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绪论 1

第1章 光谱分析技术 3

1.1 基本理论 3

1.1.1 光分析的范畴 3

1.1.2 原理 3

1.1.3 光谱分析仪器 5

1.2 紫外-可见吸收光谱分析 9

1.2.1 概况 9

1.2.2 原理 10

1.2.3 光谱分析的基本概念 11

1.2.4 化合物中的发色基团及助色基团 13

1.2.5 紫外-可见分光光度计 14

1.2.6 主要技术指标与校正 17

1.2.7 紫外-可见吸收光谱应用范围 19

1.2.8 紫外-可见吸收光谱分析的条件和影响因素 21

1.2.9 应用实例 22

1.3 分子发射光谱——荧光光度分析法 25

1.3.1 概况 25

1.3.2 原理 25

1.3.3 激光光谱和发射光谱的关系 26

1.3.4 荧光量子产率与分子结构 30

1.3.5 仪器基本结构 32

1.3.6 影响荧光分析的因素 35

1.3.7 荧光分析方法 38

1.3.8 荧光分析法的应用 38

1.4 原子吸收光谱分析法 39

1.4.1 概况 39

1.4.2 原理 40

1.4.3 原子吸收分光光度计 41

1.4.4 仪器的分类 44

1.4.5 原子吸收光谱分析的干扰及消除方法 45

1.4.6 无火焰法背景校正 46

1.4.7 原子吸收光谱的分析方法 48

参考文献 50

第2章 层析技术 51

2.1 基本理论 51

2.1.1 概况 51

2.1.2 原理 55

2.1.3 分离度 60

2.1.4 层析对塔板高度的影响 63

2.1.5 基本色谱分离方程的应用 64

2.2 液相层析 65

2.2.1 概况 65

2.2.2 原理 65

2.2.3 液相层析仪器 65

2.2.4 固定相 67

2.2.6 应用 68

2.2.5 流动相 68

2.3 吸附层析 70

2.3.1 概况 70

2.3.2 原理 70

2.3.3 吸附介质的分离及其性质 71

2.3.4 吸附层析技术 75

2.3.5 分离过程 75

2.3.6 应用实例 76

2.4.1 概述 77

2.4 离子交换层析 77

2.4.2 原理 78

2.4.3 离子交换层析介质 79

2.4.4 常用的离子交换层析介质及其特性 80

2.4.5 离子交换介质的技术指标 80

2.4.6 离子交换层析技术 82

2.4.7 脱曲线的分析 86

2.4.8 影响离子交换层析的因素 86

2.4.9 离子交换剂的处理与再生 88

2.4.10 应用实例 89

2.5 亲和层析技术 90

2.5.1 概况 90

2.5.2 原理 90

2.5.3 亲和层析介质 91

2.5.4 亲和层析介质的制备 91

2.5.5 亲和层析技术 96

2.5.6 影响亲和层析的主要因素 98

2.5.7 应用实例 99

2.6 排阻层析 102

2.6.1 概况 102

2.6.2 原理 102

2.6.3 凝胶层析介质 106

2.6.4 排阻层析分离条件的确定 111

2.6.5 凝胶介质的后处理 112

2.6.6 排阻层析的分离模式 113

2.6.7 应用实例 114

2.7 金属鳌合层析 116

2.7.1 概况 116

2.7.2 原理 116

2.7.3 金属鳌合介质 117

2.7.4 分离的条件选择 119

2.7.5 金属鳌合层析分离技术 120

2.7.6 金属鳌合层析应注意的问题 121

2.7.7 应用实例 122

2.8 聚焦层析 123

2.8.1 概况 123

2.8.2 原理 124

2.8.3 聚焦层析介质 125

2.8.4 缓冲液 125

2.8.5 层析步骤 126

2.8.7 应用实例 127

2.8.6 聚焦层析注意的问题 127

2.9 疏水层析 128

2.9.1 概况 128

2.9.2 原理 128

2.9.3 疏水介质 130

2.9.4 疏水层析的影响因素 130

2.9.5 应用实例 132

2.9.6 离子对层析 133

2.10 灌注层析 134

2.10.1 概况 134

2.10.2 原理 135

2.10.3 灌注介质 135

2.10.4 影响灌注层析的因素 136

2.10.5 应用实例 137

参考文献 137

3.1.1 概况 139

3.1 基本理论 139

第3章 蛋白质电泳技术 139

3.1.2 常用术语 140

3.1.3 原理 140

3.1.4 分类 142

3.1.5 电泳仪及附属设备 143

3.1.6 电泳的操作模式 144

3.1.7 凝胶电泳的支持介质 145

3.1.8 影响电泳的环境因素 152

3.1.9 染色方法 153

3.2 净电荷聚丙烯酰胺凝胶电泳 156

3.2.1 原理 156

3.2.2 电泳的类型 158

3.2.3 相关名词 158

3.2.4 电泳支持介质的性质 158

3.2.5 电泳条件的选择 158

3.2.6 电泳方法 163

3.2.7 应用实例 166

3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 171

3.3.1 概况 171

3.3.2 原理 172

3.3.3 影响 SDS-复合物形成的主要因素 175

3.3.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的类型 175

3.3.5 电泳条件的选择 176

3.3.6 低相对分子质量多肽的 SDS-PAGE 177

3.3.7 生物活性的回复 178

3.3.8 SDS-电泳结果处理 179

3.3.9 应用实例 180

3.4 等电聚焦电泳 183

3.4.1 概述 183

3.4.2 蛋白质等电聚焦电泳的基本原理 183

3.4.4 载体两性电解质 184

3.4.3 pH 梯度的产生方式 184

3.4.5 电泳条件的选择 186

3.4.6 应用实例 190

3.5 双向电泳 193

3.5.1 概述 193

3.5.2 双向电泳技术 194

3.5.3 双向电泳模式的选择 197

3.5.4 双向电泳注意的问题 197

3.5.5 应用实例 198

3.6 蛋白质印迹 201

3.6.1 原理 201

3.6.2 蛋白质印迹条件的选择 202

3.6.3 应用实例 206

参考文献 207

4.1.2 仪器的基本结构 209

4.1.1 概况 209

4.1 高效液相色谱 209

第4章 微量分析技术 209

4.1.3 层析柱的结构及制备技术 215

4.1.4 高效液相层析的分离模式 218

4.1.5 应用实例 221

4.2 高效毛细管电泳 222

4.2.1 概况 222

4.2.2 原理 226

4.2.3 毛细管电泳仪的结构 227

4.2.4 电极液 228

4.2.5 进样方式 229

4.2.6 毛细管电泳的分离模式与应用实例 229

4.3 蛋白质 N 末端氨基酸序列测定 235

4.3.1 概况 235

4.3.2 原理 236

4.3.3 蛋白质 N 末端氨基酸测定序列仪 238

4.3.4 影响序列测定的因素 240

4.3.5 蛋白质序列测定应注意的问题 241

4.3.6 结果分析 243

4.4 蛋白质结晶技术 244

4.4.1 常规结晶技术 244

4.4.2 蛋白质微量结晶技术 251

参考文献 253

第5章 免疫学技术 255

5.1 免疫学的基本概念 255

5.1.1 免疫学的范畴 255

5.1.2 免疫的功能 255

5.1.3 免疫系统的组织结构 255

5.1.4 抗原 255

5.1.5 免疫球蛋白 257

5.1.6 免疫佐剂 260

5.1.7 免疫应答 260

5.1.8 抗原抗体反应 262

5.1.9 人工制备抗体的类型 263

5.2 抗血清的制备 264

5.2.1 原理 264

5.2.2 制备方法 264

5.2.3 应用实例 265

5.3 抗体的纯化 266

5.3.1 概况 266

5.3.2 应用实例 267

5.4 抗体的检测 268

5.4.1 原理 268

5.4.2 几种常用检测方法的原理 269

5.4.3 应用实例 270

5.5 酶联免疫吸附测定 273

5.5.1 概况 273

5.5.2 原理 275

5.5.3 几种常用类型的 ELISA 测定法 275

5.5.4 酶结合物 276

5.5.5 实验条件 281

5.5.6 应用实例 283

5.5.7 注意事项 284

参考文献 284

第6章 离心技术 286

6.1 基本理论 286

6.1.1 概况 286

6.1.2 原理 286

6.1.3 颗粒在离心场中的沉降 288

6.2 离心机 293

6.2.1 概况 293

6.2.2 分类 293

6.2.3 基本结构 294

6.2.4 转头的基本构造及其参数 296

6.3.1 概况 301

6.3.2 离心方法 301

6.3 离心技术 301

6.3.3 离心技术 304

6.3.4 离心机的安全操作与保养 307

参考文献 308

第7章 膜分离技术 309

7.1 过滤技术 309

7.1.1 过滤作用 309

7.1.2 过滤速度 309

7.1.3 过滤装置 309

7.1.4 影响因素 309

7.1.5 提高过滤速度的措施 310

7.2 膜分离技术 310

7.2.1 概况 310

7.2.2 原理 310

7.2.3 膜的性质 311

7.2.4 分离方式 311

7.3 超滤技术 312

7.3.1 原理 313

7.3.2 超滤装置与工作原理 313

7.3.3 几种超滤装置性能的比较 314

7.3.4 分级分离 314

7.3.5 中空纤维柱的选择及使用 314

7.3.6 影响超滤的几个因素 315

7.3.7 超滤技术的应用 315

参考文献 315

附录 316

附录一 常用缓冲溶液的配制方法 316

附录二 硫酸铵饱和度的常用计算表 321

附录三 常用市售酸碱的浓度 322

附录四 常用蛋白质相对分子质量标准参照物 323

附录五 某些蛋白质的物理性质 323

附录六 一些常见蛋白质相对分子质量参考值 324

附录七 一些常见蛋白质等电点参考值 325