汉英医学分子生物学实验方法PDF电子书下载

1．质粒 1

1.1 用碱裂解并SDS法制备小量质粒DNA 1

1.2 聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA 7

1.3 用QIAGEN质粒大提试剂盒制备大量质粒DNA 11

1.4 用氯化钙制备和转化大肠杆菌感受态细胞 17

1.5 定向克隆到质粒载体 23

1.6 PCR产物克隆至T载体 31

2．聚合酶链式反应 37

2.1 聚合酶链式反应体外扩增DNA 37

2.2 反转录聚合酶链式反应 49

2.3 实时定量PCR 55

3．常用的凝胶电泳 67

3.1 核酸凝胶电泳 67

3.1.1 琼脂糖凝胶电泳 67

3.1.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 73

3.2 蛋白质凝胶电泳 83

3.2.1 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 83

3.2.2 双相电泳 93

4．放射性探针的制备 109

4.1 均一标记DNA探针的合成 109

4.2 RNA探针的合成 115

4.3 cDNA探针的合成 121

4.4 合成寡核苷酸的标记 125

5．DNA 131

5.1 用QIAquick凝胶提取试剂盒从琼脂糖凝胶中回收和纯化DNA片段 131

5.2 哺乳动物细胞DNA的分离 135

5.2.1 应用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子量的DNA 135

5.2.2 鼠尾和其他小样本基因组DNA的制备 141

5.3 Southern杂交分析基因组DNA 145

5.4 DNA的斑点与狭缝杂交 161

5.5 微点阵技术 167

5.6 DNA测序 191

5.7 单链构象多态性分析（SSCP） 201

5.8 变性的高效液相色谱 207

5.9 DNA基因分型 215

5.9.1 微卫星基因分型 215

5.9.2 PCR-RFLP SNP基因分型 223

5.9.3 焦磷酸测序SNP基因分型 229

6．RNA 245

6.1 用TRIzol？试剂分离总RNA 245

6.2 用Oligotex mRNA小提试剂盒从总RNA纯化poly A+mRNA 251

6.3 Northern杂交 255

6.4 cDNA末端快速扩增（RACE） 263

7.1 TNT快速转录翻译系统 275

7．克隆基因在体外及原核细胞中的表达 275

7.2 GST融合蛋白的纯化 281

7.3 GST吸附实验 289

8．克隆基因在哺乳动物细胞中的表达 295

8.1 哺乳动物细胞的体外培养 295

8.2 细胞周期分析 307

8.3 DNA转染 311

8.3.1 磷酸钙和DNA共沉淀的转染 311

8.3.2 阳离子脂质体转染DNA 317

8.3.3 DNA的电穿孔转染 321

8.4 应用GeneEditorTM的DNA体外定点诱变系统 327

9．病毒 341

9.1 快速产生重组腺病毒的简便系统 341

9.2 反转录病毒的产生 351

10．蛋白质检测与分析 367

10.1 免疫沉淀法 367

10.2 Western杂交 373

10.3 酶联免疫吸附实验（ELISA） 381

11．真核基因表达调控 389

11.1 凝胶改变法 389

11.2 荧光素酶法 397

11.3 DNA甲基化分析 405

11.4 核组蛋白免疫沉淀法（ChIP） 411

11.5 RNA干扰（RNAi） 421

12．组织学 429

12.1 组织切片的制备和H E染色 429

12.2 免疫组织化学 435

13．蛋白质组学技术 447

13.1 二维蛋白凝胶电泳——真核细胞样品的制备 447

13.1.1 从酵母制备2D蛋白提取物 447

13.1.2 从哺乳动物细胞制备分部去垢剂提取物 453

13.2 色谱（层析法） 465

13.3 为质谱蛋白鉴定作凝胶内酶切 479

13.4 质谱 487

14.1.1 检测DNA断裂——凋亡DNA阶梯 495

14．细胞凋亡的检测方法 495

14.1 细胞群体凋亡的研究方法 495

14.1.2 凋亡诱导的蛋白酶－Caspase3活性检测 503

14.2 单个细胞凋亡的研究方法 507

14.2.1 APO-BRDUTM试剂盒 507

14.2.2 检测细胞膜变化 513

15．转基因和基因敲除小鼠的构建 517

15.1 应用显微注射法制备转基因小鼠 517

15.2 基因打靶小鼠的制备 553

附录1．常用的试剂和溶液 589

附录2．常用的生物学网站 601