图解扫描电子显微镜 生物样品制备PDF电子书下载

1.扫描电子显微镜的基础 永谷隆 1

1.1 概论 1

1.2 各种显微方式的比较 2

1.3 扫描电镜的原理 3

a. 电子束的聚集 4

b. 扫描和扫描电镜的放大倍数 4

1.4 扫描电镜的结构 5

a. 镜体 5

b. 样品室 5

c. 真空系统 6

d. 二次电子检测器 6

1.5 扫描电镜的分辨力 7

e. 显示部分(图像显示和摄影) 7

a. 扫描探针的形成 8

b. 图像的反差和噪音 9

c. 电子束和样品的相互关系 10

d. 在扫描电镜样品上电流的出入关系 12

1.6 扫描电镜图像的形成 13

a. 倾斜角效应和反差 14

b. 边缘效应 15

c. 原子序数效应-组分效应 15

d. 由二次电子形成的组分反差 16

e. 样品的凹凸不平和扫描电镜的反差 16

f. 焦点深度 17

g. 物镜光阑的选择 18

h. 加速电压效应 19

i. 反向电子图像 21

j. 阴极荧光图像 22

参考文献 23

2. 离分辨扫描电子显微镜 永谷隆 26

2.1 场发射型扫描电子显微镜 26

2.2 以二次电子和反向电子之差做为信号的方式 27

2.3 低损失(low-loss)反射电子方式 29

2.4 工作距离WD--D方式 30

2.5 使用强磁物镜的方式(透射/扫描方式等) 32

参考文献 33

3. 扫描电子显微镜的实践 永谷隆 34

3.1 扫描电子显微镜的操作法 34

a. 电镜的启动 34

c. 观察图像的操作方法 35

b. 样品的安装(以及更换) 35

d. 反差和亮度的调整 38

e. 放大倍数和扫描速度 40

f. 摄影 43

g. 小结--怎样摄好扫描电镜图片 45

3.2 扫描电子显微镜图像的毛病 45

a. 扫描电镜图像毛病的原因和内容 46

b. 损伤 48

c. 污染 50

d. 放电 52

3.3 保养时的注意事项 53

a. 镜体的保养 53

c. 显示器部分的保养 54

b. 闪烁体的保养 54

d. 真空系统的保养 55

3.4 扫描电子显微镜的安装条件 55

3.5 小结 56

参考文献 56

4. 生物样品制作法 57

4.1 概论 田中敬一 57

4.2 观察面的剖出法 田中敬一 60

a. 表面观察法 60

b. 割断法 61

(1)树脂割断法 62

(2)有机溶媒割断法 66

(3)水溶性包埋剂割断法 69

(4)其他割断法 70

c. 剥离法 73

(1)Vial的方法 73

(2)Boyde的方法 74

(3)田中等的方法 74

d. 其它方法 75

(1)游离细胞及其割断法 75

(2)和光镜、透射电镜图像的对比 78

(3)使用胶原酶的剖出法 80

参考文献 81

4.3 样品干燥法 田中敬一 82

a. 临界点干燥法 83

(1)临界点干燥法的步骤和方法 83

(2)临界点干燥法的理论 90

(3)临界点干燥法使用的装置 93

(4)临界点干燥时样品的收缩 94

(5)中间液 94

(6)失败的原因 95

b. 冷冻干燥法 97

(1)弗立昂TF冷冻干燥法 97

(2)酒精冷冻干燥法 97

(3)乙腈真空干燥法 99

c. 对位二氯苯(paradichlorbenzene)干燥法 100

参考文献 100

4.4 导电法 100

a. 金属镀膜法 永谷隆 101

(1)真空喷镀法 103

(2)溅射镀膜法 永谷隆、赤堀宏 106

(3)其他金属镀膜法 永谷隆 113

参考文献 114

b. 导电染色法 村上宅郎 114

(1)概论 114

(2)单宁镀酸法 114

(3)镀酸·珠叉二肼法 119

(4)铂·水合肼法以及其他方法 120

(5)用于导电染色的微形样品载物台 120

(6)用玻璃纸或滤纸做的微小样品载物台 122

(7)附记 122

(2)湿性化学法 123

(1)放电防止液 123

(3)电子透过法 123

参考文献 123

c. 其它方法 永谷隆 123

参考文献 124

4.5 离子蚀刻法 永谷隆 124

参考文献 126

5. 铸型观察法 村上宅郎、大谷修 127

(1)概论 127

(2)甲基丙烯酸酯注入剂的配制 127

(3)注入剂的粘度检查 128

(6)注入脏器和灌流 130

(7)树脂的注入和硬化 130

(5)向注入的树脂中添加硬化剂 130

(4)Mercox注入剂 130

(8)腐蚀和清洗 131

(9)铸型的细切和导电处理 131

(10)扫描电镜观察和显微解剖 131

(11)向血管以外的管道中注入树脂 132

(12)印在铸型表面上的结构 132

(13)胶乳注入 133

(14)胶乳法和丙烯酸酯法的比较 133

参考文献 133

6. 免疫扫描电子显微镜法 天见和畅、梅田昭子 134

a. 免疫扫描电镜法 134

b. 免疫扫描电镜法的标记物 134

(1)与透射电镜的区别 134

(2)扫描电镜标记物的条件 134

(3)目前应用的标记物 135

(1)标记物的精制 139

c. 免疫扫描电镜法的实际操作 139

(2)抗体γ-球蛋白的精制 140

(3)抗体和标记物的结合 140

(4)其它抗体与标记物结合法 141

(5)用标记抗体对样品进行处理 143

参考文献 143

7. 冷冻扫描电子显微镜法 德永纯一 144

a. 冷冻扫描电镜法的基本步骤 144

(1)样品冷冻法 144

(2)向扫描电镜镜筒中送入冷冻样品 147

b. 用冷冻扫描电镜对双重割断面的观察法 147

(1)在霉菌类孢子形态学上的应用 148

c. 冷冻扫描电镜在生物学上的应用 148

(2)在动物组织学上的应用 153

d. 冷冻样品表面的金属镀膜 157

e. 冷冻扫描电镜的图像质量及其分辨本领，特别是和过去的扫描电镜比较 161

f. 冷冻扫描电镜法的将来发展 164

参考文献 165

补遗 永谷隆 166

8. 扫描电子显微镜图像的立体观察 藤田恒夫、安逮一男 167

a. 立体观察及其在扫描电镜上的应用价值 167

b. 扫描电镜立体图片的摄制方法 168

c. 立体观察的方法 170

参考文献 171

a. 扫描电镜图像电影化的意义 172

b. 摄制电影的方法 172

9. 扫描电子显微镜图像的电影化 藤田恒夫、安逮一男 172

c. 使图像活动的方法和技术 178

(1)倾斜 178

(2)连续放大和缩小(急速变焦) 178

(3)水平移动 178

(4)其他 178

参考文献 179

10. 微区分析法 永谷隆 180

a. 原子的激发和缓解 180

b. 特征X射线的特性 182

c. 波长散射型X射线微区分析法(WDX) 182

d. 能量散射型X射线微区分析法(EDX) 188

e. EDX和WDX的比较 191

f. 分析电镜法 192

g. 扫描透射电镜(STEM) 193

h. 电子能量损失的分析法(ELS) 194

i. 扫描俄歇电子分光法(SAM) 194

参考文献 196

11. 染色体观察法 饭野晃啓 197

参考文献 200

12. 显微解剖 村上宅郎 201

参考文献 202

13. 彩色扫描电子显微镜法 田中敬一 203

参考文献 205

14. 扫描电子显微镜的应用 206

(1)细胞的割断面I 名黑知德 206

(2)细胞的割断面II 松本行雄 208

(3)核与内质网 田中敬一、饮野晃启、名黑知德 210

(4)人的染色体 饭野晃啓 212

(5)粗面内质网 田中敬一、古沢正治 214

(6)线粒体I 益永恭光、长武均 216

(7)线粒体II 益永恭光、长武均 218

(8)高尔基复合体 本濑照康、鹿岛让 220

(9)分泌颗粒 田中敬一、名黑知德 222

(10)骨骼肌纤维 沢田元 224

(11)枯否氏星形细胞 长武均 226

(12)肥大细胞 福留初子 228

(13)培养细胞 大西礼子、金刚惠 230

(14)单层圆柱状上皮细胞 沢田元 232

(15)喉头粘膜上皮 大山胜 234

(16)周皮细胞 岛田逮生、杉田新 236

(17)肌上皮 村上正浩 238

(18)嗅上皮 大山胜 240

(19)晶状体纤维 田中敬一、福留初子 242

(20)末梢神经 阿藤孝二郎 244

(21)血志中的纤维蛋白网 板仓宰 246

(22)癌性腹膜症患者的肠系膜浆膜细胞 喜安佳人 248

(23)胃癌的腹膜播散性转移病灶 喜安佳人 250

(24)遗传性球状红细胞症的脾脏 有马栄德 252

(25)蛔虫 宇仁茂彦 254

(26)酵母细胞 大隅正子 256

(27)莲丝 大隅正子、山田真子 258

(28)免疫扫描电镜法的应用I 公文裕已 260

(29)免疫扫描电镜法的应用II 公文裕已 262

(30)X射线微区分析法的应用 牧田登之 264

索引 266