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生化实验须知 1

附：实验：基本操作训练 2

第一篇：生化实验常用技术 6

一、紫外和可见分光光度法 6

（一）基本原理 7

（二）光吸收的测定 10

（三）分光光度计的结构 13

（四）分光光度法的应用 15

二、层析技术 19

（一）概述 20

（二）离子交换柱层析 22

（三）薄层层析 27

（四）亲和层析 29

三、凝胶过滤 32

四、电泳技术 40

（一）基本原理 41

（二）滤纸电泳（又称纸上电泳） 44

（三）聚丙烯酰胺凝胶电泳 45

（四）凝胶等电聚焦 49

五、超离心技术 51

六、放射性同位素技术 56

七、放射免疫测定法 65

八、常用生化仪器的使用方法： 69

（一）酸度计 69

（二）721分光光度计的构造及使用 73

（三）751 G型分光光度计的构造和使用 74

（四）ZBS-1型自动部分收集器 76

（五）恒流泵 78

（六）电泳光密度扫描仪 78

（七）氮基酸自动分析仪简介 82

第二篇 生化实验 85

一、蛋白质： 85

实验一：蛋白质的呈色反应 85

实验二：蛋白质的沉淀与变性 89

实验三：血清总蛋白的定量测定 94

（一）微量凯氏定氮法 94

（二）紫外分光光度法 98

（三）福林—酚试剂法 99

（四）电位滴定法——用氨气敏电极测定血清中蛋白质。 100

二、核酸化学： 103

实验四：肝脏RNA的提取（苯酚法） 104

实验五：酵母RNA的提取（浓盐法） 105

实验六：肝脏DNA的提取（氯仿—异戊醇法） 106

实验七：核酸含量、纯度及成分？定 108

三、酶的动力学： 113

实验八：底物浓度对酶活性的影响 113

实验九：抑制剂对酶促反应速度的影响 116

实验十：温度、PH对酶促反应速度的影响 119

四、分光光度法： 122

实验十一：血红蛋白及其衍生物的吸收光谱及定量测定 122

实验十二：氨基酸纸上层析及氨基移换作用 129

实验十三：氨基酸离子交换？层析分离混合氨基酸 132

实验十四：凝胶过滤分离蛋白质 137

实验十五：凝胶过滤分离高铁血红蛋白及高铁氰化钾 141

六、电泳法： 143

实验十六：血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳 143

实验十七：血红蛋白肽链裂解电泳 144

实验十八：血清蛋白和脂蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 145

实验十九：利用醋纤电泳测定血清乳酸脱氢酶同工酶活性 150

实验二十：聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质 152

实验二十一：凝胶等电聚焦分离血清蛋白质 163

七、与临床生化有关的实验： 166

实验廿二：全血葡萄糖糖含量测定 166

实验廿三：血清胆固醇测定 168

实验廿四：全血非蛋白氮含量测定 170

实验廿五：血清谷丙转氨酶（S—GPT）活性测定 172

实验廿五：血清钙测定 174

实验廿七：血浆CO2CP测定（量气法） 177

附录： 181

（一）国际原子量表 181

（二）酸硷指示剂 184

（三）缓冲液配制 185

（四）常用酸碱浓度 186

（五）四位对数表 187