现代生化技术 第2版PDF电子书下载

目录 3

第二版前言 3

第一版前言 3

第一篇　生化分离技术 3

第一章　提取与沉淀分离技术 3

第一节　细胞破碎 3

一、机械破碎法 3

二、物理破碎法 4

三、化学破碎法 5

四、酶促破碎法 6

第二节　提取 6

一、提取的方法 7

二、影响提取的因素 8

第三节　沉淀分离 9

一、盐析沉淀法 9

二、等电点沉淀法 14

三、有机溶剂沉淀法 14

五、金属盐沉淀法 15

四、复合沉淀法 15

六、选择性变性沉淀法 16

第四节　实验 16

实验1-1　大肠杆菌细胞的超声波破碎 16

实验1-2　枯草杆菌碱性磷酸酶的提取与盐析 17

实验1-3　枯草杆菌DNA的提取与分离 20

实验1-4　酵母RNA的提取与分离 21

实验1-5　大蒜细胞SOD的提取与分离 22

实验1-6　大鼠肝rRNA的提取与分离 24

一、非膜过滤的分类 26

第二章 过滤与膜分离技术 26

第一节　非膜过滤 26

二、非膜过滤的操作过程 27

第二节　膜分离技术 28

一、膜分离的分类 28

二、膜分离的操作过程及其控制 30

第三节　实验 32

实验2-1 胰凝乳蛋白酶的透析脱盐 32

实验2-2 糖化酶的超滤分离 33

二、有机溶剂萃取的操作过程 36

一、有机溶剂的选择 36

第三章　萃取分离技术 36

第一节　有机溶剂萃取 36

第二节　双水相萃取 37

一、双水相萃取的原理 37

二、双水相萃取的操作过程 38

第三节　超临界萃取 40

一、超临界萃取的原理 40

二、超临界萃取的操作过程 41

二、反胶束萃取的操作过程 43

一、反胶束萃取的原理 43

第四节　反胶束萃取 43

第五节 实验 45

实验3-1　青蒿素的超临界萃取分离 45

实验3-2　人生长激素的双水相萃取分离 46

实验3-3　穿心莲内酯的有机溶剂萃取 47

第四章　层析分离技术 49

第一节　吸附层析 49

一、吸附层析原理 49

二、吸附柱层析 50

三、聚酰胺薄膜层析 54

四、其他吸附层析 54

第二节　分配层析 55

一、纸层析 55

二、薄层层析 60

三、气相层析 63

第三节　离子交换层析 72

一、离子交换剂的选择与处理 72

二、离子交换层析的操作过程 75

第四节　凝胶层析 76

一、凝胶层析的基本原理 76

二、凝胶的选择与处理 78

三、凝胶层析操作过程 80

第五节　亲和层析 82

一、亲和层析母体和配基 83

二、亲和层析方法 83

二、pH梯度的形成 86

一、交换剂和缓冲液体系 86

第六节　层析聚焦 86

三、层析聚焦的操作过程 87

第七节　实验 88

实验4-1　蛋白质溶液的凝胶层析脱盐 88

实验4-2　氨基酸的纸层析 89

实验4-3　核苷酸的离子交换层析 91

实验4-4　胰蛋白酶的亲和层析 93

实验4-5　凝胶层析测定蛋白质的相对分子质量 95

实验4-6　DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜层析 97

实验4-7　醇酯成分的气相层析 98

实验4-8　胆酸混合液的薄层层析 101

第五章　电泳技术 103

第一节　电泳的基本原理 103

第二节　纸电泳 105

一、缓冲液的选择 105

二、滤纸的选择与剪裁 105

三、电泳操作要点 105

第三节　薄层电泳 107

第四节　薄膜电泳 108

第五节　凝胶电泳 109

一、聚丙烯酰胺凝胶的制备原理 109

二、不连续电泳中样品压缩成层的原理 111

三、SDS-凝胶电泳原理 112

四、凝胶电泳的操作要点 112

第六节　等电点聚焦电泳 114

一、稳定pH梯度的形成 114

二、两性电解质载体 115

三、支持pH梯度的介质 115

四、等电点聚焦电泳的操作要点 116

第七节　实验 117

实验5-1　核苷酸的纸电泳 117

实验5-2　蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳 119

实验5-3　DNA的琼脂糖凝胶电泳 120

实验5-4　蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 122

实验5-5　SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量 124

实验5-6　蛋白质的二元凝胶电泳 127

三、超速离心机 129

二、高速离心机 129

第一节　离心机的选择 129

第六章　离心分离技术 129

一、常速离心机 129

第二节　离心方法的选择 131

一、差速离心 131

二、密度梯度离心 131

三、等密度梯度离心 133

一、离心力 134

二、离心时间 134

第三节　离心条件的确定 134

三、温度 135

四、pH值 135

第四节　实验 136

实验6-1　细菌核糖体的分离 136

实验6-2　大肠杆菌细胞膜的分离 137

实验6-3　RNA的蔗糖密度梯度离心分离 138

实验6-4　大鼠肝细胞核的分离 139

一、兰-爱农（Lane-Eynon）法 143

第一节　糖类的化学检测 143

第二篇　生化检测技术 143

第七章　化学检测技术 143

二、斐林试剂快速法 144

三、次碘酸钠法 145

四、铜试剂法 147

第二节　蛋白质和氨基酸的化学检测 148

一、定氮法测定蛋白质的含量 148

二、双缩脲试剂法测定蛋白质含量 150

三、福林-酚试剂法测定蛋白质含量 150

五、蛋白质的氨基酸排列顺序测定——Edman法 152

四、蛋白质N-末端氨基酸DNS测定法 152

六、蛋白质N-末端氨基酸FDNB测定法 156

七、茚三酮显色法测定氨基酸含量 157

八、甲醛滴定法测定氨基酸 159

第三节　蛋白质的免疫化学检测 159

一、基本概念与原理 159

二、蛋白质的免疫化学检测方法 160

第四节　核酸的化学检测 162

一、定磷法测定核酸含量 162

二、二苯胺法测定DNA含量 163

三、地衣酚法测定RNA含量 164

第五节　实验 164

实验7-1　斐林试剂置换法测定还原糖 164

实验7-2　葡萄糖淀粉酶的活力测定 166

实验7-3　微量凯氏定氮法测定总氮量 167

实验7-4　福林-酚试剂法测定蛋白质含量 169

实验7-5　丹磺酰化法分析蛋白质N-末端氨基酸 170

实验7-6　异硫氰酸苯酯分析法测定肽链的氨基酸排列次序 172

实验7-7　茚三酮显色法测定氨基酸含量 174

实验7-8　双向免疫扩散法测定抗血清效价 175

实验7-9　定磷法测定核酸含量 176

实验7-10　地衣酚显色法测定RNA含量 178

实验7-11　二苯胺显色法测定DNA含量 179

第八章　光学检测技术 181

第一节　旋光检测技术 181

一、原理 181

二、操作要点 182

第二节　荧光检测技术 182

一、邻苯二甲醛荧光分析法测定氨基酸 183

二、荧光胺荧光分析法测定肽含量 184

第三节　分光光度检测技术 185

一、原理 185

二、操作要点 186

第四节　实验 188

实验8-1　旋光法测定味精的纯度 188

实验8-2　荧光法测定核黄素含量 189

实验8-3　荧光法测定氨基酸含量 190

实验8-4　紫外吸收法测定核酸含量 191

实验8-5　紫外吸收法测定蛋白质含量 192

第九章　气体检测技术 194

第一节　华勃氏呼吸仪检压法 195

第二节　范·斯莱克检测仪测定α-氨基酸含量 198

第三节　实验 198

实验9-1　酵母细胞耗氧量的测定 198

实验9-2　华勃氏呼吸仪测定L-谷氨酸脱羧酶活力 199

实验9-3　华勃氏呼吸仪测定L-谷氨酸含量 201

一、毒性试验 203

第一节　安全性试验 203

第十章　生物检测技术 203

二、局部刺激性试验 205

三、溶血试验 205

四、热原试验 205

五、过敏试验 206

第二节　生长抑制物质的生物效价测定 206

一、稀释法 207

二、扩散法 207

第三节　生长促进物质的生物效价检测 209

四、滴定法 210

实验10-1　卡那霉素的效价测定 210

第四节　实验 210

一、稀释法 210

三、比浊法 210

二、扩散法 210

实验10-2　二环素的杀菌能力测定 212

实验10-3　细胞病变抑制法测定干扰素的效价 213

实验10-4　热原试验 215

二、放射性同位素的衰变与射线 217

一、放射性同位素 217

第十一章　放射性同位素检测技术 217

第一节　基本知识 217

三、衰变规律 218

四、放射线的防护 219

第二节　放射性同位素的检测 219

一、放射自显影技术 220

二、盖革计数管探测 220

三、闪烁计数器探测 221

第三节　放射性同位素的搀入 223

第四节　实验 224

实验11-1　γ-32P-ATP的酶促合成 224

实验11-2　3H-蛋白质的生物合成 225

实验11-3　3H-蛋白质凝胶的放射荧光显影 225

第三篇　酶、基因和细胞操作技术 229

第十二章　酶技术 229

第一节　酶生物合成的调节技术 229

一、酶的诱导合成 229

二、酶生物合成的阻遏 231

第二节　酶反应动力学的研究 233

一、酶反应初速度的测定 233

二、底物浓度对反应速度的影响——Km和νmax的测定 233

三、最适温度、热稳定性和活化能的测定 235

四、最适pH值的测定 237

五、酶的激活与抑制 237

第三节　酶、细胞和原生质体固定化技术 238

一、吸附法固定化技术 238

二、包埋法固定化技术 239

三、结合法固定化技术 240

四、交联固定化技术 242

第四节　酶分子修饰技术 242

一、金属离子置换修饰 243

二、大分子结合修饰 243

三、酶的侧链基团修饰 245

四、肽链有限水解修饰 248

五、核苷酸链剪切修饰 249

六、氨基酸置换修饰 249

七、核苷酸置换修饰 250

第五节　实验 251

实验12-1　β-半乳糖苷酶的诱导合成 251

八、酶分子的物理修饰 251

实验12-2　无机磷酸对枯草杆菌碱性磷酸酶生物合成的阻遏作用 253

实验12-3　碱性磷酸酶的反应动力学性质 254

实验12-4　L-谷氨酸脱羧酶的固定化 256

实验12-5　枯草杆菌细胞固定化 257

实验12-6　谷氨酸棒杆菌原生质体固定化 258

实验12-7　固定化原生质体生产谷氨酸脱氢酶 259

一、分离法 261

第十三章　基因克隆技术 261

第一节　基因的获取技术 261

二、反转录法 262

三、化学合成法 264

四、聚合酶链反应（PCR）技术 265

第二节　载体的制备技术 267

一、载体的分类 268

二、载体的制备 269

一、黏性末端连接 271

第三节　DNA体外重组技术 271

二、平头末端连接 272

三、修饰末端连接 273

第四节　重组DNA引入受体细胞技术 274

一、受体细胞的筛选与处理 274

二、外源DNA引入受体细胞 274

第五节　重组DNA的鉴定技术 276

一、DNA印迹技术 276

二、RNA印迹技术 278

四、DNA序列测定技术 279

三、蛋白质印迹技术 279

第六节　实验 283

实验13-1　大肠杆菌Col EⅠ质粒的分离 283

实验13-2　重组DNA的细胞转化 285

实验13-3　Sanger法测定基因的序列 286

实验13-4　DNA印迹杂交 287

实验13-5　PCR扩增目的基因 289

实验13-6　碱裂解法提取质粒DNA 290

第一节　动物细胞融合技术 292

第十四章　细胞融合技术 292

一、细胞的制备 293

二、细胞融合 293

三、融合子的筛选 294

第二节　原生质体融合技术 295

一、原生质体制备 295

二、原生质体融合 299

三、细胞壁的再生 300

四、融合子的筛选 300

第三节　细胞拆合技术 301

一、细胞器的分离 302

二、细胞器重组 303

第四节　实验 305

实验14-1　枯草杆菌原生质体的制备 305

实验14-2　酵母原生质体的分离与再生 305

实验14-3　从胡萝卜细胞分离原生质体 307

实验14-4　动物细胞微核体和胞质体的制备 308

附录 310

主要参考文献 321