分子生物技术 重组DNA的原理与应用 第3版PDF电子书下载

目录 3

第一部分　分子生物技术基础 3

第一章　分子生物技术的革命 3

重组DNA技术 3

分子生物技术的出现 5

分子生物技术的商业化 8

关注和影响 9

总结 11

参考文献 11

复习题 11

第二章　分子生物技术中的生物系统 13

原核生物和真核生物 13

大肠杆菌 14

酿酒酵母 15

原核生物和真核生物的分泌途径 16

真核生物细胞的培养 18

总结 18

参考文献 19

复习题 19

第三章　DNA、RNA及蛋白质的合成 20

DNA的结构 20

DNA的复制 23

解码遗传信息：RNA和蛋白质 25

翻译 29

细菌中mRNA转录的调控 32

真核生物中mRNA转录的调控 35

总结 37

参考文献 38

复习题 38

第四章　重组DNA技术 40

限制性内切核酸酶 41

质粒克隆载体 48

质粒克隆载体pBR322 49

转化和筛选 50

其他质粒克隆载体 52

构建和筛选基因文库 54

建立基因文库 54

DNA杂交筛选 57

免疫学检测法筛选 60

蛋白质活性法筛选 61

克隆编码真核生物蛋白质的DNA序列 62

克隆大片段DNA的载体 66

λ噬菌体载体 66

黏性质粒 68

大容量的细菌载体系统 69

原核生物基因转移 71

将DNA转入大肠杆菌 71

电穿孔 71

接合作用 71

总结 72

参考文献 73

复习题 74

亚磷酰胺法 75

DNA的化学合成 75

第五章　DNA的化学合成、测序和扩增 75

应用合成的寡核苷酸 79

DNA测序技术 85

双脱氧法进行DNA测序 85

DNA自动化测序 87

M13噬菌体作为测序载体 88

引物步移法 89

PCR 90

PCR进行基因合成 92

循环测序 94

总结 94

参考文献 95

复习题 96

第六章　原核生物基因表达的调控 97

调节型强启动子控制下的基因表达 97

调节型启动子 98

增加蛋白质产量 100

大规模系统 100

其他微生物中的表达 102

融合蛋白 103

融合蛋白的切割 103

融合蛋白的应用 104

表面展示 106

单向串联基因排列 108

翻译表达载体 109

蛋白质折叠 112

增强蛋白质的稳定性 112

克服缺氧 114

应用蛋白酶缺陷的宿主品系 114

细菌的血红蛋白 114

宿主染色体DNA整合 115

去除选择性标记基因 117

增加分泌 118

L型细菌 119

代谢负荷 121

总结 123

参考文献 124

复习题 126

第七章　异源蛋白在真核生物细胞中的表达 128

酿酒酵母表达系统 130

酿酒酵母载体 131

外源蛋白在酿酒酵母中的细胞内表达 133

酿酒酵母分泌表达异源蛋白质 134

巴斯德毕赤酵母及其他酵母表达系统 135

杆状病毒——昆虫细胞表达系统 137

杆状病毒表达载体系统 138

提高重组杆状病毒的产量 139

大肠杆菌-昆虫细胞杆状病毒穿梭载体的构建 140

昆虫细胞中哺乳动物前体蛋白的糖基化和加工 141

哺乳动物细胞表达系统 142

哺乳动物细胞表达载体的选择性标记系统 144

总结 146

参考文献 147

复习题 149

第八章　定向诱变及蛋白质工程 150

定向诱变过程 151

利用M13 DNA进行的寡核苷酸定向诱变 151

利用质粒DNA进行寡核苷酸定点诱变 153

PCR扩增进行寡核苷酸诱变 154

利用简并寡核苷酸引物随机诱变 155

核苷酸类似物随机诱变 156

易错PCR 157

DNA重排 158

含有特殊氨基酸的突变蛋白 159

蛋白质工程 159

加入二硫键 160

将天冬酰胺改变为其他氨基酸 162

减少自由巯基的数目 163

增加酶活力 163

改变金属辅助因子的需求 165

降低酶的敏感性 166

改变蛋白质特异性 167

增加酶的稳定性和专一性 169

改变多重性质 169

总结 171

参考文献 172

复习题 173

第二部分　微生物系统的分子生物技术 177

第九章　分子诊断 177

酶联免疫吸附分析 178

免疫诊断方法 178

单克隆抗体 179

杂交细胞的形成与筛选株的鉴定 180

产生特异性抗体杂交细胞株的鉴定 181

DNA诊断系统 182

杂交探针 182

疟疾的诊断 183

检测克氏锥虫 185

非放射性杂交方法 185

分子信标 186

DNA指纹 187

随机扩增DNA多态性 189

细菌生物传感器 190

镰刀状细胞贫血 191

遗传疾病的分子诊断 191

筛选囊肿性纤维化 191

PCR/OLA方法 192

挂锁探针 194

荧光标记的PCR引物作遗传图 194

总结 195

参考文献 196

复习题 197

第十章　治疗药剂 199

药物 201

分离干扰素的cDNA 201

人干扰素 201

人生长激素 202

TNF-α 203

优化基因表达 204

通过肠道细菌产生和传递药物 205

酶 205

DNA酶Ⅰ 205

藻酸盐裂解酶 206

苯丙氨酸氨裂合酶 207

α1-抗胰蛋白酶 208

单克隆抗体作为治疗药物 208

抗体的结构和功能 210

防止器官移植的排斥 211

治疗脑肿瘤 211

化学连接单克隆抗体 211

人单克隆抗体 213

人-鼠杂合的单克隆抗体 214

在大肠杆菌中产生抗体 216

噬菌体组合文库 216

CDR序列重排 219

单链抗体 219

核酸作为治疗药物 220

反义RNA 221

反义寡核苷酸 222

核酶 224

RNA-DNA杂合分子 226

RNA干扰 226

抗体基因 227

遗传性疾病的治疗 228

人类基因治疗 231

药物前体激活疗法 235

总结 236

参考文献 237

复习题 240

第十一章　疫苗 242

亚单位疫苗 244

单纯疱疹病毒 244

口蹄疫 245

多肽疫苗 245

基因免疫：DNA疫苗 248

减毒疫苗 251

霍乱 251

沙门菌 252

利什曼原虫 253

单纯疱疹病毒 254

疫苗载体 255

抗病毒疫苗 255

抗细菌疫苗 258

细菌作为抗原呈递系统 260

总结 261

参考文献 261

复习题 263

第十二章　重组微生物生产商业化产品 265

限制性内切酶 265

生物小分子 268

L-抗坏血酸的合成 268

靛蓝的微生物合成 271

氨基酸的合成 272

油脂的清除 274

抗生素 275

克隆抗生素合成基因 276

合成新抗生素 278

聚酮类抗生素 279

改进抗生素生产 283

抗菌肽 284

生物高分子 284

野油菜黄单胞菌工程化进行黄原胶的廉价生产 285

分离黑色素合成基因 286

在微生物细胞中生产动物黏附聚合物 287

微生物合成聚羟基脂肪酸酯 288

橡胶的微生物合成 288

总结 290

参考文献 290

复习题 292

第十三章　生物修复和生物量利用 294

异型生物质的微生物降解 294

生物降解途径中的基因操作 298

通过质粒转换的操作 298

通过基因变异的操作 299

淀粉和糖的利用 304

商业产品：果糖和乙醇 305

改进乙醇的生产 306

改进果糖的生产 308

运动发酵单胞菌 310

青饲料发酵 312

纤维素的应用 313

木质纤维素的组分 313

原核生物纤维素酶基因的分离 315

真核生物纤维素酶基因的分离 316

纤维素酶基因的操作 318

总结 319

参考文献 320

复习题 321

第十四章　植物促生菌 323

固氮作用 324

固氮酶 325

固氮酶的组分 325

固氮酶基因簇的基因工程 326

糖原合成酶突变体 329

控制含氧量 330

氢化酶 330

氢的代谢 330

氢化酶基因的遗传工程 331

结瘤 332

结瘤生物之间的竞争 332

结瘤基因的遗传工程 332

依靠自由生长细菌促进植物生长 337

降低植物压力 338

植物修复 340

病原体的生物控制 341

铁载体 342

抗生素 343

酶类 345

冰核形成和抗冻蛋白 345

乙烯 347

根部定殖作用 348

总结 348

参考文献 349

复习题 351

第十五章　微生物杀虫剂 352

苏云金芽孢杆菌的杀虫毒素 353

作用方式及其用途 353

分离毒素基因 356

苏云金芽孢杆菌毒素基因工程 357

防止耐受的形成 363

遗传工程改良生物防治 364

作为生物防治剂的杆状病毒 365

作用方式 365

遗传工程改良生物防治 366

总结 368

参考文献 369

复习题 371

第十六章　重组微生物大规模生产蛋白质 373

微生物培养的原理 374

批式发酵 374

补料批式发酵 376

连续发酵 376

发酵过程效率的最优化 378

高密度细胞培养 379

生物反应器 380

典型的大规模发酵系统 382

串联气升式反应器中的两步法发酵 383

单个搅拌槽式反应器的两步发酵法 384

批式与补料批式发酵 385

微生物细胞的收获 386

微生物细胞的破碎 387

下游加工 389

蛋白质溶解 390

质粒DNA的大规模生产 390

总结 391

参考文献 392

复习题 393

第三部分　真核生物系统 397

第十七章　植物基因工程：方法篇 397

利用土壤农杆菌的Ti质粒进行植物转化 397

Ti质粒衍生的载体系统 400

植物转基因的物理方法 403

微粒轰击 404

报告基因在转化植物细胞中的应用 406

植物基因表达的操作 407

不同启动子的分离和应用 407

定向诱变植物的DNA 409

定向诱变植物的RNA 409

外源DNA插入叶绿体的基因组 410

分泌外源蛋白 411

无标记转基因植物的培育 412

从核DNA中剔除标记基因 413

从叶绿体DNA中剔除标记基因 414

总结 414

参考文献 415

复习题 417

第十八章　植物基因工程：应用篇 418

培育抗虫、抗病和抗除草剂的植物 418

抗虫植物 418

抗病毒植物 425

抗除草剂植物 430

抗真菌、抗细菌植物 432

抗胁迫和抗衰老植物的培育 434

氧化胁迫 435

盐胁迫 436

果实催熟和花朵枯萎 438

花色素基因的操作 439

植物营养成分的改变 442

氨基酸 442

脂类 443

维生素 444

铁 446

食用植物味道和外观的改变 447

防止褪色 447

甜度 448

淀粉 449

植物生物反应器 451

聚合物 452

抗体 452

植物中的外源蛋白 453

口服疫苗 453

植物产量 455

增加铁含量 455

改变木质素含量 456

增加氧含量 456

总结 457

参考文献 458

复习题 461

第十九章　转基因动物 463

转基因小鼠：方法学 464

DNA显微注射法 465

逆转录病毒转染法 465

工程化胚胎干细胞法 467

Cre-loxP重组系统用于遗传改良 469

利用大容量载体转基因 471

转基因小鼠的应用 474

阿尔茨海默病的转基因模型 474

转基因小鼠作为检测系统 475

条件控制基因表达 477

条件性控制细胞死亡 478

通过核转移克隆家畜 479

转基因牛、绵羊、山羊和猪 480

转基因鸟类 484

转基因鱼类 485

总结 487

参考文献 488

复习题 491

第二十章　人类分子遗传学 492

人类遗传方式 493

遗传连锁和基因图谱 494

人类基因连锁的检测和计算 496

人类染色体遗传图谱 499

遗传多态性 499

限制性片段长度多态性 500

短串联重复多态性 502

全面的人类连锁图谱 504

致病基因在染色体上的定位 506

辐射杂种细胞图 507

全基因组BAC图谱 507

人类基因组序列 509

人类基因突变的检测 510

单链构象分析 510

变性梯度凝胶电泳 511

异源双链分析 512

错配的化学切割 513

DNA直接测序 513

确定基因的功能 514

总结 517

参考文献 517

复习题 518

第二十一章　规范分子生物技术的运用 521

第四部分　分子生物技术的规范和专利申请 521

重组DNA技术的规范 522

规范食品及食品添加剂 523

凝乳酶 523

色氨酸 524

牛生长激素 525

人工释放转基因生物 526

减少冰冻伤害的丁香假单胞菌 526

其他转基因生物的野外试验 528

关于转基因作物的争论 530

人类基因治疗 533

建立体细胞基因治疗的政策 533

缺陷基因在后代中的积累 535

克隆人 536

人类生殖细胞基因治疗 536

总结 537

参考文献 538

复习题 539

第二十二章　生物技术发明专利的申请 540

专利的申请 541

不同国家专利的申请 543

DNA序列的专利申请 544

多细胞生物的专利申请 544

专利申请与基础研究 545

总结 546

参考文献 546

复习题 547

附录　名词术语解释 548