医学生物化学与分子生物学实验技术双语教程PDF电子书下载

第1章 概论 1

第一节 常用生物化学与分子生物学实验方法 1

一、分光光度法 1

二、层析 3

三、电泳 6

四、离心技术 9

第二节 常用生物化学与分子生物学仪器设备的基本操作 10

一、实验室基本操作技能 10

二、实验室常用仪器的使用方法 12

第三节 实验样品的制备 18

一、血液样品的制备 18

二、尿液样品的制备 18

三、组织样品的制备 19

四、微生物样品的制备 19

附录A 实验室规则 19

附录B 实验室安全 20

附录C 实验记录及实验报告 20

附录D 实验室用水的种类和标准 21

第2章 蛋白质实验 23

一、蛋白质分离纯化的原则 23

二、蛋白质分离纯化的一般程序 24

三、蛋白质的浓缩、干燥和保存 27

四、蛋白质的定量和定性分析 27

五、蛋白质的鉴定 28

实验1 蛋白质的分离纯化 29

实验1-1 盐析法分离血浆白蛋白 29

实验1-2 分子筛层析（凝胶过滤） 31

实验1-3 亲和层析纯化胰蛋白酶 34

实验1-4 离子交换层析 39

实验1-5 醋酸纤维薄膜电泳分离血浆蛋白 42

实验1-6 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血浆蛋白 45

实验2 蛋白质定量 50

实验2-1 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量 50

实验2-2 双缩脲法测定蛋白质含量 52

实验2-3 Folin-酚试剂法（Lowry法） 56

实验2-4 紫外分光光度法 59

实验2-5 二喹啉甲酸法（BCA法）测定蛋白质含量 62

实验3 蛋白质鉴定——蛋白质印迹法 64

第3章 酶学实验 69

一、酶的分离纯化 69

二、酶活力测定 70

三、同工酶 71

实验4 影响酶促反应速度的因素 71

实验5 血清淀粉酶活性的测定 78

实验6 米氏常数的测定 80

实验6-1 酸性磷酸酶的提取及Km测定 82

实验6-2 碱性磷酸酶的提取及Km测定 84

第4章 物质代谢实验 89

一、物质代谢的研究方法 89

二、物质代谢相关性疾病的常用生物化学与分子生物学诊断方法 91

实验7 邻甲苯胺法测定血糖浓度 92

实验8 葡糖氧化酶法测定血糖浓度 95

实验9 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 98

实验10 转氨基作用（纸层析法） 101

实验11 血尿素氮测定 106

第5章 核酸实验 110

第一节 核酸的提取、鉴定和保存 110

一、核酸的分离、提取和纯化 110

二、核酸的鉴定 113

三、核酸的保存 113

四、常用核酸的提取方法 113

第二节 核酸扩增 115

一、聚合酶链反应的基本原理 115

二、PCR反应体系 116

三、PCR技术的主要类型和应用 117

第三节 分子杂交 117

一、DNA印迹 118

二、RNA印迹 119

三、蛋白质印迹 119

四、原位杂交 120

五、菌落杂交 120

六、斑点杂交 120

第四节 核酸的测序技术 121

一、Sanger双脱氧链终止法 121

二、Maxam-Gibert化学降解法 122

三、全自动的DNA测序法 123

第五节 基因芯片技术 123

第六节 酵母杂交系统 124

一、酵母双杂交系统 124

二、酵母单杂交系统 125

三、酵母三杂交系统 126

第七节 DNA重组技术 126

一、DNA重组技术的基本要素 127

二、DNA重组技术的基本流程 128

三、DNA重组技术的支撑技术 131

实验12 核酸提取 132

实验12-1 血液基因组DNA的提取 132

实验12-2 大鼠肝脏RNA的提取 134

实验13 基因扩增 136

实验13-1 应用PCR技术扩增血红蛋白β基因 136

实验13-2 从总RNA中采用逆转录PCR扩增GAPDH 139

实验14 核酸凝胶电泳 142

实验14-1 核酸琼脂糖凝胶电泳 142

实验14-2 核酸聚丙烯酰胺凝胶电泳 145

实验15 核酸杂交 150

实验15-1 DNA印迹杂交 150

实验15-2 RNA印迹杂交 155

实验16 大肠杆菌的培养及感受态细胞的制备 159

实验17 质粒提取 162

实验17-1 碱裂解法小量提取质粒DNA 162

实验17-2 碱裂解法大量提取质粒DNA 166

实验18 聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA 170

实验19 DNA的琼脂糖凝胶电泳回收 173

实验20 目的基因与载体的连接 176

实验21 电转化法制备感受态细胞 178

实验22 转化子的鉴定 181

实验23 质粒DNA的酶切鉴定 183

第6章 特色创新实验 187

实验24 异常血红蛋白的筛查 187

实验25 血红蛋白电泳释放实验 192

第7章 实验设计 197

一、实验设计的基本要素 197

二、实验设计的基本原则 198

三、实验构思与设计 198

四、实验设计的基本内容 199

五、撰写实验方案 199

六、考核评价 199