸Schiff反应 178

（三）阿利新蓝染色法 178

（四）粘液卡红染色法 178

（五）小肠潘氏细胞染色法 179

（六）闭锁堤 179

（七）消化管的内分泌细胞 179

（八）肠肌丛（Auerbach神经丛）镀银法 184

（九）肝血管双色注射 185

（十）肝血窦内星状细胞活体注射显示法 185

（十一）肝细胞糖原的组织化学显示法 186

（十二）肝细胞间的胆小管显示法 186

（十三）肝贮脂细胞显示法 188

（十四）胰岛A、B及D细胞显示法 189

二、呼吸系统 192

（一）取材 192

（二）固定 192

（三）嗅细胞及神经显示法 193

（四）肺的弹性纤维染色法 193

（五）肺的网状纤维染色法 193

（六）肺泡毛细血管网注射显示法 193

（七）肺泡上皮镀银法 193

（八）肺泡Ⅱ型细胞显示法 194

（九）分离气管上皮细胞法 194

第十三章　泌尿系统与生殖系统 196

一、泌尿系统 196

（一）肾的常规染色 196

（二）球旁细胞（JG）颗粒染色 196

二、生殖系统 198

（一）精液内的精子检测 199

（二）三色法 199

（三）Papanicoloau精液涂片染色法 200

（四）精子核的苯胺蓝染色法 201

（五）精子核的萘醌磺酸钠（NQS）染色法配制试剂 202

（六）精子顶体的结晶紫染色法 203

（七）精子顶体的酶活性检测—底膜法 204

（八）人类精子头部膜的超薄切片改进染色法 205

第十四章　内分泌腺 208

一、甲状腺滤泡旁细胞显示法 208

（一）铅苏木精法 208

（二）Grimellus银染法 209

（三）Cajal银染法 210

二、甲状旁腺嗜酸性腺细胞 211

三、肾上腺嗜铬细胞 211

四、松果体细胞浸银显示法 215

五、脑垂体 216

（一）PFA-AB-PAS-OG法 217

（二）AT-LFB-PAS法 218

（三）BrAB-OFG法 220

（四）铬矾－苏木精－焰红法 221

（五）醛－品红染色法显示神经分泌物质 223

（六）过甲酸－阿利新蓝染色法显示神经分泌物质法 224

（七）垂体细胞的染色 224

第十五章　皮肤、眼球及内耳 225

一、皮肤 225

（一）皮肤的一般染色 225

（二）黑色素细胞的显示 225

（三）细胞间桥 229

二、眼球 229

（一）Szent-Gyorgi固定眼球切片法 229

（二）复方甲醛固定眼球法 230

（三）甲醛－冰醋酸－酒精（FAA）固定眼球法 230

（四）胚鼠视网膜移植入成年鼠视网膜损伤部位法 231

三、内耳 232

（一）常规染色法 232

（二）内耳蜗螺旋神经节双极神经细胞镀银显示法（De Castro） 233

第十六章　染色体标本的制作 235

一、用外周血作染色体培养 235

（一）器材准备 235

（二）试剂配备 235

（三）接种培养 236

（四）制作染色体标本 236

二、骨髓染色体直接制备法 237

三、胸、腹水癌细胞染色体制备 238

四、小鼠睾丸生精细胞染色体制作 238

五、染色体分带技术 239

六、姊妹染色单体互换技术 240

七、用羊水细胞作染色体培养 243

八、用培养细胞染色体标本作扫描电镜观察法 243

九、自制植物血凝素（PHA）法 244

（一）生理盐水提取法 244

（二）乙醚－酒精提取法 244

第十七章　脱落细胞的涂片与染色 245

一、标本的处理 245

（一）常用的标本采集法 246

（二）标本的固定 246

（三）染色法 246

二、脱落细胞的观察 249

（一）正常女性生殖管道的脱落细胞 249

（二）关于病变的细胞学检查 250

（三）特殊的非典型状态 251

（四）呼吸道的脱落细胞 258

（五）胸、腹腔渗出液中的脱落细胞 259

三、性染色质的染色法 259

（一）Moore焦油紫染色法 259

（二）Guard猩红－坚牢绿染色法 260

四、核仁组成区相关嗜银蛋白（Ag-NOR）染色法 260

（一）取材与固定 261

（二）染色步骤 261

第十八章　细胞分离技术 263

一、细胞分离法 263

（一）粘附法 263

（二）密度梯度离心法 267

（三）亲合免疫分离法 273

（四）荧光激活细胞分类器 275

二、细胞计数 276

三、细胞活性测定 278

（一）台盼蓝染色法 278

（二）伊红Y染色法 278

（三）苯胺黑染色法 279

（四）吖啶橙荧光素测定细胞活性 279

（五）二乙酸盐荧光素测定细胞活性 280

第十九章　常用的组织化学方法 281

一、核酸 281

（一）Feulgen反应显示DNA 282

（二）甲基绿－派洛宁染色显示DNA与RNA 285

（三）Schiff反应块染法显示DNA 287

（四）甲基绿的快速提纯法 288

二、碳水化合物 290

（一）碳水化合物分类 290

（二）碳水化合物各组分显示法 291

三、蛋白质与氨基酸 299

（一）蛋白质结合的氨基 300

（二）羟酚基 300

（三）二硫键与硫氢基 301

（四）吲哚基 304

（五）胍基 305

（六）二硝（基）氟苯法（DNFB）检测蛋白质 306

（七）汞－溴酚蓝法显示蛋白质 308

（八）坚牢绿法显示碱性蛋白质 308

（九）蛋白质各种活性基团封阻法 309

四、脂类 310

（一）锇酸法显示非饱和脂质 311

（二）溴－苏丹黑法显示脂类 311

（三）溴－丙酮－苏丹黑法显示磷脂 312

（四）油红O法显示脂类 312

（五）硫酸尼罗蓝法显示酸性与中性脂类 313

（六）铜－红氨酸法显示游离脂肪酸 313

（七）过氯酸－萘醌（PAN）法显示胆固醇及其酯类 314

（八）酸性苏木红法显示磷脂 315

（九）浆醛反应法显示缩醛磷脂 317

（十）脂类的抽提 317

（十一）油红O显示培养的平滑肌细胞内所含脂类 318

（十二）陈旧性脂肪组织的深冻切片法 319

五、酶类 319

（一）酶的分类 320

（二）酶的组织化学反应法 320

（三）影响显示酶的因素 321

（四）碱性磷酸酶钙－钴显示法 321

（五）碱性磷酸酶重氮盐偶联显示法 322

（六）酸性磷酸酶铅沉淀显示法 322

（七）酸性磷酸酶重氮盐偶联法显示法 323

（八）酸性磷酸酶偶氮色素法显示法 324

（九）表皮郎格罕细胞Na-KATPase显示法 325

（十）枸橼酸铅法显示脑组织的Ca2+-ATPase超微结构定位 326

（十一）硫代胆碱法显示胆碱酯酶（koelle） 327

（十二）koelle块染法显示胆碱酯酶 329

（十三）Karnovsky-Roots直接法显示胆碱酯酶 329

（十四）脑细胞的细胞色素氧化酶的二氨基联苯胺（DAB）显示法 330

（十五）过氧化物酶－抗过氧化物酶（PAP）法显示γ－氨基丁酸 331

第二十章　荧光显微镜技术和应用 333

一、荧光显微镜的使用 333

二、荧光色素与荧光染色 337

三、组织和细胞的自发性荧光 340

（一）显示肾上腺髓质细胞中去甲肾上腺素的荧光方法 341

（二）显示神经细胞、神经纤维和肥大细胞等单胺成分的荧光法 341

四、细胞和组织的荧光染色法 343

（一）活细胞荧光染色法 343

（二）固定标本荧光染色法 345

第二十一章　免疫细胞化学技术及应用 352

一、免疫细胞化学技术的基本原理 352

（一）直接法 352

（二）间接法 354

（三）补体法 355

二、免疫细胞化学技术方法 356

（一）免疫荧光技术 356

（二）免疫酶标技术 358

（三）过氧化物酶－抗过氧化物酶复合物法 359

（四）标记亲合素－生物素法 361

（五）桥连亲合素生物素法 362

（六）亲合素－生物素－过氧化物酶复合物法 363

三、免疫细胞化学技术的应用 365

（一）在细胞学方面的应用 365

（二）在微生物学中的应用 367

（三）在寄生虫学中的应用 368

（四）在临床病理学中的应用 370

（五）在自身免疫性疾病中的应用 370

四、免疫金的细胞化学和组织化学技术 371

（一）制备胶体金 371

（二）待标记蛋白质和胶体金的处理 373

（三）最适稳定蛋白质浓度的确定 373

（四）蛋白质的胶体金标记 374

（五）胶体金探针的纯化 374

（六）胶体金探针的鉴定 375

五、光镜免疫金（IGS）法和免疫金银法（IGSS） 375

（一）IGS间接法 375

（二）IGSS间接法 376

六、电镜免疫金法 376

（一）包埋前染色步骤 376

（二）包埋后染色步骤 377

（三）胶体金双标或多标技术 377

第二十二章　放射自显影术 379

一、放射自显影术的基本原理 379

二、实验室设备及常用试剂 380

三、操作方法 383

（一）整体动物放射自显影术 383

（二）显微放射自显影术 384

（三）体外培养细胞的放射自显影术 385

（四）电子显微镜放射自显影术 386

四、注意事项 388

第二十三章　电镜标本制备技术 389

一、超薄切片技术 389

（一）配制固定液 389

（二）取材与固定 392

（三）脱水 395

（四）包埋 395

（五）超薄切片前的准备 398

（六）超薄切片 403

（七）染色 406

二、扫描电镜标本制备技术 411

（一）取材和固定 411

（二）脱水和干燥 412

（三）喷镀 413

三、冷冻断裂术 416

四、冷冻蚀刻复型术 417

1．冷冻 417

2．断裂 418

3．蚀刻 418

4．复型 418

5．分裂复型膜 418

第二十四章　胚胎标本的制作法 419

一、两栖类胚胎标本的制作 419

（一）采卵及人工受精 419

（二）卵裂，囊胚，原肠胚及神经胚 420

（三）固定与固定液 420

（四）卵的胶质膜脱除法 420

（五）脱水与包埋 420

（六）染色 421

二、鸡胚标本的制作 421

（一）卵育法 421

（二）取胚法 422

（三）固定 422

（四）染色 423

（五）鸡胚切片及整体标本制备 423

三、小白鼠胚胎标本的制作 423

（一）选择动物 423

（二）小白鼠的性周期 424

（三）小白鼠的交配与计算胎龄 424

（四）受精和卵裂 425

（五）取材 425

（六）固定 426

（七）包埋与切片 426

（八）整装标本 427

四、人胚或猪、羊胚标本的制作 429

（一）整体标本法 429

（二）连续切片法 430

第二十五章　细胞形态计量方法 432

一、细胞群体的抽样测量与误差 433

二、测试系统 434

三、细胞二维形态参数的测定 436

四、细胞三维参数的测定 438

五、误差的计算方法 447

六、实用举例 450

第二十六章　显微镜摄影与显微摄影 458

一、显微镜摄影 458

（一）显微镜 458

（二）摄影操作 459

二、显微摄影 465

三、感光材料 467

（一）黑白全色负片 467

（二）彩色负片 467

（三）黑白相纸 467

（四）彩色相纸 467

（五）黑白及彩色电影正片 467

（六）彩色反转片 468

四、彩色正片与彩色相纸加工时的校色 468

（一）三种滤色片之间的成色关系 468

（二）校色举例和记录法 468

五、显影 469

（一）感光材料曝光的显影操作安排 469

（二）黑白胶片、相纸显影 469

（三）彩色负片显影 471

（四）国产油溶性高温彩色正片显影 472

（五）彩色涂塑相纸的显影（EP-2洗印） 473

六、关于实验室摄影工作的几点说明和建议 475