生物化学实验教程PDF电子书下载

第一章　生物化学实验基本知识 1

一、生物化学实验室规则 1

二、生物化学实验记录和实验报告的书写 1

（一）实验记录 1

（二）实验报告 2

三、生物化学实验分析方法的选择 2

（一）方法和标准品的分级 2

（二）方法选择的要求 3

（三）方法选择的步骤 3

四、生物化学实验分析方法的评价 4

（一）精密度 4

（二）准确性和特异性 5

（三）灵敏度 5

（四）其他 5

五、常用实验样品的收集制备 5

（一）血液样品 6

（二）尿液样品 6

（三）组织样品 6

六、生物化学实验常用仪器设备基本操作 7

（一）玻璃仪器的洗涤及干燥 7

（二）吸量管的种类和使用 8

（三）微量加样器的使用 9

（四）溶液的混匀方法 10

（五）离心机的使用 11

（六）分光光度计的原理及使用 13

（七）PCR仪的原理及使用 15

七、生物化学常用实验技术 17

（一）离心技术 17

（二）光谱分析技术 19

（三）电泳技术 23

（四）层析技术 27

（五）基因工程技术 33

（六）酶免疫技术 37

（七）放射性同位素技术 38

（八）PCR技术 39

（九）杂交技术 41

（十）RNAi技术 41

第二章　蛋白质实验 43

实验一　蛋白质含量的测定 43

一、双缩脲法测定血清总蛋白 43

二、紫外分光光度法测定血清蛋白质 45

三、酚试剂法测定蛋白质 46

四、溴甲酚绿法测定血清清蛋白 48

五、考马斯亮蓝法测定蛋白质 50

实验二　蛋白质的沉淀、变性反应 52

一、蛋白质的盐析 52

二、重金属沉淀蛋白质 53

三、生物碱和有机酸沉淀蛋白质 53

四、无机酸沉淀蛋白质 54

五、有机溶剂沉淀蛋白质 55

六、加热变性沉淀蛋白质 55

实验三　血清蛋白质的盐析及清／球比的测定 56

实验四　蛋白质等电点的测定 58

实验五　血清蛋白质的醋酸纤维素薄膜电泳 59

实验六　聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质 62

实验七　等点聚焦电泳分离血清蛋白质 65

实验八　凝胶层析法（分子筛）测定蛋白质分子量 67

实验九　SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 69

第三章　酶实验 72

实验十　影响唾液淀粉酶活性的因素 72

一、温度对唾液淀粉酶活性的影响 72

二、酸碱度对唾液淀粉酶活性的影响 73

三、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响 74

实验十一　作用物浓度及酶浓度对酶反应速度的影响 75

实验十二　酶的特异性与高效性 78

一、酶的特异性 78

二、酶的高效性 79

实验十三　单底物酶米氏常数（Km）测定 80

一、碱性磷酸酶的Km测定 80

二、蔗糖酶Km测定 83

三、脲酶Km值的测定 85

实验十四　丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用 88

实验十五　血清乳酸脱氢酶同工酶的电泳分离 90

一、醋酸纤维薄膜电泳分离血清乳酸脱氢酶同工酶 90

二、琼脂糖凝胶电泳分离血清乳酸脱氢酶同工酶 92

三、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清乳酸脱氢酶同工酶 95

实验十六　乳酸脱氢酶及辅酶的作用 97

实验十七　细胞色素体系的作用及其抑制 98

实验十八　血清谷丙转氨酶活性测定 100

第四章　物质代谢 103

实验十九　血糖浓度的测定 103

一、邻甲苯胺法 103

二、葡萄糖氧化酶法 105

实验二十　糖耐量试验 106

实验二十一　尿糖的定性测定 107

实验二十二　胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响 109

实验二十三　糖的酵解作用 111

实验二十四　饱食和饥饿对肝糖原含量的影响 113

实验二十五　剧烈运动对尿中乳酸含量的影响 115

实验二十六　酮体的生成与氧化 116

一、亚硝基铁氰化钠法 116

二、碘量法测定 118

实验二十七　血清甘油三酯的测定 120

一、乙酰丙酮显色法 120

二、磷酸甘油氧化酶法 122

实验二十八　血清胆固醇的测定 124

一、邻苯二甲醛显色法 124

二、醋酸酐-硫酸显色法 126

三、胆固醇氧化酶法 127

实验二十九　血清磷脂的测定 128

实验三十　血清脂蛋白的分离 130

一、琼脂糖凝胶电泳法 130

二、超速离心法 132

实验三十一　免疫透射比浊法测定脂蛋白（a） 133

实验三十二　磷钨酸-镁沉淀法测定血清HDL-胆固醇 135

实验三十三　薄膜层析法分离血清脂类 137

实验三十四　血清过氧化脂质的测定 138

实验三十五　血清尿素氮的测定 140

一、二乙酰一肟法测定血清尿素 140

二、速率法测定血清尿素 142

三、血清尿素氮测定（脲酶-Berthelot比色法） 143

实验三十六　精氨酸酶与尿素的生成 145

一、纸片法 145

二、扩散皿法 147

实验三十七　转氨基作用与氨基酸纸层析 148

实验三十八　血清尿酸测定 150

实验三十九　血清总胆红素和结合胆红素测定——改良Jendrassik-Grof（J-G）法 152

实验四十 胡萝卜素的柱层析分离 155

实验四十一　血红蛋白及核黄素的凝胶层析分离 156

实验四十二　维生素C的测定——2,6-二氯酚靛酚滴定法 159

实验四十三　血清钙的测定（甲基百酚兰比色法） 162

实验四十四　血磷的测定——还原钼蓝法 164

实验四十五　血浆二氧化碳结合力测定——酸碱滴定法 165

第五章　核酸分子生物学实验 167

实验四十六　动物组织中核酸的提取与鉴定 167

实验四十七　组织DNA、RNA分离、提纯及鉴定 170

实验四十八　核酸的增色效应 172

实验四十九　核酸的定量测定 173

一、定磷法 173

二、紫外分光光度法 175

三、RNA的定量测定（苔黑酚法） 177

四、DNA的定量测定（二苯胺法） 178

实验五十　质粒DNA的提取与琼脂糖凝胶电泳鉴定 180

实验五十一　质粒DNA的酶切与鉴定 184

实验五十二　质粒DNA的转化 186

实验五十三　聚合酶链反应（PCR）技术 188

实验五十四　Southern杂交 190

实验五十五　Northern杂交 194

实验五十六　Western杂交 197

实验五十七　聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色分析DNA 199

实验五十八　从琼脂糖凝胶中分离回收DNA片段 201

实验五十九　DNA片段的连接反应 203

实验六十　外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 205

第六章　生物化学实验附录 208

一、实验基础知识 208

（一）元素相对原子量表 208

（二）实验室常识 209

（三）实验误差的产生与处理 210

（四）离心机转速与相对离心力（RCF）的换算 210

二、试剂的配制 211

（一）配制试剂注意事项 211

（二）化学药品的分类、分级 212

（三）易变质及需要特殊方法保存的试剂 212

（四）纯水的制备和检验 213

（五）常用酸碱试剂的比重和浓度 213

（六）常用洗液的配制及应用 214

（七）常用标准溶液的配制 214

（八）常用酸碱指示剂的选择及运用 215

（九）常用缓冲液的配制 216

（十）饱和硫酸铵的配制 220

（十一）一些常用化合物的溶解度 221

（十二）聚丙烯酰胺凝胶电泳常用染色法 222

三、常用层析基质 222

（一）离子交换纤维素 222

（二）聚丙烯酰胺凝胶的技术数据 223

（三）琼脂糖凝胶的技术数据 223

（四）凝胶过滤层析介质的技术数据 224

（五）离子交换层析介质的技术数据 226

四、常用缓冲液及培养基的配制 227

（一）常用缓冲液 227

（二）电泳缓冲液及凝胶加样缓冲液 227

（三）储备液的配制 229

（四）常用培养基的配制 230

五、生化与分子生物学常用数据库及网址 232