糖复合物生化研究技术PDF电子书下载

第一章 绪论 1

总 论 7

第二章 糖的分离和分析 7

2.1糖的定量测定 7

2.1.1中性糖的测定 9

1.还原糖的次亚碘酸盐定量法 9

2.3，5－二硝基水杨酸（DNS）比色法 10

3.Somogyi-Nelson法 11

4.苯酚－硫酸法 11

5.蒽酮－硫酸法 12

6.地衣酚－硫酸法 13

8.己糖和6－脱氧己糖的比色测定 14

7.戊糖的测定（地衣酚法） 14

9.葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖 15

2.1.2氨基己糖的测定 16

1.氨基己糖的比色测定 16

2.N－乙酰氨基己糖的比色测定 18

3.用Ehrlich试剂测定氨基糖 18

2.1.3己糖醛酸的测定 20

2.2糖的色谱法 21

2.2.1糖的纸色谱 21

1.单糖和双糖的纸色谱 21

3.多羟基醇的纸色谱 28

2.寡糖和多糖的纸色谱 28

4.糖酸的纸色谱 29

5.氨基糖的纸色谱 29

2.2.2糖的柱色谱 30

1.糖的活性炭柱分离 30

2.蜂蜜中寡糖的炭柱分级法 31

3.糖的离子色谱法分析 32

2.2.3糖的气相色谱 36

1.糖的三甲基硅醚衍生物 37

2.糖腈乙酸酯衍生物 38

3.糖醇乙酸酯衍生物 40

4.糖的三氟乙酸酯衍生物 41

5.果糖和葡萄糖或甘露糖共存时的气相色谱定量法 42

6.气相色谱同时测定醛糖和糖醛酸 44

7.气相色谱用于微量多糖与寡糖的单糖组成分析 45

2.2.4糖的高效液相色谱 47

1.单糖和双糖的分析 48

2.寡糖的分离和测定 54

3.糖肟全苯甲酸酯紫外标记法分离和测定微量单糖和双糖 57

4.脉冲安培检测法（HPAEC-PAD）用于单糖和寡糖的分析 59

5.芴甲氧羧基肼衍生法 65

6.神经节苷脂的高效液相色谱分析（HPLC） 72

2.2.5糖的薄层色谱 73

2.3糖的电泳法 75

1.红细胞膜上唾液酸的等速电泳 76

2.多糖的滤纸电泳 78

3.多糖的玻璃纤维纸电泳 79

4.多糖的醋酸纤维薄膜电泳 79

5.多糖的凝胶电脉 80

6.单糖的高效毛细管电泳 81

7.寡糖的毛细管电泳 82

8.糖蛋白的高效毛细管电泳 87

9.酸性多糖与寡糖的等电聚焦和聚丙烯酰胺凝胶电泳 89

1.糖复合物中乙酰基的测定 90

2.4糖复合物中其他成分的测定 90

2.糖复合物中硫酸基的测定 91

第三章 复合糖化物的物化性质 93

3.1多糖的纯度鉴定 94

1.比旋度法 94

2.超离心法 95

3.高压电泳法 95

4.凝胶过滤法 96

3.2复合糖化物分子量的测定 97

1.测定多糖分子量的方法和原则 97

2.渗透压法测定多糖分子量 100

3.蒸气压法测定多糖分子量 102

4.端基法测定多糖分子量 103

5.光散射法测定多糖分子量 106

6.粘度法测定多糖分子量 110

7.高效液相色谱法测定多糖分子量（1） 112

8.高效液相色谱法测定多糖分子量（2） 117

9.超过滤法及其在多糖化学研究中的应用 120

10.凝胶过滤法测定糖蛋白和糖肽的分子量 126

第四章 糖链结构分析方法 128

4.1从糖蛋白分离糖链或糖肽 129

1.O－糖苷键的稀碱水解（β－消除反应） 129

2.N－糖苷键的肼解法 130

3.N－糖苷键的三氟乙酸水解法 132

4.多糖的部分酸水解 133

5.糖蛋白和糖肽的部分酸水解 134

6.从卵清蛋白制备糖肽 136

7.酶解法从糖蛋白释放糖肽 138

4.2用于结构研究的化学方法 140

1.高碘酸氧化 140

2.Smith降解 141

3.甲基化反应（改良Hakomori法） 142

4.甲基化反应（硫酸二甲酯法） 144

5.微量寡糖的甲基化分析方法 145

6.多糖中乙酰基的定位 148

4.3糖苷酶及其在结构分析中的应用 149

1.肼解法释放牛凝血酶原寡糖的顺序测定 156

2.β-N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶－H（Endo-H）的分离纯化 156

3.β－甘露糖苷酶的分离纯化 159

4.一种能分解琥珀酸型聚糖的内切酶的分离纯化 160

5.从土壤细菌中初步分离α－甘露糖苷酶和α（1→6）甘露聚糖内切酶 161

6.枯草杆菌α－淀粉酶的分离纯化 163

7.红色红曲霉α－葡萄糖苷酶的分离纯化 165

8.茁霉多糖酶的分离纯化 168

9.多聚半乳糖醛酸内切酶的分离纯化 170

10.从分枝犁头霉制剂分离纯化α－半乳糖苷酶 171

11.从产碱菌中分离纯化麦芽四糖淀粉酶 173

12.从黑曲霉突变株制剂分离纯化分解生淀粉的葡萄糖淀粉酶 174

13.从溜曲霉分离纯化β-N-乙酰氨基己糖苷酶 177

14.几丁质酶的分离纯化 179

15.菊糖酶的分离纯化 181

16.真菌纤维素酶系的分离纯化 183

17.木聚糖酶系的分离纯化 185

18.糖苷酶的固定化 186

19.硝基苯酚糖苷化合物的有机合成 187

4.4用于糖链结构分析的光谱法 193

1.糖的红外光谱法 193

2.糖的拉曼光谱法 198

4.5质谱在糖类分析中的应用 201

1.过碘酸盐氧化-FAB-MB法 209

2.乙基标记法 214

3.直接FAB-MS法测定糖基的顺序 214

4.全乙酰化低聚木糖的质谱研究 217

5.全苄基化缩水内醚糖的质谱研究 222

6.色质联用进行低聚糖的结构序列分析 230

7.质谱法测定痕量的完整寡糖 232

8.神经节苷脂的快原子质谱结构分析 239

4.6核磁共振法在多糖上的应用 242

4.7糖链结构研究中的免疫学方法 253

1.抗原的制备 254

2.抗血清的制备 257

3.抗血清的处理和纯化 258

4.效价的测定和糖结构分析 259

第五章 糖复合物的其他研究方法 263

5.1同位素标记在糖复合物微量分析中的应用 263

5.2拟糖蛋白的合成和应用 265

5.2.1糖与蛋白质形成共价联接的方法 267

1.重氮盐偶合法 267

2.重氮偶联法 268

3.异硫腈酸酯法 269

4.异硫氰酸苯基-α-L-岩藻糖苷和BSA的偶联 270

5.还原胺化法合成拟糖蛋白 271

6.寡糖天冬酰胺经茚三酮激活后用还原胺化法和蛋白质偶联 273

7.还原胺化法偶联糖蛋白和蛋白质 274

8.还原氨基化方法 275

9.活化酰基化方法 276

10.糖肽与蛋白质的偶联 277

11.双功能试剂交联法合成拟糖蛋白（1） 279

12.双功能试剂交联法合成拟糖蛋白（2） 279

13.双功能试剂交联法合成拟糖蛋白（3） 281

14.脒化法合成拟糖蛋白 282

5.2.2水不溶性糖类载体和蛋白质的偶联 284

1.溴化氰活化法 284

2.重氮法 285

3.用双环氧试剂的交联法 286

5.2.3拟糖蛋白的应用 287

1.用于糖结合蛋白的分离和鉴定 287

2.作为组织化学的标记物 288

5.3多糖的化学修饰 289

5.3.1非选择性化学修饰 290

1.酯化 290

2.甲基化 293

3.O－羧甲基化，O－羧甲基纤维素钠的制备 294

4.高取代度多糖磷酸单酯的制备 295

6.多糖硬酯酸酯的制备 296

5.多糖硫酸酯的制备 296

7.羟乙基化多糖的制备 297

5.3.2选择性化学修饰 298

1.伯羟基的酯化 298

2.伯羟基的醚化 299

3.伯羟基的氧化 300

4.仲羟基的氧化 301

5.羧基的还原 302

6.羧基的酰化 303

7.N－酰化 304

5.3.3末端基团的修饰 305

6.1植物多糖 309

各 论 309

第六章 多糖 309

6.1.1细胞内贮存多糖的提取和分离 310

1.当归水溶性多糖的提取和分离 310

2.亲和层析法分离直链淀粉和支链淀粉 311

6.1.2果胶类物质的提取和分离 312

1.单子叶植物细胞壁中鼠李－半乳糖醛酸聚糖的分离 312

2.双子叶植物细胞壁中鼠李－半乳糖醛酸聚糖的分离 313

6.1.3半纤维素的提取和分离 314

1.悬浮培养细胞半纤维素的分离 314

2.新鲜植物组织半纤维素的分离 317

1.根部多糖的分离 321

6.1.4树胶和粘胶多糖 321

2.茎部多糖的分离 322

3.叶中多糖的分离 322

4.皮部多糖的分离 323

5.花中多糖的分离 324

6.种荚多糖的分离 325

7.培养组织材料中多糖的分离 325

8.大蒜球根部多糖的提取 326

6.1.5寡糖素 327

寡糖素（寡聚半乳糖醛酸）的酶法制备、纯化和活性测定 327

1.粪产碱杆菌产粘变株胞外酸性多糖的纯化 328

6.2微生物多糖 328

2.斜顶菌（Clicoplus caespitosus PK）水溶性多糖的分离提纯 329

3.香菇（Lentinus edodes）碱溶性多糖的分离提纯 330

4.酵母甘露聚糖的分离提取 331

5.酵母甘露聚糖的选择性乙酰解反应 333

6.免疫学方法在酵母甘露聚糖结构研究中的应用 334

7.树舌（Ganoderma applanatum）中色素多糖的分离制备 336

6.3海藻多糖 337

6.3.1褐藻多糖 338

1.褐藻多糖的分析法 338

2.褐藻多糖物理性质的测定 345

3.褐藻胶的分离和提纯 346

4.褐藻糖胶的分离和提纯 347

5.褐藻淀粉（海带淀粉）的分离和提纯 348

6.3.2红藻多糖 348

1.红藻多糖的分析方法 350

2.红藻多糖物理性质的测定 355

3.琼胶的分离和提纯 357

4.琼脂糖的分离和制备 358

5.珠状琼脂糖的制备和提纯 360

6.卡拉胶的分离和提纯 360

7.1动物来源糖蛋白 362

1.粘液糖蛋白的分离 362

第七章 糖蛋白 362

2.膜糖蛋白的分离 364

3.纤维粘连蛋白的测定方法 366

7.2植物来源糖蛋白 368

1.中药知母（Anemarrhena asphodeloides）糖蛋白的提取和分离 369

2.胡萝卜（Daucus carota L.）根细胞壁伸展蛋白的提取和分离 369

3.萝卜（Raphanus sativus L.Var.hortensis backer）叶糖蛋白的提取和分离 370

4.葡萄（Carignan noir CV）渣中糖蛋白的提取和分离 370

第八章 蛋白聚糖 372

8.1糖胺聚糖（GAG）的分离提取 382

1.糖胺聚糖的一般提取方法 382

2.组织中糖胺聚糖的提取 383

3.透明质酸的分离提取 384

4.4－硫酸软骨素的分离提取 385

5.6－硫酸软骨素的分离提取 386

6.软骨素的制备 387

7.硫酸皮肤素的分离提取 388

8.肝素的分离提取 389

9.低分子肝素的制备 390

10.硫酸乙酰肝素（硫酸类肝类）的分离提纯 391

11.硫酸角质素的分离提取 393

12.海参糖胺聚糖的分离提取 394

8.2糖胺聚糖（GAG）的分析和测定 396

1.糖胺聚糖乙酸纤维素膜双向电泳 397

8.2.1糖胺聚糖的电泳法鉴定 397

2.糖胺聚糖乙酸纤维素膜单向电泳（1） 398

3.糖胺聚糖乙酸纤维素膜单向电泳（2） 399

4.糖胺聚糖的琼脂糖凝胶电泳 401

5.糖胺聚糖不连续琼脂糖凝胶电泳 402

6.糖胺聚糖聚丙烯酰胺凝胶电泳 403

8.2.2糖胺聚糖的酶学和化学法组成鉴定 404

1.糖胺聚糖的酶降解 404

2.糖胺聚糖中氨基己糖的鉴别测定 406

3.糖胺聚糖中己糖醛酸的鉴别测定 407

4.糖胺聚糖中硫酸基／羧酸基比值测定 409

5.糖胺聚糖中N－乙酰氨基己糖／己糖醛酸的比值测定 410

6.糖胺聚糖中N－硫酸基／总硫酸基的比值测定 411

8.2.3糖胺聚糖的定量分析 413

1.凝胶过滤法测定糖胺聚糖的分子量 413

2.总糖胺聚糖的含量测定 413

3.混合糖胺聚糖中各聚糖相对含量测定 414

4.糖胺聚糖的比色定量法 414

8.2.4尿中糖胺聚糖的测定方法 415

1.原子吸收法 416

2.单向电泳法 417

8.2.5糖胺聚糖的酶解 418

1.蛋白聚糖的解聚提取 419

8.3.1蛋白聚糖的提取、分离和鉴定 419

8.3人主动脉蛋白聚糖（PG）的研究方法 419

2.蛋白聚糖的分离 420

3.蛋白聚糖（或糖胺聚糖）的鉴定 423

4.蛋白聚糖中硫酸根位置的分析 425

8.3.2蛋白聚糖的生物学性质的研究 426

1.蛋白聚糖与外源性透明质酸（HA）的再聚集作用 426

2.蛋白聚糖与脂蛋白（LP）的相互作用 427

8.4培养的动物细胞中蛋白聚糖（PG）的研究方法 429

1.细胞培养和标记蛋白聚糖的提取 430

2.离子交换柱层析分离蛋白聚糖 432

3.凝胶过滤柱层析分离蛋白聚糖 432

4.氯化铯等密度超速离心法分离蛋白聚糖 433

5.糖胺聚糖和寡糖的分离鉴定及蛋白聚糖的结构分析 434

8.5各种来源蛋白聚糖的提取和分离 437

1.软骨蛋白聚糖的提取和分离 437

2.脑组织硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的提取和分离 438

3.角膜硫酸角质素蛋白聚糖的提取和分离 441

4.蛋白聚糖的部分酸水解 442

5.蛋白聚糖的非特异性蛋白酶消化 443

6.蛋白聚糖的特异性蛋白酶消化 443

第九章 神经鞘糖脂 445

9.1.1分配分离法 450

1.Suzuki改良Folch分配法 450

9.1神经节苷脂的的分离和纯化 450

2.Ladisch分配法 451

9.1.2离子交换法 453

9.2神经节苷脂的鉴定 455

9.2.1神经节苷脂的定量——唾液酸含量的测定 455

1.间苯二酚－盐酸法 455

2.过碘酸间苯二酚法 456

3.硫代巴比妥酸法 456

9.2.2薄板层析（TLC）法 457

9.2.3高效薄板层析（HPTLC）板放射免疫分析法 458

9.2.4毛细管气相色谱法 459

1.未衍生神经节苷脂的高压液相色谱 461

9.2.5神经节苷脂的高压液相色谱（HPLC）分析 461

2.神经节苷脂衍生物的高压液相色谱 462

9.2.6神经节苷脂的高效毛细管电泳分析 464

9.3中性糖脂的分离和纯化 466

9.4鞘糖脂抗体的制备和鉴定 467

第十章 凝集素 470

10.1凝集素的分离、纯化和鉴定 474

10.1.1天然的或修饰的聚糖作亲和吸附剂 475

1.伴刀豆凝集素（ConA）的纯化 477

2.蓖麻凝集（RCA1）的纯化 478

3.麦胚凝集素（WGA）的纯化 479

4.花生凝集素（PNA）的纯化 480

10.1.2结合载体的糖蛋白或糖肽作亲和吸附剂 481

1.植物血凝素（PHA）的纯化 483

2.麦胚凝集素（WGA）的纯化 484

10.1.3结合载体的单糖或双糖作亲和吸附剂 484

1.大豆凝集素（SBA）的纯化 488

2.蓖麻蚕血淋巴凝集素（PLL1）的纯化 489

3.花生凝集素（PNA）的纯化 490

10.1.4细胞膜凝集素的纯化 490

10.1.5凝集素的疏水层析 492

10.1.6鉴定凝集素的一般方法 493

1.血凝活力的鉴定 493

2.凝集素糖结合活性的定量测定方法 494

4.糖蛋白鉴定 495

3.纯度鉴定 495

10.1.7凝集素分离鉴定的技术准备 497

1.Sepharose的酸处理 497

2.甲状腺球蛋白－Sepharose的制备 497

3.卵粘蛋白－Sephsrose的制备 498

4.半乳糖胺-CH-Sepharose的制备 498

5.GalNAc-Epoxy-Sepharose的制备 499

6.Rha-Sepharose4B的制备 499

7.乳糖－淀粉凝胶亲和吸附剂的制备 499

10.2凝集素衍生物的制备 500

10.2.1标记凝集素的制备 500

9.麦芽糖－淀粉凝胶的制备 500

8.固定化红血球 500

1.放射性标记凝集素 501

2.酶标记凝集素 504

3.荧光标记凝集素 506

4.生物素（biotin）标记凝集素 508

5.铁蛋白标记凝集素 509

6.胶体金－凝集素复合物的制备 510

10.2.2固定化凝集素的制备 510

1.Con A-Sepharose4B的制备 510

3.Con A-Sepharose 6B的制备（氰基硼氢化钠法） 511

2.RCA-Sepharose 4B的制备（带己二胺“臂”） 511

4.溴化氰活化法制备固相化凝集素 512

10.3凝集素在生物科学和医学研究中的应用 513

10.3.1用固定化凝集素分离纯化糖蛋白 514

1.白扁豆β－N-乙酰氨基己糖苷酶的分离纯化 514

2.猪大网膜脂肪细胞膜糖蛋白的分离纯化 515

3.血型物质MN抗原的纯化 517

4.用Con A-Sepharose 4B分离ConA亲和蛋白 517

5.固相化凝集素的强化 518

10.3.2用凝集素检测糖复合物并推测其寡糖结构 520

1.测定溶液中的糖复合物 520

2.测定细胞膜和亚细胞结构上的糖复合物 526

10.3.3固定化凝集素亲和层析分离分析寡糖和糖肽 530

1.序列凝集素柱结合糖苷水解酶分析N－糖肽 531

2.GS-I-Con A-Sepharose柱分离带aGal－末端的寡糖 535

10.4内源凝集素 537

10.4.1内源凝集素的检测 537

1.蛋白质制造技术测定水溶性内源凝集素 537

2.免疫组织化学方法测定细胞中的内源凝集素 538

10.4.2内源凝集素的与分离纯化 539

1.水溶性内源凝集素的分离纯化 539

2.细胞膜内源凝集素的分离纯化 540

后记 541