微生物化学分类的实验方法PDF电子书下载

目录 1

1．细胞壁 7

Ⅰ　细菌的细胞壁 8

1．细胞壁和细菌分类 8

2．作为对象物的细胞壁构成成分 11

1）肽聚糖 11

a．肽部分的结构 11

b．糖部分的结构 14

2）其他高分子化合物 15

a．脂多糖（lipopolysaccharide;LPS） 15

b．磷壁酸类 16

c．细胞壁多糖 18

3．细胞壁的制备方法 18

1）菌体的准备 19

a．机械破坏法 21

2）破坏菌体的方法 21

b．化学处理法 25

3）差示离心分离 28

a．低速离心分离（未破坏菌的去除） 29

b．中速离心分离（其他可溶成分的去除） 29

4）细胞壁的精制方法 30

a．蛋白酶处理 30

b．化学处理 31

5）细胞壁的含量及纯度 33

4．细胞壁类型的确定方法 35

1）特异氨基酸类型的确定法 35

2）氨基酸组成比的确定 36

a．用氨基酸自动分析仪对细胞壁氨基酸的分析 37

b．氨基酸（糖）的鉴定 38

c．氨基酸立体配置的确定 41

d．氨基酸量比的确定 42

a．利用“化学法”确定肽结构 43

3）肽类型的确定方法 43

b．肽类型的命名 45

4）糖部分的N-酰基型的确定方法 46

a．Glycolate test的实施方法 51

b．羟乙酰基的含量及酰型的菌种间分布 53

5．其他细胞壁成分的分析方法 56

1）脂多糖（LPS）的制取与分析 56

a．脂多糖的制取 56

b．脂多糖的分析 57

2）磷壁酸的制取与分析 58

3）多糖的制取与分析 59

6．特殊细菌的细胞壁 60

Ⅱ　放线菌的细胞壁 62

1）培养及分析用菌体的制备方法 65

1．分析用试料的制备 65

2）细胞壁的制备方法 66

2．细胞壁组成成分的分析 67

1）用全菌体进行二氨基庚二酸（A2pm）及糖的分析 67

a．二氨基庚二酸的分析实例 67

b．糖的分析实例 69

2）细胞壁氨基酸及糖 70

a．氨基酸的分析实例 70

b．糖的分析实例 72

3．以细胞壁组成成分作为主要指标的属的检索 72

Ⅲ　酵母的细胞壁 79

1．培养 86

2．多糖类的制取 87

1）甘露聚糖的制取 87

2）可溶性多糖类的制取 89

3．结构糖分析 90

1）水解法 91

2）利用薄层光谱分析法分析结构糖 91

3）利用气相色谱分析结构糖 93

4．1H-NMR光谱的测定 95

文献 101

2．脂类 116

Ⅰ　复合脂 116

1．磷脂 116

1）细菌磷脂的结构与一般性质 116

a．细菌磷脂的结构 117

b．磷脂组成对环境的适应及变化 123

2）细菌磷脂的分析方法 124

a．磷脂的提取方法 124

b．磷脂的分离和鉴定 125

c．细菌磷脂及其组成成分的定量 129

d．利用标记化合物对磷脂进行定性和定量（Kaufer和Kennedy,1963） 131

e．细菌磷脂的仪器分析及结构确定 132

3）细菌磷脂的分布 133

a．Pseudomona dales 133

b．Eubacteriales（真细菌） 142

c．Actinomycetales 143

d．Mycoplasmatales 143

e．Archaebacteria 145

2．糖脂 145

1）甘油糖脂的分离·鉴定方法 146

a．萃取·精制 146

b．糖及脂肪酸的鉴定 146

c．脱酰基化合物的分析 147

d．糖的结合部位的解析 148

e．糖的异头物的配位分析 148

a．甘油糖脂 149

f．其他种类结构的分析方法 149

2）微生物糖脂的种类与分布 149

b．磷糖脂 153

c．糖醛酸含有的糖脂 155

d．硫糖脂 155

e．脂肪酸糖 157

3．脂氨基酸 158

1）鸟氨酸脂的分离与鉴定 158

a．萃取、精制 158

b．红外光谱 159

c．氨基酸的鉴定 160

d．脂肪酸的鉴定 160

e．游离氨基的鉴定 160

a．鸟氨酸脂 161

2）脂氨基酸的种类与分布 161

g．其他分析 161

f．游离羧基的鉴定 161

b．牛磺鸟氨酸脂 163

c．赖氨酸脂 165

d．磷脂酰甘油的O-氨基酸酯 165

4．鞘脂类 166

1）鞘脂的分离 169

Ⅱ　单纯脂 171

1．霉菌酸 171

1）霉菌酸的一般结构 172

2）霉菌酸的结构分析方法 172

3．霉菌酸的薄层色谱法（TLC） 175

b．霉菌酸的气相色谱法（GLC） 177

c．霉菌酸的质谱分析GC/MS 178

d．霉菌酸的高速液体色谱法（HPLC） 181

3）霉菌酸的分布和Actinomycetales的化学分类学 182

2．泛醌和甲萘醌 185

4）霉菌酸分子组成因环境条件而引致的变化 185

1）微生物的培养 188

2）细菌的泛醌和甲萘醌的提取 188

3）酵母及真菌的泛醌提取 189

4）泛醌和甲萘醌的精制 190

5）泛醌和甲萘醌分子种类的鉴定 191

6）有关泛醌系和甲萘醌系的表示方法 198

3．脂肪酸 200

1）脂肪酸组成的确定方法 201

a．培养 202

b．脂肪酸甲基酯的制备 202

c．气相色谱分析 205

d．菌体脂肪酸组成的表示方法 216

2）分类群与菌体脂肪酸 219

3）分析数据的数量处理 220

文献 221

3．蛋白质 247

Ⅰ　电泳类型 248

1．试料的制备方法 249

1）微生物的培养 249

2）菌体的破碎 250

2．电泳法 251

1）电泳装置 252

2）平板凝胶的制作 253

3）电泳 259

4）染色 260

a．蛋白质的染色 260

b．酶的活性染色 261

3．数据处理与电泳类型在分类上的应用实例 266

1）测光密度法 267

2）相对移动度与数值分类 268

4．酶的电泳类型的分类学意义 276

Ⅱ　细胞色素 277

1．细胞色素的种类和微生物的电子传递体系 277

2．细菌的生育条件和细胞色素 280

3．细胞色素的吸光度测定 281

1）Pseudomonas的细胞色素测定 281

2）全细胞色素的（还原型）-（氧化型）的差示光谱 282

3）（还原型＋CO）-（还原型）的差示光谱 287

4）低温光谱 288

5）细胞色素的个别（还原型）-（氧化型）表示光谱 289

4．微生物分类与细胞色素 289

4．核酸 299

1．DNA的分离精制 302

1）概况 302

a．SSC 304

2）使用试剂 304

b．EDTA 305

c．酚 305

d．SDS 305

e．链霉蛋白酶 306

3）培养 306

4）溶菌 307

5）蛋白质的变性 311

6）离心分离 312

7）粗DNA的卷绕 313

8）精制 314

9）后处理与保存 316

10）DNA的测定 317

2．GC含量的测定 318

1）概况 318

2）融解温度的测定 319

1）概况 323

3．DNA-DNA杂交 323

2）方法分类 328

3）利用UV吸收测定反应速度的方法 329

4）使用核酸酶对无标记DNA的双链形成速度进行测定的方法 331

5）有关放射性同位素的利用方法 335

a．概况 335

b．回收标记法 337

c．利用放射性碘进行标记 340

d．切口转移标记法 341

e．放射能的测定 344

6）标记DNA与核酸酶的使用方法 346

7）使用羟磷灰石（HA）的方法 349

8）使用滤膜的方法 354

1）基本情况 359

4．DNA-RNA杂交 359

2）有关RNase的注意事项 362

3）RNA的标记方法 362

4）rRNA的制备 364

5）杂交实验 367

文献 369

5．免疫学的方法 376

1．抗原 377

2．免疫血清的制备 378

3．凝胶内沉降反应 380

4．中和反应 383

5．补体结合反应 385

文献 387

6．热分解法 388

1．使用仪器 389

2．试料的制备 392

1）条件的设立 395

3．热分解 395

2）焦油问题 396

3）操作 397

4．气相色谱分析 398

1）条件的设立 398

2）操作 398

5．数据分析 399

1）视觉鉴定 401

2）峰的测定 402

3）根据少数峰加以判断 404

文献 407

7．数据分析 410

1．数值分类 412

1）代码化 414

a．简易识别和代码化 414

b．RKC代码系统 416

c．数值分类与代码化 417

2）相似度 420

a．O-1型数据 421

b．数值型数据 424

3）树状图（数值分类） 430

2．多元分析 439

1）何谓多元分析 439

a．树状图批判 440

b．推算统计学和多元分析 441

c．维数的减少和存在问题 444

d．有关程序等情况 446

2）应用于分类的多元分析 447

a．主成分分析 448

b．典型相关分析 450

c．多维尺度法 452

d．判别分析 454

文献 458