分子医学技能PDF电子书下载

分子医学概论 2

1　疾病的分子机制 2

2　疾病的基因诊断 3

3　疾病的基因治疗 4

5　分子医学技术 5

4　疾病的基因预防 5

6　分子医学的社会、伦理问题 7

7.2　分子医学促进实验医学和经验医学的融合 8

7.1　分子医学使临床思维方式不断更新 8

7　分子医学在现代医学发展中的意义 8

主要参考文献 9

7.3　分子医学加快了医学教育的改革 9

1.1.2　材料 12

1.1.1　原理 12

第一篇　核酸技术 12

第1章　核酸制备与扩增 12

1.1　基因组DNA的提取与纯化 12

1.1.3　实验方案 13

1.2.1　原理 14

1.2　RNA的提取和cDNA合成 14

1.1.4　常见问题及可能原因 14

1.2.2　实验方案 16

1.3.1　PCR技术原理 21

1.3 聚合酶链反应（PCR） 21

1.2.3　注意事项 21

1.3.3　方案 25

1.3.2　材料 25

1.3.4　注意事项 26

2.1.1　原理 29

2.1　电泳分析法 29

第2章　核酸的检测 29

2.1.2　材料 33

2.1.4　注意事项 34

2.1.3　DNA的琼脂糖凝胶电泳的实验方案 34

2.1.5　结果讨论 35

2.2　分光光度分析法 36

2.2.1　原理 37

2.2.2　紫外光谱分析法检测DNA含量 39

2.2.3　分光光度法检测RNA浓度 40

3.1.1　探针的种类 41

3.1　概论 41

第3章　核酸杂交与核酸探针 41

3.1.3　核酸探针标记的方法 42

3.1.2　标记物的选择 42

3.2.1　核酸探针的制备和标记 50

3.2　核酸探针与杂交常规实验 50

3.1.4　几种常见的杂交方法 50

3.2.2　原位杂交法进行重组质粒的筛选 52

3.2.3　Southern杂交 53

3.2.4　Northern杂交 57

4.1.1　概论 60

4.1　分离目的基因和基因载体 60

第4章　基因克隆 60

4.1.2　目的基因的获取 66

4.1.3　质粒制备的常规方案 67

4.2.1　概论 77

4.2　限制性内切核酸酶切割目的基因和基因载体 77

4.2.2　限制性内切核酸酶的酶切与鉴定 81

4.3.1　概论 85

4.3 目的基因和基因载体的体外连接 85

4.3.2　载体与目的基因的连接 89

4.4.1　概论 93

4.4　重组DNA转化宿主细胞 93

4.4.2　重组DNA转化大肠杆菌 96

4.5.1　概论 99

4.5　重组体阳性克隆的筛选 99

4.5.2　实验方案 103

4.6.1　概论 107

4.6　外源基因在宿主细胞中的表达 107

4.6.2　在大肠杆菌中表达蛋白产物 112

主要参考文献 115

5.2　细胞的破碎 118

5.1　蛋白质样品的预处理 118

第二篇　蛋白质技术 118

第5章　蛋白质样品的制备技术 118

5.2.3　化学及生物化学方法 119

5.2.2　物理方法 119

5.2.1　机械方法 119

5.3.1　水溶液提取法 120

5.3　蛋白质的提取 120

5.3.4　提取过程中的蛋白质保护 121

5.3.3　表面活性剂的利用 121

5.3.2　有机溶剂提取法 121

5.4.1　根据蛋白质溶解度不同的分离方法 122

5.4　蛋白质的分离纯化 122

5.4.2　根据蛋白质分子质量大小不同的分离方法 123

5.4.4　根据配体特异性的分离方法——亲和层析法 125

5.4.3　根据蛋白质带电性质进行分离 125

5.5.1　蛋白质的浓缩 126

5.5　蛋白质浓缩、干燥和保存 126

5.5.2　蛋白质的干燥 127

5.5.3　蛋白质的储存 128

6.1.2　试剂和设备 129

6.1.1　实验原理 129

第6章　蛋白质定量检测技术 129

6.1　紫外（UV）吸收测定法 129

6.1.4　注意事项 130

6.1.3　操作方法 130

6.2.1　基本原理 131

6.2　Folin-酚试剂法（Lowry法） 131

6.2.3　操作步骤 132

6.2.2　试剂和设备 132

6.3.1　基本原理 133

6.3　考马斯亮蓝法（Bradford检测法） 133

6.2.4　注意事项 133

6.3.4　注意事项 134

6.3.3　操作步骤 134

6.3.2　试剂与设备 134

6.4.3　操作步骤 135

6.4.2　试剂与设备 135

6.4　二喹啉甲酸（BCA）检测法 135

6.4.1　基本原理 135

6.4.4　注意事项 136

第7章　蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 137

7.1　聚丙烯酰胺凝胶的合成和结构 138

7.2　聚丙烯酰胺凝胶浓度和孔径的选择 139

7.3　不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理 140

7.4　实验材料和试剂 141

7.5.1　SDS-聚丙烯酰胺凝胶的灌制 142

7.5　实验步骤 142

7.6.1　用考马斯亮蓝对SDS-聚丙烯酰胺凝胶进行染色 144

7.6　胶的染色及处理 144

7.6.2　用银盐对SDS-聚丙烯酰胺凝胶进行染色 145

7.7　注意事项 146

7.6.3　SDS-聚丙烯酰胺凝胶的干燥 146

操作 147

材料 147

附：圆盘电泳 147

第8章　蛋白质的免疫印迹技术 152

8.2.1　基本原理 153

8.2　蛋白质从凝胶转移至膜上 153

8.1　蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺电泳 153

8.2.3　操作步骤 154

8.2.2　试剂与器材 154

8.2.4　注意事项 156

8.3.1　基本原理 157

8.3　蛋白质转移膜的免疫检测 157

8.3.2　试剂 158

8.3.3　操作步骤 159

8.5.1　抗体的性质与使用 161

8.5　免疫印迹中需要注意的问题 161

8.4　免疫印迹后膜的重复使用 161

8.4.1　消除缓冲液（100ml） 161

8.4.2　操作步骤 161

8.5.3　背景问题 162

8.5.2　样品中待检测蛋白质的含量 162

8.5.6　免疫印迹技术的灵敏度 163

8.5.5　设置对照与解释结果 163

8.5.4　转印效率低 163

9.1　层析的基本概念 164

第9章　蛋白质层析技术 164

9.2　层析的基本理论 165

9.3　层析法的分类 166

9.4.2　柱层析的基本操作 167

9.4.1　柱层析的基本装置 167

9.4　柱层析的基本装置及基本操作 167

9.5.1　凝胶层析 169

9.5　几种常见的蛋白质层析技术 169

9.5.2　离子交换层析 176

9.5.3　亲和层析 181

9.5.4　高效液相色谱法 186

实验一　血清γ-球蛋白的分离纯化（分子筛层析法） 190

附：实验 190

实验二　血清蛋白质的分离（离子交换层析法） 192

实验三　凝胶层析法分离蛋白质 193

主要参考文献 195

10.3.2　方法 198

10.3.1　材料 198

第三篇　免疫分析技术 198

第10章　单向琼脂扩散实验 198

10.1　实验目的和要求 198

10.2　实验原理 198

10.3　实验方法 198

10.4　实验结果分析 199

11.3.2　方法 200

11.3.1　材料 200

第11章　双向琼脂扩散实验 200

11.1　实验目的和要求 200

11.2　实验原理 200

11.3　实验方法 200

11.4.2　结果分析 201

11.4.1　结果观察 201

11.4　实验结果观察分析 201

12.3.2　方法 203

12.3.1　材料 203

第12章　火箭免疫电泳 203

12.1　实验目的和要求 203

12.2　实验原理 203

12.3　实验方法 203

12.5　注意事项 204

12.4　结果判定 204

13.3.1　玻片凝集反应 205

13.3　实验方法 205

第13章　凝集反应 205

13.1　实验目的和要求 205

13.2　实验原理 205

13.3.2　试管凝集反应 206

14.3.1　材料 208

14.3　实验方法 208

第14章　E玫瑰花环形成实验 208

14.1　实验目的和要求 208

14.2　实验原理 208

14.3.2　方法 209

14.5　注意事项 210

14.4　实验结果判断 210

14.3.3　操作程序 210

15.2　实验原理 212

15.1　实验目的和要求 212

第15章　T淋巴细胞转化实验 212

15.4　实验结果观察及分析 213

15.3.2　操作 213

15.3　实验方法 213

15.3.1　试剂 213

16.3.1　材料 216

16.3　实验方法 216

第16章　免疫荧光技术 216

16.1　实验目的和要求 216

16.2　实验原理 216

16.4　实验结果观察 217

16.3.2　方法 217

17.3.2　试剂的配制 218

17.3.1　材料 218

第17章　酶联免疫吸附实验 218

17.1　实验目的和要求 218

17.2　实验原理 218

17.3　实验方法 218

17.3.3　方法与步骤 219

17.4　结果观察及分析 220

18.5　实验过程 221

18.4　实验材料 221

第18章 酶联免疫斑点实验 221

18.1　实验目的和要求 221

18.2　实验原理 221

18.3　方法特点 221

18.8　实验结果示范 222

18.7　实验用途 222

18.6　实验注意事项 222

19.3　实验方法 224

19.2　实验原理 224

第19章　酶标抗体法检查EB病毒IgA抗体（玻片法） 224

19.1　实验目的和要求 224

19.4.1　对照的设立 225

19.4　实验结果的观察分析 225

19.4.2　阳性细胞的染色特征 226

20.3.1　材料 227

20.3　实验方法 227

第20章　对流免疫电泳 227

20.1　实验目的和要求 227

20.2　实验原理 227

原理 228

附：甲胎蛋白酶标对流电泳测定法 228

20.3.2　方法 228

注意事项 229

材料 229

21.5　实验过程 230

21.4　实验材料 230

第21章　细胞内细胞因子染色法 230

21.1　实验目的和要求 230

21.2　实验原理 230

21.3　方法特点 230

21.6　实验结果示范 231

22.3.2　方法与步骤 232

22.3.1　材料和试剂 232

第22章　小鼠体液免疫应答的观测 232

22.1　实验目的和要求 232

22.2　实验原理 232

22.3　实验方法 232

附一　福氏佐剂制备方法 233

22.4　实验结果分析 233

附三　抗原的处理 234

附二　动物的选择 234

附五　多克隆抗体制备的具体方法 235

附四　动物的免疫 235

主要参考文献 236

23.2.2　恒定的温度 238

23.2.1　无污染环境 238

第四篇　细胞培养技术 238

第23章　细胞培养概述 238

23.1　细胞培养的基本概念 238

23.2　细胞培养的环境 238

23.2.4　细胞培养基 239

23.2.3　气体环境 239

23.3.2　常用设施及设备 241

23.3.1　实验室设计 241

23.3　细胞培养设施和基本条件 241

23.3.3　培养器皿 242

24.2.1　清洗和浸泡 243

24.2　培养实验用品的前期处理 243

第24章　细胞培养的准备工作 243

24.1　培养环境的准备 243

24.1.1　培养室和超净台的消毒 243

24.1.2　培养前准备 243

24.2.3　消毒 245

24.2.2　包装 245

24.3.1　培养基（液） 246

24.3　细胞培养用液及培养基（液）的准备 246

24.3.2　水 247

24.3.6　细胞冻存液 248

24.3.5　抗生素 248

24.3.3 平衡盐溶液（PBS） 248

24.3.4　消化液 248

附二　细胞冻存程序 249

附一　细胞培养的实验程序 249

25.1.2　基本要求 251

25.1.1　基本器材和用品 251

第25章　培养细胞的取材 251

25.1　取材的基本器材和要求 251

25.2.2　内脏和实体瘤的取材 252

25.2.1　皮肤和黏膜的取材 252

25.2　各种组织的取材方法 252

25.2.6　骨髓、羊水、胸水、腹水内细胞的取材 253

25.2.5　鸡胚组织的取材 253

25.2.3　血细胞的取材 253

25.2.4　鼠胚组织的取材 253

26.1.2　组织块的分离方法 254

26.1.1　细胞悬液的分离方法 254

第26章　培养细胞的分离方法 254

26.1　组织材料的分离 254

27.1.1　原理 259

27.1.2　用品与试剂 259

第27章　细胞的原代培养 259

27.1　组织块培养法 259

27.1.3　操作步骤 260

27.2.3　操作步骤（胎鼠或新生鼠） 261

27.2.2　用品与试剂 261

27.1.4　注意事项 261

27.2　消化培养法 261

27.2.1　原理 261

27.2.4　注意事项 262

28.1.3　操作步骤 263

28.1.2　用品与试剂 263

第28章　细胞的传代培养 263

28.1　贴壁细胞的传代培养 263

28.1.1　原理 263

28.1.4　注意事项 264

28.2.4　注意事项 265

28.2.3　操作步骤 265

28.2　悬浮细胞的传代培养 265

28.2.1　原理 265

28.2.2　用品与试剂 265

28.3.3　操作步骤 266

28.3.2　用品与试剂 266

28.3　细胞计数法 266

28.3.1　原理 266

28.3.4　细胞计数要点 267

28.4.1　细胞的复苏 268

28.4　细胞的复苏与冻存 268

28.3.5　初学者易犯的错误 268

28.4.2　细胞的冻存 269

29.2.1　贴附型 272

29.2　体外培养细胞的分型 272

第29章　培养细胞的细胞生物学 272

29.1　体内、外细胞的差异和分化 272

29.1.1　差异 272

29.1.2　分化 272

29.3.1　培养细胞生命期 273

29.3　培养细胞的生长和增殖过程 273

29.2.2　悬浮型 273

29.3.2　组织培养细胞一代生存期 274

30.1.2　细胞系 277

30.1.1　初代培养 277

第30章　建立细胞系或细胞株 277

30.1　体外培养细胞的种类和命名 277

30.1.6　肿瘤细胞系或细胞株 278

30.1.5　遗传缺陷细胞 278

30.1.3　克隆细胞株 278

30.1.4　二倍体细胞 278

30.3　已建立细胞系或细胞株的鉴定、管理和使用 279

30.2.3　培养条件和方法 279

30.2　建立细胞系（或细胞株）的要求 279

30.2.1　组织来源 279

30.2.2　细胞生物学检测 279

附一　细胞培养常见问题及解决方法 280

附二　细胞培养常识问答 282

主要参考文献 286

31.1　蛋白质组学的产生背景 288

第31章　蛋白质组学 288

第五篇　分子医学前沿技术 288

31.2.2　蛋白质组学研究技术路线 289

31.2.1　蛋白质组学的研究内容 289

31.2　蛋白质组学及研究技术路线 289

31.3.1　LCM-双向电泳-后续分析 291

31.3　蛋白质组学常用技术 291

31.3.2　蛋白质芯片技术 299

31.3.4　酵母双杂交系统 301

31.3.3　双色荧光检测技术 301

31.3.5　噬菌体表面展示技术 302

31.4　蛋白质组学面临的问题及发展前景 303

主要参考文献 305

32.1.2　基因芯片 306

32.1.1　生物芯片 306

第32章　生物芯片技术 306

32.1　概念 306

32.1.3　蛋白质芯片 307

32.2.1　芯片制备 308

32.2　工作原理 308

32.1.4　芯片实验室 308

32.2.2　探针的准备 311

32.2.3　杂交 312

32.2.4　信号检测 313

32.2.5　结果分析 314

32.2.6　生物信息学分析 315

32.3　新一代蛋白质研究工具——抗体芯片 316

32.4.1　基因表达水平的检测 318

32.4　生物芯片的应用 318

32.4.2　基因诊断 319

32.4.3　药物筛选 320

32.4.4　个体化医疗 322

32.4.6　生物信息学研究 323

32.4.5　测序 323

主要参考文献 325

33.1.1　干细胞研究的起源与进展 327

33.1　干细胞概述 327

第33章　干细胞技术 327

33.1.2　干细胞的定义与分类 328

33.1.3　干细胞的应用前景 329

33.2.2　胚胎干细胞的鉴定 332

33.2.1　小鼠胚胎干细胞的分离、扩增 332

33.2　胚胎干细胞的分离、扩增及鉴定 332

33.3.2　人骨髓间充质干细胞的鉴定 334

33.3.1　人骨髓间充质干细胞的分离、扩增 334

33.3　人骨髓间充质干细胞的分离、扩增及鉴定 334

主要参考文献 335

34.1　概述 336

第34章　RNA干扰技术 336

34.2　RNA干扰的机制 337

34.4.1　siRNA序列的设计 340

34.4　RNAi技术应用的方法 340

34.3　脊髓动物细胞中特殊的RNAi现象 340

34.4.2　获得高纯度的siRNA 341

34.4.3　转染细胞 344

34.4.5　RNA干扰技术的应用 345

34.4.4　分析RNAi的效果 345

主要参考文献 348

35.1.1　生物信息学的内容 349

35.1　概述 349

第35章　生物信息学 349

35.1.2　生物信息学的生物医学内涵 350

35.1.3　生物信息学的应用与发展研究 356

35.2.1　分子生物信息数据库概述 357

35.2　分子生物信息数据库 357

35.2.2　基因和基因组数据库 358

35.2.3　蛋白质数据库 360

35.2.4　结构数据库 361

35.2.5　功能数据库 363

35.3　数据库查询和数据库搜索 365

35.2.6　其他数据库资源 365

35.3.1　数据库查询 366

35.3.2　数据库搜索与序列比对 367

35.4.1　核酸序列预测的原理与方法 378

35.4　核酸与蛋白质结构及功能预测的原理 378

35.4.2　蛋白质结构预测的原理与方法 380

35.5.1　建立与疾病有关的生物信息学数据库 383

35.5　生物信息学在医学中的应用 383

35.5.3　有助于疾病的诊断和治疗 384

35.5.2　分离和鉴定人类基因以及与疾病相关的基因 384

主要参考文献 385

35.5.4　加快药物开发 385

36.1　概述 388

第36章　基因工程产品 388

第六篇　分子医学技术在医学中的应用 388

36.2　基因工程药物表达体系 389

36.3　基因工程产品的研究开发及产业化特点 390

37.1　基因诊断的对象 392

第37章　基因诊断 392

37.2.1　核酸杂交 393

37.2　基因诊断的方法 393

37.2.3　实验举例 394

37.2.2　聚合酶链反应 394

38.1　进行基因治疗必须具备的条件 402

第38章　基因治疗 402

38.2.2　从受体细胞的角度 403

38.2.1　从治疗基因的角度 403

38.2　基因治疗的基本策略 403

38.3.1　体外疗法 404

38.3　基因治疗的基本方法 404

38.4.1 目的基因的选择与克隆 405

38.4　基因治疗的程序 405

38.3.2　体内疗法 405

38.3.3　原位疗法 405

38.4.2　外源基因的转移 406

38.4.3　靶细胞的选择 408

38.5　基因治疗的现状与前景 409

38.4.5 目的基因的表达及检测 409

38.4.4　细胞转染与筛选 409

38.5.3　药物靶向治疗 410

38.5.2　反义技术 410

38.5.1　对某些疾病基因治疗的探索 410

38.6.3　基因治疗与社会伦理道德 411

38.6.2　导入基因的安全性 411

38.6　基因治疗存在问题与伦理学 411

38.6.1　导入基因的稳定高效表达 411

39.1　基因免疫技术 413

第39章　基因疫苗 413

39.2　基因疫苗的作用特点 414

39.3　基因疫苗的优越性及所存在的问题 415

主要参考文献 416

39.4　基因疫苗的应用 416

40.1.1　温度控制系统 418

40.1　实验室的常规仪器及设施 418

第七篇　分子医学技术数据库 418

第40章　分子生物学实验室的基本要求 418

40.1.5　其他设备 419

40.1.4　计量系统 419

40.1.2　水的净化装置 419

40.1.3　消毒设备 419

40.4　核素实验室 420

40.3　分析仪器室的设置 420

40.2　离心机室的装备 420

40.7　冷室 421

40.6　暗室 421

40.5　细胞培养室 421

41.1.2　离心方法与离心机的使用 422

41.1.1　离心机的基本原理和结构 422

第41章　分子生物学常用仪器 422

41.1　离心机 422

41.1.3　离心机的发展与新功能的应用 429

41.2.1　分光光度计的基本原理和组成 430

41.2　分光光度计 430

41.2.2　分光光度法的应用及引起误差的因素 433

41.3　高效液相色谱仪 435

41.2.3　分光光度计的发展和应用展望 435

41.3.1　高效液相色谱仪的基本结构和原理 436

41.3.2　高效液相色谱仪的操作方法与应用 441

41.4　自动化电泳仪器 442

41.3.3　高效液相色谱的发展和应用展望 442

41.4.1　电泳仪器的基本结构和工作原理 443

41.4.2　常用的电泳方法与操作 445

41.4.3　电泳仪器的发展和应用展望 447

41.5.1　PCR基因扩增仪的基本结构及性能特点 448

41.5　PCR基因扩增仪 448

41.5.2　PCR基因扩增仪的发展和应用展望 450

41.6　全自动DNA序列测定仪 451

41.6.2　DNA序列测定仪器的发展和应用展望 452

41.6.1　DNA序列测定仪器的基本结构和原理 452

41.7　生物分子图像分析系统 453

41.7.1　生物分子图像分析系统基本结构和原理 454

41.7.2　生物分子图像分析系统的发展和应用展望 455

41.8.1　生物芯片相关仪器介绍 456

41.8　生物芯片相关仪器 456

41.8.2　生物芯片的发展和应用展望 458

41.9.1　生物质谱仪的基本结构和原理 460

41.9　生物质谱仪 460

41.9.2　生物质谱仪的发展和应用展望 461

41.10　总结 462

主要参考文献 463

第42章　分子医学技术常用数据表 464