牙鲆淋巴囊肿病与基因工程疫苗PDF电子书下载

第一篇 鱼类养殖疾病与疫苗沿革 3

第一章 养殖海水鱼类的疾病 3

第一节 养殖海水鱼病毒病 3

一、弹状病毒病 3

二、淋巴囊肿病 4

三、双RNA病毒病 4

四、病毒性神经坏死病 4

五、病毒性红细胞坏死病 5

六、虹彩病毒感染症 5

七、疱疹病毒病 5

八、传染性胰脏坏死病毒病 5

九、传染性造血器官坏死病毒病 6

十、口白症 6

十一、传染性脾肾坏死病毒病 6

十二、水生呼肠孤病毒病 7

十三、病毒性腹水病 7

十四、病毒性畸形病 7

十五、红细胞包涵体综合征 7

十六、细胞肿大病毒病 8

第二节 养殖鱼类细菌病和其他疾病 9

一、细菌性疾病 9

二、低等藻类所致疾病 11

三、原虫病 12

四、蠕虫病 14

五、甲壳动物病 14

六、其他疾病 15

第三节 我国牙鲆养殖状况与主要疾病 15

一、牙鲆养殖状况 15

二、牙鲆常见疾病 16

第四节 淋巴囊肿病及其研究现状 19

一、淋巴囊肿病病毒的纯化和体外培养 19

二、病理学研究 19

三、病毒结构和基因组研究 21

四、病毒结构蛋白与抗原性研究 22

五、LCDV的致病机制 23

六、患淋巴囊肿病牙鲆的抗体检测 24

七、诊断与防治研究 24

八、病毒多样性与基因组学研究现状 26

第五节 水产动物疾病早期诊断技术 27

一、免疫学诊断技术 27

二、分子生物学诊断技术 31

参考文献 32

第二章 鱼类疫苗研究史与病毒核酸疫苗 37

第一节 鱼类疫苗研究史 37

一、抗细菌疫苗 37

二、抗病毒疫苗 38

三、鱼类疫苗接种研究 39

第二节 核酸疫苗 40

一、核酸疫苗简介 40

二、核酸疫苗的优点 41

三、核酸疫苗的构成 42

四、核酸疫苗的免疫机制 42

五、提高核酸疫苗免疫效果的优化策略 43

六、“自杀性”疫苗及其研究进展 44

七、菌蜕疫苗研究进展 46

第三节 鱼用核酸疫苗研究概况与研制技术 47

一、研究概况 47

二、研制技术 51

第四节 影响核酸疫苗诱导水平和免疫效果的因素 52

一、核酸疫苗诱导的体液免疫 52

二、核酸疫苗诱导的细胞免疫 52

三、核酸疫苗的免疫机制 53

四、影响核酸疫苗免疫效果的因素 54

第五节 核酸疫苗的安全性及相关问题 55

一、基因整合 56

二、生殖毒性 57

三、免疫耐受 57

四、自身免疫疾病 58

五、疫苗生产菌株所带来的安全问题 59

六、对环境和消费者的安全问题 60

七、结语 60

第六节 核酸疫苗佐剂的研究进展 61

一、脂质体核酸疫苗佐剂的研究进展 61

二、细胞因子、CpG ODN等佐剂的研究进展 64

第七节 核酸疫苗接种途径的研究 69

一、制备胶囊疫苗技术 70

二、微胶囊疫苗的释放 71

三、微胶囊的主要优点和作用机制 72

第八节 核酸疫苗中试产品的质量控制 72

一、原材料的质量控制 73

二、培养过程的质量控制 74

三、纯化过程中的质量控制 74

四、最终产品的质量控制 75

第九节 鱼用核酸疫苗研究展望 76

参考文献 77

第二篇 淋巴囊肿病特征、早期诊断与基因组分析 87

第三章 牙鲆淋巴囊肿病流行病学与病毒分子特征 87

第一节 牙鲆淋巴囊肿病流行病学特点 87

第二节 淋巴囊肿病的病理学特征 89

一、材料与方法 89

二、结果 89

第三节 淋巴囊肿病病毒的纯化 94

一、剥除肿瘤外膜-超速蔗糖密度梯度离心 95

二、胶原酶法分离淋巴囊肿病病毒 96

第四节 淋巴囊肿病病毒的体外细胞培养 102

一、材料与方法 102

二、结果 103

三、讨论 103

第五节 淋巴囊肿病的病原学研究 105

一、材料与方法 105

二、结果与讨论 106

第六节 患淋巴囊肿病牙鲆血清的免疫球蛋白分析 107

一、材料与方法 107

二、结果与讨论 109

第七节 淋巴囊肿病病毒单克隆抗体制备 112

一、材料与方法 112

二、结果与讨论 115

本章小结 116

参考文献 117

第四章 淋巴囊肿病早期诊断技术 120

第一节 淋巴囊肿病病毒的PCR诊断方法 120

一、试验材料 120

二、试验方法 120

三、结果与分析 122

第二节LCDV-cn的定量PCR检测 124

一、材料与方法 124

二、结果 126

三、讨论 129

第三节 淋巴囊肿病核酸探针-原位杂交诊断技术 129

一、试验材料 129

二、试验方法 130

三、结果与讨论 131

第四节LCDV-cn核酸探针-点杂交检测试剂盒研制与效果 135

一、材料与方法 135

二、结果 139

三、讨论 141

参考文献 141

第五章 不同虹彩病毒株系统进化关系与基因型分析 145

第一节 军曹鱼淋巴囊肿病病毒mcp基因与序列分析 145

一、材料与方法 145

二、结果与讨论 146

第二节 淋巴囊肿病病毒的遗传多样性和基因型分析 147

一、试剂、仪器和材料 148

二、实验方法 149

三、结果 150

四、讨论 152

参考文献 154

第六章LCDV-cn基因组信息分析 156

第一节LCDV-cn和淋巴囊肿病病毒特有功能基因研究 156

一、试剂与材料 156

二、试验方法 156

三、结果 158

四、讨论和结论 171

第二节LCDV-cn锌指蛋白基因的原核表达、序列同源性及编码蛋白结构分析 173

一、材料 174

二、方法 174

三、结果 176

四、讨论 179

参考文献 180

第七章 牙鲆淋巴囊肿病自愈过程和机制研究 182

第一节 患淋巴囊肿病牙鲆与自愈牙鲆的病理学特征比较 182

一、材料 183

二、实验操作 183

三、结果 184

四、讨论 185

第二节 细胞因子在牙鲆淋巴囊肿病自愈过程中的表达 187

一、材料和方法 188

二、结果与分析 190

三、讨论 194

第三节 水温对牙鲆体内MHC及TCR表达的影响 196

一、材料和方法 197

二、实验结果 197

三、讨论 199

第四节 牙鲆淋巴囊肿病血清蛋白质组研究 201

一、材料 201

二、实验方法 201

三、结果与分析 203

四、讨论 206

参考文献 208

第八章 牙鲆p53肿瘤抑制基因与淋巴囊肿病的关系研究 211

第一节 牙鲆p53基因cDNA克隆与组织表达 211

一、材料和方法 212

二、结果 216

三、讨论 220

第二节 牙鲆p53基因组结构分析 221

一、材料 222

二、方法 222

三、结果 223

四、讨论 229

第三节 牙鲆p53基因多态性及与淋巴囊肿病感染的关系 229

一、材料 230

二、方法 230

三、结果 233

四、讨论 237

参考文献 238

第九章RNA干扰技术在淋巴囊肿病防治中的初步应用 241

第一节RNAi技术及其在海洋生物研究中的应用 241

一、RNAi技术在海洋生物基因功能研究中的应用 241

二、RNAi技术在海洋生物抗病毒研究中的应用 242

三、RNAi技术的应用前景 243

第二节RNAi对LCDV-cn在牙鲆体内复制的影响 244

一、材料和方法 244

二、结果 247

三、讨论 248

参考文献 249

第三篇 淋巴囊肿病核酸疫苗的研发 253

第十章 淋巴囊肿病核酸疫苗的基因克隆制备技术 253

第一节LCDV-cn保护性抗原基因筛选及含MCP0.6 kb重组质粒的构建与鉴定 253

一、材料 254

二、方法 254

三、结果 257

四、讨论 259

第二节LCDV-cn真核载体的构建、鉴定与表达 260

一、材料与方法 260

二、结果 261

三、讨论 264

参考文献 265

第十一章 注射型核酸疫苗重组质粒的免疫效果研究 266

第一节 重组质粒在牙鲆体内的存留与表达 266

一、材料和方法 267

二、结果 270

三、讨论 273

第二节 重组质粒的免疫效果评价 274

一、接种淋巴囊肿病病毒核酸疫苗前后牙鲆体内LCDV-cn的检验 274

二、淋巴囊肿病病毒核酸疫苗不同接种途径和剂量的免疫效果比较 276

第三节 淋巴囊肿病病毒核酸疫苗的大量制备和田间试验 281

一、材料与方法 281

二、结果 283

三、讨论 285

第四节 牙鲆接种疫苗后免疫相关基因的表达 286

一、材料与方法 287

二、结果 290

三、讨论 292

参考文献 294

第十二章 核酸疫苗佐剂筛选 297

第一节 脂质体对核酸疫苗免疫活性的影响 297

一、材料和方法 297

二、结果 299

三、讨论 301

第二节CpG ODN对牙鲆淋巴囊肿病病毒核酸疫苗免疫活性的影响 302

一、材料与方法 302

二、结果 304

三、讨论 305

参考文献 307

第十三章 核酸疫苗的安全性研究 308

第一节 实验室安全性研究 308

一、菌株DH5αLCDV-cn的质粒遗传稳定性研究 308

二、DH5αLCDV-cn中目的基因MCP0.6kb表达稳定性 310

三、制品对动物的安全性研究 313

第二节 中间试验阶段安全性研究 322

一、核酸疫苗质粒DNA在牙鲆注射部位存留和体内相关组织中的分布 322

二、核酸疫苗质粒DNA在牙鲆血液中的存在及持续时间 324

三、重组质粒核酸疫苗与牙鲆染色体的整合性研究 325

四、动物用转基因细菌的存活力研究 327

五、转基因微生物制品对动物的安全性 329

六、讨论 330

参考文献 331

第十四章 核酸疫苗的生产工艺与质量检验 332

第一节 中间试制生产 332

一、中间试制生产 332

二、工艺流程 334

三、试制产品生产检验 334

四、试制过程中的不足及改进建议 339

五、试制结论 339

第二节 核酸疫苗制备的质量检验规程 340

一、菌种、毒种 340

二、疫苗制造及过程控制 341

三、成品检验 343

四、作用与用途 343

五、用法与用量 343

六、注意事项 343

七、储藏 344

八、规格 344

第三节 牙鲆淋巴囊肿病核酸疫苗质量标准 344

参考文献 344

附录 345

第十五章 口服型淋巴囊肿病核酸疫苗研制技术与免疫效果 349

第一节LCD聚丙交酯乙二醇酸口服微囊核酸疫苗研制与免疫效果研究 350

一、材料和方法 350

二、结果 354

三、讨论 359

第二节 海藻酸盐口服微囊核酸疫苗的研制与免疫效果研究 360

一、材料与方法 361

二、结果与讨论 363

第三节 壳聚糖口服微囊核酸疫苗研制与免疫效果 369

一、材料和方法 369

二、结果 371

本章小结 378

参考文献 378