医学生物化学与分子生物学实验技术双语教程PDF电子书下载

第1章 概论 1

第一节 常用生物化学与分子生物学实验方法 1

一、分光光度法 1

二、层析 2

三、电泳 4

四、离心法 7

五、核酸扩增 8

六、分子杂交 10

第二节 常用生物化学与分子生物学仪器设备的基本操作 12

一、分光光度计 12

二、离心机 13

三、仪器的清洗及干燥 14

四、吸量管和微量移液器 15

五、试剂混匀方法 16

六、保温 17

七、过滤 17

八、烘箱和恒温箱 17

第三节 实验样品的制备 17

一、血液样品的制备 17

二、尿液样品的制备 18

三、组织样品的制备 18

附录A 实验室规则 19

附录B 实验记录及实验报告 19

附录C 实验室用水的种类和标准 20

一、实验室用水的种类 20

二、评价实验室用水质量的常用指标 20

第2章 蛋白质的分离、纯化、定量与鉴定 22

总论 22

一、蛋白质分离纯化的原则和策略 22

二、蛋白质分离纯化的方法 22

三、蛋白质的定量和定性分析 24

四、蛋白质的鉴定 25

实验1 蛋白质的分离纯化 26

实验1-1 盐析法分离血浆白蛋白 26

实验1-2 分子筛层析（凝胶过滤） 28

实验1-3 亲和层析纯化胰蛋白酶 31

实验1-4 离子交换层析 36

实验1-5 醋酸纤维薄膜电泳分离血浆蛋白 40

实验1-6 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血浆蛋白 43

实验2 蛋白质定量 47

实验2-1 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量 47

实验2-2 双缩脲法测定蛋白质含量 49

实验2-3 Folin-酚试剂法（Lowry法） 52

实验2-4 紫外分光光度法 55

实验3 蛋白质鉴定——蛋白质印迹法 58

第3章 酶学实验 62

总论 62

一、酶的提取、分离纯化 62

二、酶活力测定 63

实验4 影响酶促反应速度的因素 64

实验4-1 pH对酶活性的影响 64

实验4-2 温度对酶活性的影响 67

实验4-3 激动剂和抑制剂对酶活性的影响 69

实验5 米氏常数的测定 72

实验5-1 酸性磷酸酶的提取及Km测定 72

实验5-2 碱性磷酸酶的提取及Km测定 75

实验6 血清淀粉酶活性的测定 79

第4章 物质代谢 82

总论 82

实验7 血糖浓度的测定 82

实验7-1 邻甲苯胺法测定血糖浓度 82

实验7-2 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度 85

实验8 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 89

实验9 转氨基作用（纸层析法） 92

实验10 血尿素氮测定 96

第5章 核酸的分离、纯化、定量与鉴定 100

总论 100

一、核酸的分离、提取和纯化 100

二、核酸的定量 102

三、核酸的保存 102

实验11 核酸提取 103

实验11-1 血液基因组DNA的提取 103

实验11-2 大鼠肝脏RNA的提取 104

实验12 基因扩增 107

实验12-1 应用PCR技术扩增血红蛋白β基因 107

实验12-2 从总RNA中采用反转录PCR扩增GAPDH 110

实验13 核酸凝胶电泳 113

实验13-1 核酸琼脂糖凝胶电泳 113

实验13-2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 115

实验14 核酸杂交 120

实验14-1 Southern印迹杂交 120

实验14-2 Northern印迹杂交 126

第6章 基因工程 131

总论 131

一、基因工程的概念 131

二、基因工程的基本要素 131

三、基因工程的基本流程 133

四、基因工程的支撑技术 135

实验15 大肠杆菌的培养及感受态细胞的制备 136

实验16 质粒提取 139

实验16-1 碱裂解法小量提取质粒DNA 139

实验16-2 碱裂解法大量提取质粒DNA 143

实验17 聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA 146

实验18 DNA的琼脂糖凝胶电泳回收 149

实验19 目的基因与载体的连接 152

实验20 电转化法制备感受态细胞 154

实验21 转化子的鉴定 156

实验22 质粒DNA的酶切鉴定 158

第7章 特色创新实验 162

实验23 异常血红蛋白的筛查 162

实验24 血红蛋白电泳释放实验 166