生物学中的电子显微镜技术PDF电子书下载

第一章 超薄切片技术 1

1.1 概述 1

1.2 取材 3

1. 取材的基本要求 3

2. 取材方法 4

1.3 固定 5

1. 固定的概念 5

2. 常用固定剂的性质 5

3. 常用缓冲液的配制 10

4. 常用固定液的配制 15

5. 固定方法 18

6. 影响固定效果的因素 21

7. 良好固定的标准 23

1.4 清洗与脱水 24

1.5 浸透与包埋 25

1. 目的与要求 25

2. 常用包埋剂的性质与配方 26

3. 浸透与包埋的操作 33

4. 所埋损伤 36

5. 包埋操作中的注意事项 37

1.6 超薄切片 38

1. 支持膜的制备 38

2. 包埋块的修整 45

3. 玻璃刀的制作 46

4. 超薄切片 51

1.7 超薄切片的染色 60

1. 电镜图象反差形成的原理 60

2. 染色的必要性 61

3. 染色方法 62

参考文献 71

第二章 负染色技术 73

2.1 负染色的原理 73

1. 直接取样 74

2. 样品提纯的方法 74

2.2 悬液样品的制备 74

3. 病毒样品的浓缩方法 75

2.3 染色液的配制 76

2.4 染色方法 77

1. 滴染法 77

2. 喷雾法 77

3. 漂浮法 77

2.5 影响染色效果的主要因素 78

1. 样品的纯度 78

2. 样品的浓度 78

3. 样品与染液的均匀分散性 78

参考文献 79

2.6 对照样品的染色 79

4. 悬液与染液的酸碱度 79

5. 染色时机 79

第三章 金属投影与复型技术 81

3.1 金属投影技术 81

1. 真空喷镀仪简介 81

2. 蒸发材料的性质 82

3. 投影方法 84

4. 颗粒大小的测量 87

5. 影响投影效果的因素 88

3.2 复型技术 89

1. 一级复型 89

2. 二级复型 90

参考文献 91

第四章 样品的冷冻(冰冻)制备技术 92

4.1 概述 92

1. 生物样品中水分的存在方式 92

2. 冰晶的形成及其对细胞活性的影响 93

3. 冷冻剂与保护剂 94

4.2 冷冻干燥技术 95

4.3 冷冻取代技术 97

4.4 冷冻切片技术 98

1. 仪器的准备 98

2. 样品的预处理 101

3. 样品的冷冻 102

4. 切片操作 103

5. 切片的收集与染色 103

4.5 冷冻断裂(刻蚀)复型技术 104

1. 冷冻断裂及刻蚀装置 105

2. 冷冻断裂(刻蚀)复型的制作 109

3. 冷冻复型电镜图象的辨认 118

参考文献 121

5.1 蛋白质的细胞化学技术 123

1. 酶的细胞化学技术 123

第五章 电镜细胞化学技术 123

2. 蛋白质的细胞化学技术 136

5.2 核酸的细胞化学技术 138

1. 醋酸铀染色法 138

2. DNA的Feulgen-六亚甲四胺银特异染色法 139

3. RNA的选择性染色 139

5.3 碳水化合物的细胞化学技术 140

1. 过碘酸-六亚甲四胺银法 140

2. 氨基硫脲蛋白银法 141

3. 酸性粘基质的定位 142

2. 用洋地黄皂苷保存胆固醇的方法 143

1. 保存脂肪的脱水方法 143

5.4 脂肪的细胞化学方法 143

3. 磷脂的保存方法 144

5.5 某些无机离子的细胞化学定位 144

1. 钙离子的定位 144

2. 磷酸盐的定位 145

3. 某些重金属离子的定位 145

5.6 提取定位法 147

1. 核酸的提取定位法 147

2. 蛋白水解酶的应用 149

3. 多糖的提取定位法 149

参考文献 150

6.1 抗原的选择 152

第六章 免疫电子显微镜技术 152

6.2 抗体的分离与提纯 153

1. 抗体的一般特性 153

2. 特异性抗体的分离与提纯 155

3. 抗体片段的制备 159

6.3 抗体的标记技术 160

1. 铁蛋白标记技术 160

2. 酶标记技术 168

3. 杂种抗体标记技术 171

4. 免疫酶搭桥法 174

1. 铁蛋白标记抗体(Fer-Ab)的电镜染色 175

6.4 电镜样品的制备 175

2. 酶标记杭体的电镜染色 180

6.5 对照实验 181

1. 特异抗体的封闭对照 182

2. 特异抗原的吸收对照 182

3. 非特异性对照 182

参考文献 182

第七章 电镜放射自显影技术 185

7.1 原理 185

7.2 放射自显影用的同位素 186

1. 能量特征 186

2. 半衰期 187

3. 剂量与毒性 188

7.3 电镜自显影样品的制备 189

1. 标本的标记 189

2. 厚切片及超薄切片的制备 190

3. 乳胶的选择、稀释与敷膜 191

4. 曝光 198

5. 显影与定影 199

6. 样品的后处理 201

7.4 对照观察 202

1. 本底颗粒的测量 202

4. 排除标记产物扩散的可能性 204

2. 排除假阳性的对照实验 204

3. 排除假阴性的对照实验 204

5. 抑制剂的应用 205

7.5 放射自显影照片的分析 205

1. 误差与分辨率 205

2. 定量分析方法 211

参考文献 214

第八章 生物大分子电镜样品的制备技术 216

8.1 概述 216

8.2 蛋白质分子电镜样品的制备技术 218

1. 对蛋白质溶液的要求 218

2. 低噪声支持膜的制备 219

3. 蛋白质大分子的负染色技术 220

4. 电镜观察时应注意的问题 222

5. 蛋白质大分子电镜研究的进展 223

8.3 核酸大分子电镜样品的制备技术 225

1. 电镜观察核酸的基本原理 225

2. 实验方法与步骤 226

3. 电镜观察时应注意的问题 234

参考文献 235

第九章 扫描电子显微镜及生物样品制备技术 236

9.1 扫描电子显微镜的特点 236

1. 结构 237

9.2 扫描电镜的结构及工作原理 237

2. 工作原理 242

9.3 生物样品制备方法 242

1. 新鲜材料直接观察 243

2. 化学的方法 243

3. 物理的方法 243

4. 临界点干燥法 244

5. 特殊的样品制备方法 248

9.4 各类样品制备的一般程序 253

1. 动物的软组织 253

3. 昆虫 254

2. 游离细胞 254

4. 植物 255

参考文献 257

主要参考书 258

第十章 透射电子显微镜的基本原理及其结构 259

10.1 电子光学的基本知识 260

1. 光学显微镜的局限性 260

2. 电子成象的基本原理 264

10.2 透射电镜的结构及工作原理 268

1. 结构概貌 268

2. 主要部件的结构及功能 271

主要参考书 279