生物化学与分子生物学实验指导PDF电子书下载

第一篇 生物化学与分子生物学实验技术的基本原理 2

第1章 分光光度技术 2

第一节 基本原理 2

一、光的基本知识 2

二、朗伯一比尔定律 3

第二节 分光光度技术的应用 4

一、定量分析 4

二、定性分析 5

三、纯度检测 6

四、分光光度法的误差 6

第三节 分光光度计的基本结构及使用 6

一、分光光度计的基本构造 6

二、常见分光光度计的使用 7

三、分光光度计使用的注意事项 9

第2章 电泳技术 10

第一节 基本原理 10

一、电泳的原理 10

二、影响电泳速度的外界因素 11

第二节 电泳分类 11

一、按工作原理分类 11

二、按分离目的分类 12

三、按用法分类 12

第三节 常用电泳技术 12

一、纸电泳 12

二、醋酸纤维素薄膜电泳 13

三、琼脂糖凝胶电泳 14

四、聚丙烯酰胺凝胶电泳 14

五、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 16

六、等电聚焦电泳 16

七、双向凝胶电泳 17

八、免疫电泳 19

九、毛细管电泳 20

第四节 电泳装置的结构及使用 21

一、电泳装置 21

二、使用方法 24

第3章 层析技术 26

第一节 基本原理 26

一、层析的基本概念 26

二、层析的基本原理 27

三、层析技术的分类 28

第二节 吸附层析 29

一、吸附层析的原理 29

二、吸附层析的分类 30

三、吸附剂和洗脱剂的选择 31

第三节 分配层析 31

一、分配层析的原理 31

二、纸层析 32

第四节 离子交换层析 33

一、离子交换层析的原理 33

二、离子交换剂的类型 34

三、离子交换层析的应用 34

四、离子交换树脂的处理 34

第五节 凝胶层析 35

一、凝胶层析的原理 35

二、凝胶层析的实验技术 36

三、凝胶层析的应用 38

第六节 亲和层析 38

一、亲和层析的原理 39

二、亲和层析的基本过程 39

三、亲和层析载体、配体的选择与偶联 39

第4章 离心技术 41

第一节 离心技术的基本原理 41

一、离心力 41

二、相对离心力 42

三、沉降系数 42

第二节 离心分离的常用方法 42

一、沉淀离心法 42

二、差速离心法 43

三、密度梯度离心法 44

第三节 离心机的分类及使用 45

一、制备型离心机 46

二、分析型离心机 47

三、离心操作注意事项及其维护保养 47

第5章 核酸分子杂交技术 49

第一节 基本原理 49

一、DNA的变性 49

二、DNA的复性 50

三、核酸分子杂交 50

第二节 核酸探针及其标记 50

一、核酸探针 51

二、探针的标记 52

第三节 常用核酸分子杂交技术 55

一、固相杂交技术 55

二、液相杂交技术 57

三、核酸分子杂交实验条件的优化 58

第二篇 生物化学与分子生物学实验概论 64

第6章 生物化学与分子生物学实验的基本要求 64

第一节 实验室的基本要求 64

一、实验室规则 64

二、实验室安全 64

第二节 实验记录与实验报告的基本要求 66

一、实验记录 66

二、实验数据的处理 70

三、实验误差分析与处理 71

四、实验报告的要求 76

第7章 生物化学与分子生物学实验基本技能训练 78

第一节 基本操作技能 78

一、玻璃仪器的洗涤与干燥 78

二、溶液的混匀 79

三、过滤、加热与冷却 80

第二节 基本器材与仪器的使用 82

一、刻度吸管的使用 82

二、可调微量移液器的使用 83

三、容量瓶的使用 83

四、电子天平的使用 84

五、pH计的使用 85

第8章 生物化学与分子生物学实验样品的制备 88

第一节 样品制备的基本原则与策略 88

一、生物样品制备的基本原则 88

二、生物样品制备的基本策略 89

第二节 常用实验样品的制备 89

一、血液样品 89

二、尿液样品 90

三、组织样品 90

四、微生物样品 91

五、植物样品 92

第三节 生物大分子的制备 92

一、核酸的分离纯化 92

二、蛋白质的分离纯化 93

第三篇 基本型实验 98

第9章 蛋白质、氨基酸实验 98

第一节 蛋白质的定量测定 98

实验1蛋白质的定量测定（微量凯氏定氮法） 98

实验2蛋白质的定量测定（双缩脲法） 103

实验3蛋白质的定量测定（Folin-酚试剂法） 105

实验4蛋白质的定量测定（BCA法） 107

实验5蛋白质的定量测定（考马斯亮蓝染色法） 109

实验6蛋白质的定量测定（紫外吸收法） 111

第二节 蛋白质相对分子量测定（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳） 113

第三节 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 120

第四节 氨基酸的薄层层析 124

第五节 氨基酸的纸层析 128

第10章 酶学实验 132

第一节 过氧化氢酶米式常数的测定 132

第二节 血清丙氨酸氨基转移酶活性测定 135

第三节 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 138

第四节 乳酸脱氢酶同工酶琼脂糖电泳法测定 140

第11章 糖类、脂类实验 143

第一节 血糖的定量测定 143

实验1血糖的定量测定（Folin-吴宪法） 143

实验2血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法） 147

实验3血糖的定量测定（己糖激酶法） 149

第二节 乳酸的定性分析与定量测定 151

实验1尿中乳酸含量的定性分析 152

实验2血液中乳酸含量的定量测定 153

第三节 血清甘油三酯的测定（乙酰丙酮显色法） 155

第四节 血清总胆固醇的测定（胆固醇氧化酶法） 158

第12章 核酸实验 161

第一节 核酸的定量测定 161

实验1核酸的定量测定（定磷法） 161

实验2核酸的定量测定（紫外吸收法） 164

实验3DNA的定量测定（二苯胺法） 165

实验4RNA的定量测定（地衣酚法） 167

第二节 核酸的琼脂糖凝胶电泳 169

实验1 DNA的琼脂糖凝胶电泳 169

实验2 RNA的甲醛变性凝胶电泳 172

第三节 核酸的聚丙烯酰胺凝胶电泳 174

第四节DNA的聚合酶链式反应 177

第四篇 综合设计型实验 186

第13章 综合性实验 186

第一节 血清清蛋白、γ-球蛋白的分离纯化与定量 186

第二节 碱性磷酸酶的分离纯化、比活性测定与动力学分析 196

实验1碱性磷酸酶的分离纯化和比活性测定 196

实验2底物浓度对碱性磷酸酶活性的影响 199

实验3 pH对碱性磷酸酶活性的影响 203

实验4温度对碱性磷酸酶活性的影响 205

第三节 肝糖原的提取、鉴定与定量 207

实验1肝糖原的提取与鉴定 207

实验2肝糖原定量测定 209

第四节 血清脂蛋白的电泳分离与定量测定 211

实验1血清脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳 213

实验2血清高密度脂蛋白-胆固醇的分离与定量测定（磷钨酸-镁沉淀法） 216

第五节 质粒DNA的提取、定量与酶切鉴定 218

实验1质粒DNA的小量提取（碱裂解法） 219

实验2高纯质粒小量制备（试剂盒法，离心柱型） 224

实验3质粒DNA的定量（紫外分光光度法） 226

实验4质粒DNA的酶切鉴定 228

第六节 基因组DNA的提取、定量与鉴定 232

实验1细菌基因组DNA的提取、定量与鉴定 232

实验2动物组织基因组DNA的提取、定量与鉴定 235

第七节总RNA的提取、定量与逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR） 239

实验1总RNA的提取与定量 239

实验2逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR） 243

第八节Southern杂交 248

实验1基因组DNA样品的限制性酶切 248

实验2酶切样品的琼脂糖凝胶电泳 250

实验3DNA的变性、转膜与固定 252

实验4杂交与杂交后清洗 255

实验5杂交结果的检测 257

第九节 斑点或狭缝杂交 258

第14章 设计性实验 265

第一节 设计性实验的基本程序 265

一、选题定题 265

二、实验设计 266

三、实验实施 269

四、实验总结 269

第二节 生物化学与分子生物学实验设计的基本思路 270

一、蛋白质研究的实验设计 270

二、酶学研究的实验设计 275

三、核酸研究的实验设计 277

四、糖类化合物的实验设计 280

五、脂类及维生素的实验设计 282

附：实验设计书范例 284

第五篇 研究创新型实验 294

第15章 分子克隆实验 294

第一节 目的基因的分离与载体的选择 294

实验1目的基因的分离 294

实验2载体的选择 297

第二节 目的基因与载体的限制性酶切及酶切产物的回收 301

实验1目的基因与载体的限制性酶切 301

实验2酶切产物的回收 304

第三节 目的基因与载体的连接 307

实验1酶切产物的克隆（T4 DNA连接酶法） 308

实验2 PCR产物的TA克隆 311

第四节 重组DNA的导入 314

第五节 阳性重组体的筛选与鉴定 317

实验1阳性重组体的筛选（a-互补法） 317

实验2阳性重组体的鉴定（菌落PCR法） 320

第六节 目的基因的表达及鉴定 321

第16章 基因芯片实验 325

第一节 限制性基因芯片探针的制备 325

第二节 基因芯片实验样品的限制性荧光标记 330

第三节 基因芯片的表面处理与质控 335

第六篇 生物化学与分子生物学实验常用数据 340

第17章 试剂的配制与保存 340

第一节 化学试剂分级及注意事项 340

一、化学试剂纯度分级表 340

二、试剂配制的一般注意事项 340

三、易变质及需要特殊方法保存的试剂 341

第二节 常用试剂及溶液的配制 341

一、常用清洗液的配制 341

二、常用试剂的配制 342

三、常用缓冲液的配制 344

四、电泳常用缓冲液的配制 349

五、常用储存液的配制 350

第三节 细菌实验试剂的配制与保存 351

一、细菌培养基的配制 351

二、抗生素的配制 353

三、细菌的保存 354

第18章 常用数据表 355

一、常用蛋白质相对分子质量标准数据 355

二、氨基酸的主要参数 355

三、核酸、蛋白质换算数据 356

四、常用核酸相对分子质量标准数据 356

五、琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围 357

六、PAGE凝胶配表（核酸电泳用） 357

七、SDS-PAGE的浓缩胶（5％Acrylamide）配方表 358

八、SDS-PAGE分离胶配方表 358

九、SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围 359

附录A英文版实验指导 360

Introduction to Biochemistry Experiments 360

Experiment 1 Determination of protein content by Lowry's method 363

Experiment 2 Protein identification by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 365

Experiment 3 Electrophoresis on cellulose acetate membrane of serum proteins 371

Experiment 4 Amino Acid Identification by Thin Layer Chromatography 374

Experiment 5 Extraction, Identification and Quantification of liver glycogen 377

Experiment 6 Plasmid DNA Miniprep,Quantification and Restriction Digestion Analysis 381

Experiment 7 Total RNA isolation and Reverse Transcription-Polyrnerase Chain Reaction（RT-PCR） 389