生物化学实验指导 第2版PDF电子书下载

理论部分 3

1 生物大分子的制备 3

1.1 概述 3

1.2　生物大分子制备的前处理 5

1.2.1 生物材料的选择 5

1.2.2　细胞的破碎 5

1.2.3 生物大分子的提取 6

1.3　生物大分子的分离纯化 8

1.3.1 沉淀法 8

1.3.2　透析 13

1.3.3　超滤 14

1.3.4　冰冻干燥 16

1.3.5　样品的保存 18

1.3.6　分离纯化方法的选择 19

2　层析技术 22

2.1　层析技术概述 22

2.1.1 引言 22

2.1.2　层析的基本理论 22

2.1.3　层析的基本概念 23

2.1.4　层析法的分类 26

2.1.5　柱层析的基本装置及基本操作 26

2.2　凝胶层析 29

2.2.1 简介 29

2.2.2　凝胶层析的基本原理 29

2.2.3　凝胶层析的基本概念 29

2.2.4　凝胶的种类和性质 32

2.2.5　凝胶的选择、处理和保存 35

2.2.6　凝胶层析的基本操作 36

2.2.7　凝胶层析的应用 37

2.3　离子交换层析 38

2.3.1 简介 38

2.3.2　基本原理 39

2.3.3 离子交换剂的种类和性质 40

2.3.4 离子交换剂的选择、处理和保存 42

2.3.5 离子交换层析的基本操作 43

2.3.6 阴离子交换树脂Q-Sepharose 45

2.3.7 离子交换层析的应用 47

2.4　亲和层析 48

2.4.1 简介 48

2.4.2　亲和层析的基本原理 48

2.4.3 亲和吸附剂 51

2.4.4　亲和层析的基本操作 54

2.4.5 亲和层析的应用 55

2.5　高效液相层析（HPLC） 58

2.5.1 简介 58

2.5.2 HPLC的特点 59

2.5.3 HPLC的分类 59

3　电泳技术 62

3.1 发展简史 62

3.2　电泳基本原理 62

3.3　影响电泳分离的主要因素 64

3.4　电泳的分类 65

3.5　纸电泳和醋酸纤维薄膜电泳 66

3.6　琼脂糖凝胶电泳 67

3.7　聚丙烯酰胺凝胶电泳 68

3.8 SDS-PAGE 70

3.9　梯度凝胶电泳 72

3.10　等电聚焦电泳 73

3.11　二维聚丙烯酰胺凝胶电泳 74

3.12　蛋白质的检测、鉴定及回收 75

3.13　蛋白质印迹 76

3.14　毛细管电泳 77

3.15　芯片毛细管电泳 80

4　离心技术 82

4.1 基本原理 82

4.2　离心机的主要构造和类型 83

4.3　超速离心技术 86

4.4　离心操作的注意事项 89

5　分光光度技术 90

5.1　基本原理 90

5.2　分光光度计的组成和构造 93

5.3　分光光度法在生化实验技术中的应用 97

6　免疫化学技术 99

6.1　免疫化学技术简介 99

6.2　抗原的免疫原性和专一性 99

6.3　抗体的结构和功能 101

6.4　抗原抗体的结合 102

6.5　动物的常规免疫 104

6.6　双向免疫扩散及免疫电泳 105

6.7　酶联免疫吸附法（ELISA） 107

6.7.1 间接法测抗体 108

6.7.2　双抗体夹心法 108

6.7.3　双位点一步法 108

6.7.4　竞争法 109

6.7.5　捕获法测IgM抗体 109

7　其他新技术概览 112

7.1　荧光技术 112

7.1.1 荧光产生机制 112

7.1.2 天然荧光生色团和荧光探针 113

7.1.3 荧光共振能量转移 113

7.2　等温滴定微量热技术 115

7.2.1 等温滴定微量热（ITC）简介 115

7.2.2　ITC的优点 116

7.2.3 ITC的主要应用 116

7.3　生物大分子相互作用分析 118

7.3.1 表面等离子共振技术的原理 118

7.3.2　Biacore分析系统的组成 119

7.3.3　Biacore的工作原理 119

7.3.4　Biacore的应用领域 120

7.4　质谱技术 121

7.4.1 质谱的基本原理 121

7.4.2　质谱的分类 122

7.4.3　质谱的应用 123

7.5 圆二层析技术（CD） 124

7.5.1 圆二色的基本原理 124

7.5.2 圆二色仪 125

7.5.3 圆二色技术的应用 125

7.6　蛋白质测序技术 126

7.6.1 N端测序 127

7.6.2 C端测序 127

实验部分 131

实验1 蛋白质含量测定法 131

1．微量凯氏（Kjeldahl）定氮法 131

2．双缩脲法（Biuret法） 132

3．Folin-酚试剂法（Lowry法） 133

4．改良的简易Folin-酚试剂法 135

5．考马斯亮蓝法（Bradford法） 136

6．紫外吸收法 138

实验2　凝胶层析法测定蛋白质分子质量 141

1．实验目的 141

2．实验原理 141

3．器材与试剂 142

4．实验操作 142

实验3　等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点 145

1．实验目的 145

2．实验原理 145

3．器材和试剂 146

4．溶液配制 147

5．操作步骤 147

6．数据处理 149

实验4　蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 150

1．SDS-PAGE的配制 151

2．SDS-PAGE的灌和 152

3．用考马斯亮蓝对SDS-PAGE进行染色 154

4．干胶 155

5．测量并计算相对分子质量 155

实验5　小牛胸腺DNA的制备 157

1．实验目的 157

2．实验原理 157

3．器材与试剂 158

4．实验步骤 158

实验6　小牛胸腺DNA熔解温度的测量 160

1．实验目的 160

2．实验原理 160

3．器材与试剂 161

4．操作步骤 161

实验7　脱辅基血红蛋白的制备和重组 163

1．实验目的 163

2．实验原理 163

3．实验方法 163

实验8　离子交换柱层析分离核苷酸 166

1．实验目的 166

2．实验原理 166

3．试剂与器材 170

4．操作步骤 170

5．结果处理 172

实验9　猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定 174

1．实验目的 174

2．实验原理 174

3．器材与试剂 175

4．实验步骤 176

5．注意事项 177

实验10　亲和层析纯化胰蛋白酶 178

1．实验目的与要求 178

2．基本原理 178

3．试剂与器材 179

4．实验操作步骤 180

5．实验结果处理 183

6．参考资料 184

实验11 兔肌肌酸激酶的分离纯化及部分性质测定 186

1．实验原理 186

2．实验试剂 187

3．实验步骤 188

实验12　免疫化学实验 192

1．免疫血清的制备 192

2．沉淀反应定量 193

3．双向免疫扩散 194

4．对流免疫电泳 195

5．微量免疫电泳 196

6．单向定量免疫电泳（火箭电泳法） 197

7．双向免疫电泳（交叉免疫电泳） 198

8．酶联免疫吸附测定（ELISA） 198

9．蛋白质印迹 204

实验13　生物软件在生物化学实验中的应用 206

1．基因序列的查找与比对 206

2．蛋白质的性质分析与预测 211

3．蛋白质三维结构的显示和分析 219

实验14　热休克蛋白16.3的分离纯化和活性测定 225

1．实验目的 225

2．实验原理 225

3．器材与试剂 226

4．实验步骤 228

5．注意事项 231

附录 233

1．分光光度计 233

2．恒流泵操作规程 236

3．自动部分收集器操作规程 236

4．日立高速冷冻离心机操作程序 239

5．各种仪器的使用注意事项 240

6．德国耶拿（蔡司）SPECORD 200和SPEKOL-1100使用说明 242

SPECORD 200使用说明 242

SPEKOL-1100使用说明 250

参考文献 252