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环境工程微生物学实验须知 1

第一章 环境工程微生物学基本实验技术 2

第一节 准备实验——接种工具与瓶塞及其使用 2

一、接种工具 2

二、瓶塞（过滤塞） 4

第二节 常用器皿及其包装 5

一、常用玻璃器皿的种类、规格及使用 5

实验1-1 常用玻璃器皿的清洗和包装 15

二、环境工程微生物学实验常用设备及使用 17

第三节 培养基及其配制 22

一、培养基的种类 22

二、培养基的配制 24

实验1-2 培养基的配制 25

第四节 消毒与灭菌技术 27

一、湿热灭菌 27

二、干热灭菌 29

三、紫外灭菌 29

四、过滤除菌 29

实验1-3 消毒与灭菌 31

第五节 接种与无菌操作技术 33

一、接种概念 33

二、无菌操作的概念 33

三、接种与无菌操作的基本要求 33

四、接种前的具体准备 34

五、接种方法 34

六、思考题 37

第六节 环境工程微生物的分离与纯化技术 37

一、控制培养条件的方法 37

二、菌落水平上的分离与纯化 38

实验1-4 纯种分离 40

三、细胞水平上的分离与纯化 42

第七节 菌落形态观察与计数 43

一、细菌和酵母菌菌落的异同点 44

二、放线菌和霉菌菌落形态的异同点 44

实验1-5 微生物培养特征的观察 45

第八节 环境工程微生物显微技术 46

一、普通光学显微镜 47

实验1-6 微生物形态的观察 52

实验1-7 显微镜直接计数与微生物悬滴观察 53

实验1-8 微生物细胞大小的测定 55

二、暗视野显微镜 57

实验1-9 暗视野显微镜的使用及活菌体的观察 58

三、相差显微镜 59

实验1-10 相差显微镜的使用及微生物（酵母）细胞内部结构的观察 60

四、荧光显微镜 61

实验1-11 荧光显微镜的使用及微生物（酵母和细菌）形态结构的观察 63

五、透射电子显微镜 63

实验1-12 透射电子显微镜微生物样品的制备与观察 66

六、扫描电子显微镜 69

实验1-13 扫描电子显微镜微生物样品的制备与观察 71

第九节 微生物的制片与染色技术 73

一、微生物制片技术 73

二、微生物的染色技术 74

三、细菌和放线菌的制片与简单染色技术 76

实验1-14 细菌和放线菌的制片、简单染色与形态观察 76

实验1-15 细菌荚膜、芽孢和鞭毛的制片、简单染色与形态观察 77

四、霉菌和酵母菌的制片与简单染色技术 79

实验1-16 酵母菌和霉菌的制片、染色技术及形态观察 79

实验1-17 革兰染色 80

第二章 综合实验 环境工程微生物的群体生长特性与培养技术 83

实验2-1 微生物生长曲线的制作（光电比浊计数法测定） 83

实验2-2 环境因素（pH、温度、渗透压、化学药物等）对微生物生长的影响 85

实验2-3 好氧微生物的培养 90

实验2-4 厌氧微生物的培养 93

实验2-5 病毒（噬菌体）的培养 96

第三章 研究性实验 污染物降解菌的分离与活性测定技术 100

实验3-1 酚降解菌的分离与降解活性的测定 100

实验3-2 有机磷降解菌的分离与降解活性的测定 102

实验3-3 纤维素降解菌（产纤维素酶细菌）的分离与降解活性的测定 104

实验3-4 淀粉降解菌（产淀粉酶细菌）的分离与降解活性的测定 107

实验3-5 蛋白质降解菌（产蛋白酶细菌）的分离与降解活性的测定 109

实验3-6 石油降解菌的分离与降解活性的测定 111

实验3-7 氰化物降解菌的分离与降解活性的测定 113

实验3-8 硝化细菌的分离与硝化活性的测定 116

实验3-9 氨化细菌的分离与活性的测定 119

实验3-10 聚磷菌的分离与活性测定 121

第四章 环境工程微生物学应用研究型实验 125

实验4-1 微生物产沼气 125

实验4-2 微生物制氢 129

实验4-3 微生物制取酒精（酵母菌的乙醇发酵试验） 132

实验4-4 微生物吸附剂的制备 136

实验4-5 水中大肠菌群数的测定 138

实验4-6 利用Biolog自动分析系统分离鉴定微生物菌群 142

第五章 环境工程微生物学现代分子实验技术 146

实验5-1 扩增片段长度多态性分析（AFLP） 146

实验5 2 限制性片段长度多态性分析（RFLP） 150

实验5-3 随机引物扩增多态性DNA分析（RAPD） 151

实验5-4 聚合酶链反应（PCR） 154

知识拓展 环境工程微生物菌种的保藏 156

附录一 常用培养基的配方 161

附录二 常用试剂和溶液的配制 166

附录三 常用染色液的配制 170

附录四 菌种保藏技术 172

参考文献 173