基因工程实验指导 第3版PDF电子书下载

实验计划表 1

导论 5

第一节 基因工程的四大要素 7

第二节 基因克隆的策略 11

1核酸的提取与检测 14

1-1 基因组DNA的提取 15

1-2 总RNA和mRNA的提取 20

1-3 噬菌体DNA的提取 24

1-4 质粒DNA的提取 28

1-5 核酸的检测 32

1-6 脉冲场凝胶电泳 38

1-7 宏基因组文库的构建 40

2靶基因的获取 46

2-1 PCR扩增 47

2-2 目的基因片段的获取 52

2-3 探针的标记及检测 55

2-4 核酸探针筛选基因文库 62

2-5 反转录PCR 66

2-6 RACE方法 71

2-7 反向PCR 76

2-8 SiteFinding-PCR 79

2-9 功能基因的活性筛选 83

3基因定点突变、沉默与敲除 85

3-1 基因定点突变 86

3-2 基因沉默技术 89

3-3 酵母基因的敲除 95

3-4 哺乳动物基因的敲除 97

3-5 植物基因的敲除 102

4质粒的重组 108

4-1 T-A克隆 109

4-2 感受态细胞的制备 111

4-3 重组质粒的转化 114

4-4 阳性克隆的筛选 117

4-5 DNA序列测定与序列同源性分析 119

5原核表达系统的构建与诱导表达 126

5-1 DNA的酶切反应 127

5-2 靶DNA片段的分离纯化 130

5-3 DNA片段的连接 132

5-4 表达质粒的构建 136

5-5 Southern印迹 140

5-6 靶基因的诱导表达 147

5-7 SDS-PAGE 152

6真核表达系统的构建与表达 158

6-1 外源基因在酵母中的表达 159

6-2 外源基因在哺乳动物细胞中的表达 166

6-3 外源基因在植物细胞中的表达 171

6-4 qRT-PCR分析 175

6-5 Northern印迹 180

6-6 Western印迹 186

6-7荧光原位杂交 192

7蛋白质的分析与目标产物分离 196

7-1 免疫荧光与激光共聚焦 197

7-2 双向电泳 200

7-3 酵母双杂交 206

7-4 蛋白质浓度的测定 209

7-5 亲和层析 213

参考文献 223

附录1 名词缩写 226

附录2 实验操作及仪器使用注意事项 230

附录3 如何撰写实验报告 234

附录4 常用碱基、氨基酸符号及缓冲液 236

附录5 大肠杆菌基因型 240

附录6 实验仪器 242