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目录 1

第1章 临床免疫测定技术发展的历史、现状和展望 1

第一节 临床免疫测定技术的发展历史 1

第二节 临床免疫测定技术的现状及展望 3

一、临床实验室对免疫测定技术的要求 3

二、临床免疫测定技术的发展现状及展望 4

三、酶免疫试验的优点及局限性 8

第2章 临床酶免疫测定技术的基本原理和方法 11

第一节 ELISA的基本原理和测定模式 11

一、ELISA的基本原理 11

二、固相上抗原抗体相互作用的免疫化学 11

三、临床ELISA测定的常用模式 13

一、显色测定类 20

第二节 全自动酶免疫分析仪的基本原理和测定模式 20

二、荧光测定类 21

三、发光测定类 21

第三节 均相酶免疫试验 22

一、酶放大免疫测定技术（EMIT） 22

二、使用羧化酶的均相酶免疫试验 22

三、CEDIA均相酶免疫试验 23

四、均相脂质体酶免疫试验 24

第3章 免疫测定中的抗原和抗体 27

第一节 抗原 27

一、抗原的特性 27

二、抗原的分类 29

第二节 抗体 29

二、动物对抗原物质的免疫应答 30

一、怎样制备用于免疫测定的抗体 30

三、多克隆抗体的制备 31

四、单克隆抗体的制备 36

五、抗体的鉴定 41

第4章 临床酶免疫测定中的标记物及指示系统 47

第一节 用于酶免疫测定的常用标记用酶 47

一、辣根过氧化物酶 47

二、碱性磷酸酶 48

三、β-半乳糖苷酶 49

第二节 酶的色原底物 49

一、辣根过氧化物酶的色原底物 49

二、碱性磷酸酶（AP）的色原底物 52

二、碱性磷酸酶和β-半乳糖苷酶的发光底物 53

一、辣根过氧化物酶的发光底物 53

第三节 酶的发光底物 53

第5章 免疫测定中的固相支持物及抗原抗体的固相化 55

第一节 免疫测定的固相支持物 55

第二节 抗原抗体固相化 55

一、被动吸附 55

二、间接非共价吸附方法 57

三、共价吸附方法 57

第6章 酶免疫测定的酶结合物的制备 62

第一节 酶-大分子蛋白结合物的制备 62

一、酶-大分子蛋白结合物制备的影响因素 62

二、过碘酸钠方法 64

三、使用化学交联试剂耦联酶与抗体或其他蛋白 66

四、酶结合物的纯化、质量评价和贮存 74

一、小分子的特性及蛋白载体的选择 76

二、用于小分子与蛋白交联试剂的选择 76

第二节 蛋白（及酶）-小分子半抗原结合物的制备 76

三、小分子与蛋白的交联 77

四、小分子-蛋白结合物的鉴定及纯化 80

第7章 酶免疫测定的放大系统 82

第一节 建立EIA测定放大系统的一般原则 82

一、增加标记酶的量 82

二、非显色底物的应用 82

三、附加一个受标记酶催化的反应系统 82

第二节 以生物素-亲合素反应为基础的放大系统 83

二、双酶级联（dual-enzyme cascade）放大系统 84

三、酶激活级联放大系统（enzyme activation cascade） 84

一、AP底物放大系统（substrate amplification system） 84

第三节 多酶级联系统 84

四、凝固因子酶级联放大系统 85

五、免疫复合物转移两位点酶免疫试验 85

第8章 临床ELISA测定操作中的注意事项 87

第一节 临床标本的收集和保存 87

一、患者准备及标本采集 87

二、可能影响测定结果的标本因素 87

第二节 试剂准备 90

第三节 加血清样本及反应试剂 90

第四节 温育 90

第五节 洗板 91

第七节 比色 92

第六节 显色 92

第八节 结果判定 93

第九节 结果报告及解释 94

第9章 免疫测定的数据处理及结果报告 96

第一节 与数据处理和结果报告有关的定义 96

第二节 测定结果的报告和数据处理 99

一、定性测定 100

二、定量测定 105

第10章 临床免疫检验中存在的问题及对策 115

第一节 临床免疫检验的标准化问题 115

一、临床免疫测定标准化的一般原则 115

二、临床免疫测定标准化中存在的问题 119

三、几种具体标志物免疫测定的标准化 121

第三节 从全国室间质量评价看临床免疫检验中存在的问题 125

第二节 临床免疫检验的室内质控问题 125

第四节 临床免疫检验项目的滥用问题 135

第11章 微量加样器的使用和校准 138

第一节 微量加样器的一般原理及分类 138

一、空气垫加样器 138

二、活塞正移动加样器 138

三、多通道加样器、电子加样器和分配器 139

第二节 加样器的使用 139

一、加样器使用的一般原则 139

二、主要加样器的介绍 140

三、加样器的具体操作 141

第三节 加样器的校准 145

二、酶标仪的发展 148

一、国内医院和血站实验室酶标仪的应用情况 148

第12章 酶标仪及洗板机的选择、使用及校准 148

第一节 酶标仪的应用及发展 148

第二节 正确地认识和使用酶标仪 155

一、测定波长 155

二、测定的吸光度范围 156

三、光学系统 156

四、检测速度 156

五、震板功能 156

六、温育功能 157

七、软件功能 157

八、语言界面 157

一、酶标仪的选择 158

二、酶标仪的自检和校准 158

第三节 酶标仪的选择、自检和校准 158

第四节 洗板机 159

一、洗板机洗涤板孔的一般机制 160

二、洗板机的发展 160

三、国内常见洗板机简介 161

四、洗板机的选用 161

五、洗板机使用中的注意事项 162

第13章 临床免疫测定的质量保证 163

第一节 定义 163

第二节 质量保证、室内质控和室间质评之间的关系 165

第三节 室内质量控制（IQC） 166

一、测定前的质量控制 166

二、统计学质量控制 167

第四节 室间质量评价（EQA） 178

三、室内质控数据的评价 178

四、室内质控的局限性 178

一、EQA的程序设计 179

二、EQA的局限性 182

第五节 实验室信息系统在免疫质控管理中的应用 183

第14章 乙型肝炎病毒感染的免疫应答及常用血清标志物的临床意义 185

第一节 机体对HBV感染的免疫应答 185

一、细胞免疫应答 185

二、体液免疫应答 186

第二节 乙型肝炎病毒感染血清标志物的临床意义 187

一、乙型肝炎表面抗原（HBsAg） 187

五、总抗HBc和抗HBcIgM 188

四、抗HBe 188

三、HBeAg 188

二、抗HBs 188

六、乙肝”两对半”应用检测的误区 189

七、HBsAg检测阴性HBV感染在输血安全中的意义 189

八、HBV DNA 193

第15章 丙型肝炎病毒感染的抗体应答及其免疫测定 197

第一节 丙型肝炎病毒的分子生物学 197

第二节 机体对HCV感染的抗体应答 199

一、对非结构蛋白的抗体应答 199

二、对HCV衣壳蛋白的抗体应答 199

三、对HCV包膜蛋白的抗体应答-免疫保护与免疫逃避 199

第三节 HCV感染的免疫测定 200

一、第一代抗HCV检测试剂 200

三、第三代抗HCV检测试剂 201

二、第二代抗HCV检测试剂 201

第四节 目前抗HCV ELISA检测所存在的问题及其对策 202

一、抗HCV ELISA 检测所存在的问题 203

二、如何减少抗HCV ELISA检测的漏检 204

三、血站在抗HCV ELISA检测中管理方面的问题与对策 205

第五节 抗HCV检测结果的报告及解释 206

第16章 人免疫缺陷病毒（HIV）感染的免疫应答和免疫学检测 210

第一节 机体对HIV感染的免疫应答 210

一、机体对HIV的体液免疫应答 210

二、机体对HIV的细胞免疫应答 212

三、儿童对HIV的免疫应答 213

四、致病性和保护性免疫应答 213

五、总结 214

一、HIV感染的酶免疫测定 215

第二节 HIV感染的免疫测定 215

二、HIV感染的蛋白免疫印迹试验（Western b1ot，WB） 216

第17章 梅毒螺旋体感染的抗体应答及其免疫测定 219

第一节 梅毒螺旋体的抗原结构特性 219

一、外膜脂蛋白抗原 219

二、轴丝抗原 219

三、4D抗原 219

第二节 机体对梅毒螺旋体感染的抗体应答 220

第三节 梅毒螺旋体感染的免疫测定 220

一、使用类脂质抗原的血清学试验 220

二、使用密螺旋体抗原的血清学试验 221

第18章 人绒毛膜促性腺激素（hCG）及其免疫测定 225

第一节 命名、结构和缩写 225

一、抗体的制备 226

第二节 生成和代谢 226

第三节 hCG及其业单位和相关物质的抗体制备及特性 226

二、hCG及其亚单位和片段的免疫化学 227

三、hCG样分子改变形式的识别 228

四、抗体的特异性及其评价 229

第四节 用于hCG免疫测定的临床标本的收集、处理和保存 229

一、血清 229

二、尿 229

三、脑脊液（CSF） 229

一、活体方法 230

二、体外方法 230

三、结合方法 230

第五节 hCG的生物学测定方法 230

五、标本储存 230

四、腹水 230

第六节 hCG的免疫测定 231

一、hCG免疫测定中可能存在的交叉反应 231

二、免疫测定方法设计对测定特异性的影响 232

三、hCG免疫测定中的非特异性干扰 232

四、hCG的免疫测定方法 233

五、hCG免疫测定方法的有效性评价 235

六、hCG的免疫测定的参考品及单位 236

第七节 hCG测定的临床应用 237

一、血清（浆）hCG测定对妊娠及相关疾病的诊断 237

二、尿hCG测定诊断妊娠 238

三、滋养层肿瘤患者的跟踪监测 238

四、睾丸癌患者的跟踪 238

五、非滋养层肿瘤患者的诊断和跟踪 239