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第1章 绪论 1

第一节 分子诊断学的发展简史 1

第二节 分子诊断学的应用 2

第2章 基因组与基因组学 4

第一节 基因组和基因组学的概念 4

一、定义 4

二、基因组大小与C值矛盾 5

三、基因组学的意义 5

第二节 原核生物基因组 6

一、特点 6

二、类核 6

三、质粒 7

四、转座因子 9

第三节 病毒基因组 11

一、核酸的主要类型 11

二、大小和碱基组成 12

三、结构与功能特征 12

第四节 真核生物基因组 13

一、细胞核基因组 14

二、细胞器基因组 16

第五节 人类基因组计划 16

一、人类基因组计划的概况 16

二、人类基因组概貌 17

三、人类基因组多样性 19

第3章 生物大分子的分离与纯化 21

第一节 核酸分离纯化的总原则 21

一、材料与方法的选择 22

二、技术路线的设计 22

三、核酸的鉴定、保存 24

第二节 真核生物DNA的分离纯化 26

一、分离纯化的方法 26

二、DNA片段的回收 27

第三节 原核生物DNA的分离纯化 30

细菌DNA的分离纯化 30

第四节 病毒DNA的分离纯化 31

第五节 质粒DNA的分离纯化 31

一、质粒DNA的提取与纯化方法 31

二、质粒DNA的进一步纯化 32

第六节 RNA的分离纯化 33

一、RNA分离的条件选择 33

二、总RNA的分离纯化 34

三、mRNA的分离纯化 34

第七节 蛋白质的分离纯化 35

一、蛋白质分离纯化的原则和一般程序 36

二、材料选择 36

三、细胞破碎的方法 37

四、分离蛋白质的方法 37

五、蛋白质分离纯化的条件因素 39

六、蛋白质含量和纯度分析 40

七、蛋白质的保存 41

第4章 DNA重组技术 42

第一节 工具酶与基因载体 43

一、工具酶 43

二、载体 49

第二节 目的基因与载体连接 54

一、目的基因的制备 54

二、载体的选择 55

三、目的基因片段与载体的体外连接 55

第三节 重组DNA分子的导入、鉴定与表达 56

一、将外源DNA分子导入宿主细胞 57

二、目的基因的鉴定 58

三、目的基因的表达 59

第5章 DNA测序技术 62

第一节 双脱氧链末端终止法 62

一、测序原理 62

二、测序策略 64

三、测序体系 65

四、Sanger法的衍生方法 67

第二节 化学降解法 67

一、测序原理 67

二、测序体系 69

三、化学降解法与双脱氧链末端终止法的比较 70

第三节 自动化测序 70

一、全自动激光荧光DNA测序原理 70

二、全自动激光荧光DNA测序程序 71

三、全自动激光荧光DNA测序注意事项 72

第四节 DNA测序技术的应用 72

一、对未知DNA序列进行测定 72

二、对已知DNA序列进行测定 73

第6章 聚合酶链反应技术 74

第一节 PCR技术原理 74

一、PCR基本原理 74

二、PCR体系 75

三、PCR基本步骤 78

四、PCR扩增产物的分析 80

五、PCR常见问题 83

六、PCR技术的质量控制 84

第二节 定量PCR 85

一、荧光定量PCR原理 85

二、荧光化学 86

三、定量方法 86

四、荧光定量PCR的应用 87

第三节 反转录PCR法与原位PCR 87

一、反转录PCR法 87

二、原位PCR 88

第四节 PCR技术的应用 89

一、遗传病的诊断与产前诊断 89

二、致病病原体的检测 89

三、癌基因的检测和诊断 90

四、DNA指纹、个体识别、亲子关系鉴定及法医物证 90

五、动、植物检疫 90

六、其他 90

第7章 核酸分子杂交技术 91

第一节 核酸分子杂交基本原理 91

一、基本原理 91

二、影响因素 93

第二节 核酸探针的制备 94

一、核酸探针的类型 94

二、核酸探针的标记 94

三、核酸分子杂交结果的检测 96

第三节 核酸分子杂交常用方法 96

一、Southern印迹杂交 96

二、Northern印迹杂交 99

三、斑点及狭缝印迹杂交 100

四、菌落杂交 100

五、原位杂交 100

六、液相杂交 101

第四节 核酸分子杂交技术的应用 102

第8章 生物芯片技术 104

第一节 DNA芯片 104

一、DNA芯片的分类与原理 104

二、DNA芯片的制备 105

三、样品的制备 107

四、分子杂交反应 107

五、信号检测与结果分析 107

六、DNA芯片技术在医学领域的应用 107

第二节 蛋白质芯片 109

一、蛋白质芯片原理和分类 109

二、蛋白质芯片制备 111

三、蛋白质芯片技术在医学领域的应用 111

第9章 蛋白质分析技术 113

第一节 概述 113

第二节 双向凝胶电泳及图像分析技术 114

一、2-DE的概念 114

二、样品制备 115

三、第一向电泳——IEF 116

四、第二向电泳——SDS-PAGE 117

五、染色及显影方法 117

六、2-DE图谱的图像分析 118

七、2-DE的特点 119

第三节 生物质谱 119

一、质谱分析的基本原理 120

二、生物质谱技术 121

三、生物质谱仪 122

第四节 其他蛋白质组分析技术 123

一、蛋白质鉴定技术 123

二、蛋白质相互作用分析技术 123

三、生物信息学技术 125

第五节 Western印迹法 127

第10章 感染性疾病的分子诊断 129

第一节 病毒的基因检测 130

一、乙型肝炎病毒 131

二、丙型肝炎病毒 133

三、单纯疱疹病毒 134

四、巨细胞病毒 135

五、风疹病毒 135

六、人乳头瘤病毒 136

七、人类免疫缺陷病毒 139

第二节 病原菌的基因检测 140

一、结核分枝杆菌 141

二、淋病奈瑟菌 142

三、幽门螺杆菌 142

四、细菌耐药基因检测 143

第三节 衣原体的基因检测 145

一、沙眼衣原体 145

二、肺炎衣原体 146

第四节 支原体的基因检测 146

一、肺炎支原体 147

二、解脲脲原体 147

第五节 梅毒螺旋体的基因检测 147

第六节 原虫的基因检测 148

一、弓形虫 148

二、利什曼原虫 149

三、溶组织内阿米巴 149

四、疟原虫 150

第七节 真菌的基因检测 151

一、念珠菌 151

二、新型隐球菌 152

三、烟曲霉 153

第11章 遗传性疾病的分子诊断 154

第一节 遗传性疾病的分类 154

一、单基因遗传病 155

二、多基因遗传病 155

三、染色体畸变遗传病 156

第二节 遗传性疾病的分子诊断策略 157

一、遗传性疾病分子诊断策略的基础 157

二、直接诊断策略 158

三、间接诊断策略 160

第三节 遗传性疾病的分子诊断 161

一、单基因病的基因诊断 161

二、多基因病的基因诊断 164

三、遗传性疾病基因诊断的意义 165

第12章 肿瘤的分子诊断 167

第一节 肿瘤相关基因 167

一、癌基因 167

二、抑癌基因 171

三、其他肿瘤相关基因 173

四、癌基因、抑癌基因与肿瘤的发生 174

第二节 肿瘤基因诊断 174

一、肿瘤基因诊断的策略 174

二、肿瘤基因诊断的原理和方法 175

三、常见肿瘤相关基因的检测 176

参考文献 178