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第一篇　生物化学实验基础 3

第1章 生物化学实验的基本知识 3

1.1　实验室规范 3

1.2　玻璃仪器 6

1.3　生物化学实验常用仪器 11

第2章 生物化学实验的基本要求 19

2.1　实验样品的制备 19

2.2　实验的准确性与误差 24

2.3　实验记录和实验报告 26

第3章 生物化学基本实验技术 28

3.1　层析技术 28

3.2　电泳技术 36

3.3　离心技术 42

3.4　膜分离技术 49

3.5　光谱学技术 53

3.6　其他生化实验技术 63

第二篇　生物化学实验 73

第4章　蛋白质 73

实验1　氨基酸和蛋白质的呈色反应 73

实验2　蛋白质等电点的测定和沉淀反应 77

实验3　血清蛋白盐析及分子筛层析脱盐 79

实验4　蛋白质含量的测定 81

Ⅰ 双缩脲法测定蛋白质含量 81

Ⅱ 考马斯亮蓝结合法测定蛋白质含量（Bradford法） 83

Ⅲ　紫外光吸收法测定蛋白质含量 85

Ⅳ　微量凯氏定氮法测定总蛋白含量 86

实验5　氨基酸的分离鉴定 88

Ⅰ 纸层析分离鉴定氨基酸 88

Ⅱ 离子交换层析分离混合氨基酸 89

实验6　血清蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳 91

实验7 DNS-氨基酸的制备和鉴定 93

实验8 DNP-氨基酸的制备和鉴定 96

实验9　用DNS法鉴定蛋白质或多肽的N-端氨基酸 98

实验10 SDS-聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离细菌总蛋白质 100

实验11 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量 102

实验12　牛乳中蛋白质的提取与鉴定 106

实验13　大豆蛋白的提取与含量测定 107

第5章　核酸 110

实验14　核酸含量的测定 110

Ⅰ 定磷法定量测定核酸 110

Ⅱ 地衣酚法定量测定RNA 112

Ⅲ 二苯胺法测定DNA含量 113

实验15　过碘酸氧化法定量测定核苷酸 114

实验16　酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 117

实验17　菜花（花椰菜）中核酸的分离和鉴定 119

实验18　动物肝脏中DNA的提取 121

实验19　碱裂解法小量提取质粒DNA 123

实验20 DNA琼脂糖凝胶电泳 124

实验21 AMP、ADP和ATP的分离 126

Ⅰ 薄层层析分离AMP、ADP和ATP 126

Ⅱ 醋酸纤维素薄膜电泳鉴定AMP、ADP、ATP 128

第6章　酶学 130

实验22　酶的特性实验 130

实验23　米氏常数测定 131

Ⅰ 脲酶米氏常数的简易测定 131

Ⅱ 过氧化氢酶米氏常数的测定 133

Ⅲ 胰蛋白酶米氏常数的测定 135

实验24　酶活力的测定 136

Ⅰ 液化型淀粉酶活力的测定 136

Ⅱ 薄层层析法鉴定转氨酶活性 138

Ⅲ 分光光度法测定血液中转氨酶的活力 139

实验25　酶的制备 142

Ⅰ 乳酸脱氢酶粗提液的制备及活力测定 142

Ⅱ 枯草杆菌碱性磷酸酶的制备及酶活力的测定 143

Ⅲ 马铃薯多酚氧化酶的制备及性质实验 146

实验26　酶的固定化及对酶活性的影响 148

实验27　琥珀酸脱氢酶竞争性抑制 150

实验28　蔗糖酶纯度和相对分子质量测定（SDS-PAGE电泳法） 152

第7章　维生素和辅酶 155

实验29　紫外分光光度法测定鱼肝油中维生素A的含量 155

实验30　食物中脂溶性维生素含量分析（高效液相色谱） 156

实验31　维生素B1的定性测定 159

实验32　维生素B1的含量测定 160

实验33　荧光光度法测定维生素B2的含量 162

实验34　测定维生素C的含量 163

Ⅰ 2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的含量 163

Ⅱ 铜离子氧化法测定维生素C的含量 165

Ⅲ 磷钼酸法测定维生素C的含量 166

实验35　辅酶Q10的制备和检测 168

实验36　分离层析仪分离核黄素和血红蛋白 170

第8章　生物能学和物质代谢 173

实验37　丙酮酸含量的测定（分光光度法） 173

实验38　发酵过程中无机磷的利用 174

实验39　肌糖原酵解作用 175

实验40　糖酵解中间产物的鉴定 177

实验41　脂肪酸的β-氧化 178

实验42 2,6-二氯酚靛酚显色反应测定电子传递 180

实验43　乳酸脱氢酶的递氢作用 181

第9章　综合性实验 184

实验44　糖的颜色反应 184

Ⅰ Molisch反应鉴定醛糖 184

Ⅱ　Seliwanoff反应鉴定酮糖 185

Ⅲ Tollen反应鉴定戊糖 186

实验45　血糖含量的测定 187

Ⅰ Fo1in-Wu法测定血糖含量 187

Ⅱ Folin-Malmors法测定血糖含量 188

Ⅲ　邻甲苯胺法测定血糖含量 190

Ⅳ　GOD-PAP法测定血糖含量 192

实验46　总糖和还原糖含量的测定 193

Ⅰ 蒽酮比色法测定糖的含量 193

Ⅱ 斐林试剂比色法测定糖的含量 195

实验47　脂类的测定 197

Ⅰ 索氏抽提法测定粗脂肪含量 197

Ⅱ　脂肪酸的测定 199

Ⅲ 血清甘油三酯简易测定法 200

Ⅳ 醋酸酐法测定血清中胆固醇含量 201

实验48　天然产物中多糖的分离、纯化与鉴定 203

Ⅰ 多糖的提取、纯化 203

Ⅱ 多糖的鉴定 204

实验49　血清蛋白的分离、纯化与鉴定 205

实验50　凝胶层析法分离纯化脲酶 209

实验51　小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 212

实验52　质粒DNA的分离、纯化及鉴定 214

实验53 多聚酶链式反应（PCR）技术扩增目的基因片段 217

实验54　重组质粒DNA的转化 219

实验55　感受态细胞的制备及转化 221

实验56 DNA的酶切分析 223

实验57　植物总黄酮的提取与测定 225

第10章　设计性实验 227

实验58　半定量RT-PCR检测基因的表达差异 227

实验59　卵磷脂的提取和鉴定 229

实验60　强酸性阳离子交换树脂在废水处理中的应用 231

实验61　转基因植物的PCR鉴定 233

实验62　三聚氰胺含量的测定 234

附录 235

附录A　缓冲液的配制 235

附录B　常用实验数据表 240

附录C　硫酸铵饱和度常用表 245

附录D　层析技术实验数据 246

参考文献 249