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Ⅰ免疫荧光技术的基本知识 1

一、免疫荧光技术发展的历史 1

二、免疫光荧技术的原理和方法 1

<一>原理 1

<二>方法， 2

1、直接法 2

2、间接法 2

3、补体法 2

三、免疫荧光技术的特点 4

<一>特异性 4

<二>快速性 4

<三>敏感性 4

四、免疫光荧技术必备的条件 4

<一>抗原 4

<二>荧光抗体 5

<三>荧光染料 5

<四>仪器设备 5

五、免疫荧光技术的程序 6

六、免疫荧光技术在兽医科学的应用 6

Ⅱ亚荧光抗体的制备 7

一、高免血清的制备 7

<一）免疫原 7

1、免疫原的种类 7

2、免疫原的制备 8

<1>微生物抗原的制备 8

<2>免疫球蛋白抗原制备 8

<二>被免疫动物的选择 8

<三>免疫的方法 8

1、免疫途径 8

2、佐剂的使用 8

<1>弗氏佐剂抗原的制备 8

<2>明矾佐剂的制备 9

3、免疫原的用量 9

<四）抗血清效价的测定 9

1、环状沉淀试验测血清效价的方法 9

2、用免疫荧光法测血清效价的方法 10

<五>分离血清 10

二、免疫球蛋白的提取及鉴定 10

<一>免疫球蛋白的提取方法 11

1、硫酸铵盐析法 11

<1>盐析的方法步骤 11

<2>盐析时注意事项 12

<3>去除盐离子的方法 12

①用葡聚糖凝胶去除盐离子的方法 12

②透析法除盐的方法 14

2、DEAE一纤维素离子交换层析法 14

①DEAE一纤维素精提免疫球蛋白的原理 14

②DEAE一纤维素的处理 14

③DEAE一纤维素纯化免疫求蛋白的程序 15

④DEAE一纤维素的再生 15

3、试剂的配制 15

<1>磷酸盐缓冲液<P、B、S>的配制 15

<2>饱和硫酸铵的配制 15

<3>20％磺酸水杨酸的配制 16

<4>氯化钡溶液的配制 16

<5>纳氏试剂的配制 16

<6>P、B缓冲液的配制 16

<二>免疫球蛋白的定量测定 16

1、双缩尿法定氮的原理 17

2、双缩尿法定氮的方法 17

3、双缩尿试剂的配制 18

<三>免疫球蛋白的鉴定 18

1、区带电泳 18

2、免疫电泳 19

3试剂的配制 19

三、标记荧光素 20

<一>荧光素标记抗体的原理 20

<二>标记的方法 20

1、直接快速标记法 20

2、透析标记法 21

<三>标记抗体的纯化 21

1、游离荧光素的去除 21

<1>透析法去除FITC 21

<2>葡聚糖凝胶过滤法去除FITC 21

2、标记不适蛋白分子的去除 22

<四>荧光抗体<FA>的鉴定 22

1、F/P值的测定 22

2、染色性能的鉴定 23

<1>染色滴度的测定 23

<2>特异性鉴定 23

<五>记标抗体的保存 23

<六>溶液的配制 24

Щ染色标本的制备和染色方法 24

一、标本的制备 24

<一>载片的选择和处理 24

<二>涂片和压印片的制法 25

1、涂片 25

2、压印片 25

<三>组织切片 25

1、冰冻切片 25

2、石腊切片和碳蜡切片 25

<四>单层培养细胞 26

<五>标本的固定 26

1、固定液的选择 26

2、影响固定效果的因素 26

3、固定的方法 27

4、标本的保存 27

二、染色方法 27

<一>直接染色法 27

<二>间接染色方法 28

<三>补体染色法 28

<四>对照染色问题 29

三、结果判定 29

<一>非特异性荧光 29

1、自发荧光 29

2、来自FA的非特异性荧光 29

3、由于操作技术上的不当所引起的非特异性荧光 30

<二>特异性荧光的特点 30

1、细菌的特异性荧光的特点 30

2、病毒的特异性荧光的特点 30

3、原虫的特异性荧光 30

<三>观察判定 30

1、特异性的胞浆荧光的强度 30

2、判定 30

3、排除非特异性荧光的方法 30

IV荧光显微镜 31

一、荧光现象及其产生的理论简介 31

二、荧光显微镜的构造和组成 31

1、光原 32

2、显微镜 33

3、滤板 33

三、荧光显微镜的使用和注意事项 33

V荧光显微照像 34

一、胶卷的选择 34

二、土法荧光照像的方法 35

三、荧光照像的注意事项 36

Ⅵ免疫荧光应用凡例 36

一、免疫荧光在细菌学中的应用 36

例：布氏杆菌的荧光抗体诊断 36

二、免疫荧光技术在病毒快述诊断中的应用 37

例一：用小肠粘膜洗沉液涂片直接荧光抗体染色检出猪传染性胃肠炎 38

例二：猪瘟荧光抗体的制备—部分采血快速标记直接测定荧光抗体效价的效果 42

三、免疫荧光在寄生虫学中的应用 47

例：弓形体的荧光抗体诊断 47

附：透光度与光密密度换算表 49