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目录 1

概述 1

生物化学实验的特点 1

生物化学实验须知及安全措施 1

生物化学实验报告的书写 2

生物化学实验基础 4

实验一 生物化学实验的基本操作 4

一、基本操作 4

二、721分光光度计的使用 7

三、硫酸铜标准曲线的制作 7

蛋白质化学 9

常用蛋白质实验方法的基本原理 9

一、盐析 9

二、透析 9

三、层析 10

四、电泳 13

实验部分 15

实验二 蛋白质的定性试验——沉淀反应 15

一、盐析法 15

二、乙醇沉淀法 16

三、重金属盐沉淀法 16

四、无机酸和有机酸沉淀法 17

五、蛋白质的两性反应——酪蛋白的等电点测定 17

实验三 蛋白质的定量测定 19

一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法 19

二、双缩脲法 21

三、Folin-酚试剂法 22

四、改良Lowry氏法 24

五、考马斯亮蓝法 26

六、紫外吸收法 28

实验四 血清蛋白质的乙酸纤维素薄膜电泳 30

实验五 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质 31

实验六 血清γ-球蛋白的分离与纯化 35

实验七 分子筛凝胶层析法测定蛋白质分子量 39

实验八 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 41

酶学 44

实验九 酶的特异性和高效性 44

一、酶的特异性 44

二、酶的高效性 45

实验十 影响酶促反应速度的因素 45

一、温度对酶促反应速度的影响 45

二、pH对酶促反应速度的影响 46

三、激动剂和抑制剂对酶促反应速度的影响 47

实验十一 酶的米氏常数（Km）测定 47

一、蔗糖酶的Km测定 48

二、碱性磷酸酶的Km测定 52

三、脲酶的Km测定 54

实验十二 胃蛋白酶原的激活 56

实验十三 乳酸脱氢酶及其辅酶的作用 57

维生素的测定 59

实验十四 食物中胡萝卜素的柱层析分离 59

实验十五 食物中维生素C含量的测定 60

糖代谢 63

实验十六 糖的硅胶G薄层层析分离 63

实验十七 红细胞中的糖酵解作用 65

实验十八 运动对肌肉组织糖酵解的影响 67

实验十九 血糖测定及激素对血糖水平的影响 68

一、肾上腺素和胰岛素对血糖水平的影响 68

二、血糖测定（Folin-吴法） 69

三、血糖测定（邻甲苯胺法） 71

四、血糖测定（葡萄糖氧化酶法） 72

附：尿糖定性试验 75

实验二十 糖原测定——饱食和饥饿对小鼠肝糖原含量的影响 76

一、聚丙烯酰胺凝胶电泳法 78

实验二十一 血清乳酸脱氢酶同工酶的电泳分离 78

二、琼脂糖电泳法 82

脂代谢 84

实验二十二 血清甘油三酯含量的测定（乙酰丙酮法） 84

实验二十三 血清总胆固醇含量的测定 86

一、乙酸酐-硫酸显色法 86

二、邻苯二甲醛直接显色法 87

三、胆固醇氧化酶法 88

实验二十四 血清脂蛋白琼脂糖电泳 90

实验二十五 血清高密度脂蛋白的分离及其胆固醇含量的测定 92

实验二十六 单向免疫扩散法测定人血清中apoAl和apoB的含量 93

实验二十七 酮体的生成和氧化 94

实验二十八 卵黄中脂质的提取及其成分的鉴定 95

实验二十九 去污剂对红细胞膜稳定性的影响 97

实验三十 血清过氧化脂质的测定 98

实验三十一 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用 100

生物氧化 100

实验三十二 细胞色素体系的氧化作用及CN-的抑制作用 101

氨基酸的代谢 103

实验三十三 氨基移换作用 103

实验三十四 精氨酸酶在尿素生成中的作用 104

一、扩散皿法 104

二、纸片法 106

核酸的化学 107

实验三十五 核酸的增色效应 107

实验三十六 肝中核酸的分离与鉴定 107

肝脏生化 113

实验三十七 血清黄疸指数测定 113

实验三十八 血清胆红素定性试验及定量测定 114

一、血清胆红素定性试验（Vandenbergh试验） 114

二、血清总胆红素及一分钟胆红素定量测定 116

实验三十九 血清清蛋白及球蛋白含量的测定 117

实验四十 血清谷丙转氨酶活力测定（改良穆氏法） 119

实验四十一 血清尿素氮测定（二乙酰一肟法） 122

血液生化 122

实验四十二 血清肌酐测定（碱性苦味酸盐法） 123

水盐代谢及酸碱平衡 126

实验四十三 血清钾、钠含量测定 126

一、火焰光度法测定血清钾、钠含量 126

二、四苯硼钠法测定血钾含量 128

实验四十四 血钙含量测定 130

一、EDTA直接滴定法 130

二、核固红比色测定法 131

附：家兔低血钙的观察 132

实验四十五 血浆二氧化碳结合力的测定 133

一、范氏（VanSlyke）气量法 133

二、酸碱滴定法 136

三、安医大式简易气量法 138

附录一 常用生化正常值 140

附录 140

附录二 部分复杂试剂的配制方法 142

附录三 常用缓冲液的配制 146

附录四 常用抗凝剂的配制 155

附录五 常用标本的制备 155

附录六 滤光片的选用 157

附录七 硫酸铵饱和浓度表 157

附录八 常用摩尔溶液的配制 157

附录九 乙醇稀释表 158

附录十 常用蛋白质分子量参考值 159

附录十一 法定计量单位 160

附录十二 离心机转数与相对离心力的换算 161

附录十三 常用生化单位换算表 161

附录十四 化学试剂纯度分级表 165

附录十五 常用元素的原子量表 165