链霉菌遗传操作实验手册PDF电子书下载

1．生物材料和噬菌体的制备链霉菌琼脂平板培养物 1

链霉菌孢子悬液的制备 1

用链霉菌孢子悬液涂布平板 4

链霉菌菌丝体的生长 4

链霉菌孢子的预萌发 5

用链霉菌菌丝体提取“总”DNA 7

变青链霉菌66和天蓝色链霉菌A3(2)原生质体的制备 8

用苯酚／氯仿抽提法纯化核酸8 9

链霉菌噬菌体的纯化 10

单个链霉菌噬菌斑的分离纯化 12

制备高效价链霉菌噬菌体原液 13

分离新的链霉菌噬菌体 14

φC31溶源菌的制备 16

链霉菌菌株和噬菌体的贮存 18

培养大肠杆菌以提取质粒 20

大肠杆菌感受态细胞的制备 21

2．链霉菌体内遗传学链霉菌的诱变 23

链霉菌孢子的紫外线诱变 25

8－甲氧基补骨脂素存在时近紫外线对链霉菌孢子的诱变 27

N－甲基－N′－硝基－N－亚硝基胍（NTG）对链霉菌孢子的诱变 28

通过杂交和原生质体融合所进行的遗传分析 29

杂交的建立、收获和平板的涂布 31

重组子基因型的鉴定 32

杂交试验结果的计算 35

用“4×4”步骤制作一个链霉菌新菌种的基因连锁图 36

用单一选择定位新的标记 41

平板杂交 43

与变青链霉菌杂交后通过麻点Pock的形成检测接合性质粒 43

原生质体融合 46

通过原生质体融合的遗传分析 49

链霉菌总DNA的分离方法 50

3．染色体、质粒和噬菌体DNA的制备使用苯酚和SDS的注意事项 50

链霉菌总DNA分离的方法（程序1） 51

用氯化铯梯度离心提取链霉菌总DNA（程序2） 54

链霉菌总DNA的分离（程序3） 55

链霉菌总DNA的少量快速分离（程序4） 57

分离链霉菌质粒DNA的程序 59

利用中性溶菌从链霉菌中大量制备质粒DNA（程序1） 59

碱性溶菌法提取链霉菌或大肠杆菌质粒（程序2） 62

SCP2衍生质粒DNA的少量制备（程序3） 68

链霉菌噬菌体DNA的大量制备 69

少量链霉菌噬菌体DNA的制备 72

4．转化和转染链霉菌的转化和转染 76

用质粒DNA转化链霉菌原生质体（初始方法） 78

用质粒DNA转化链霉菌的原生质体 78

用质粒DNA转化链霉菌的原生质体（小规模快速方法） 80

转化后含质粒链霉菌菌株的识别和挑选 81

链霉菌原生质体的转染 84

制备带正电荷的无DNA脂质体（脂质体上清液）用于转染试验 86

质粒DNA对大肠杆菌感受态细胞的转化 87

5．DNA体外操作DNA的沉淀 89

从用染料－浮力密度梯度离心法制备的DNA中去除溴乙锭和氯化铯 91

DNA和RNA的定量测定 92

DNA的限制性内切酶酶解 94

DNA的琼脂糖凝胶电泳 98

琼脂糖凝胶电泳中DNA的标样大小 99

20×20cm琼脂糖凝胶的制备 102

在5.1×7.6cm小玻璃板上制备微型胶 103

凝胶电泳样品的制备 103

凝胶摄影 104

其它有关的试验操作 104

DNA丙烯酰胺凝胶电泳 104

从凝胶中回收DNA片段 106

DNA用蔗糖梯度离心法大小分部 108

DNA的连接 110

用碱性磷酸酶处理去除DNA5′端磷酸基 112

6．DNA基因克隆：载体的选择和策略有关基因克隆的基本考虑 114

通过质粒载体的基因克隆 116

利用噬菌体φC31作为载体的基因克隆 119

制备克隆文库的统计学考虑 127

7．同位素标记DNA操作技术序言 129

32P标记材料的操作须知 129

DNA的切口移位标记法 129

DNA从琼脂糖凝胶向硝酸纤维素滤纸的转移 132

DNA从链霉菌菌落到硝酸纤维素滤纸的转移 135

将链霉菌噬菌体DNA转移到硝酸纤维素滤纸上 137

在硝酸纤维素滤纸上进行DNA-DNA原位杂交 138

硝酸纤维素滤纸上标记DNA的放射自显影 142

用T4多核苷酸激酶进行DNA5′端的标记 143

填补3′内凹未端标记双链DNA 145

使用未端转移酶进行3′端的标记 148

链霉菌DNA序列分析提要 149

8．RNA操作技术链霉菌RNA的分离 152

变性RNA向硝酸纤维素滤纸的转移及与32P标记DNA的杂交 157

点样原位杂交分析法 159

DNA转录区的S1核酸酶定位 160

附录培养基和图琼脂培养基 165

液体培养基 170

生长因子补充物 173

缓冲液 173

天蓝色链霉菌、变青链霉菌和小小链霉菌的菌株 186

天蓝色链霉菌A3(2)的衍生菌株 187

天蓝色链霉菌A3(2)菌株的遗传标记 188

天蓝色链霉菌A3(2)菌株的连锁图 193

变青链霉菌66菌株 194

变青链霉菌10个遗传标记的连锁图 194

小小链霉菌ATCC12434菌株 194

SLP1.2的限制性酶切和功能图谱 195

有关质粒和噬菌体φC31以及由它们衍生而来的载体的图谱及其所编码的信息 195

PIJ101的限制性酶切和功能图谱 196

SCP2*的限制性酶切和功能图谱 197

载体中标记片段的部分限制性酶切图谱 198

六个标记片段限制性图谱 199

标记片段限制性图谱的图距 200

aph、tsr、vph基因的核苷酸顺序 201

一些链霉菌质粒载体 209

质粒载体的限制性内切酶图 240

φC31的限制性内切酶图谱 241

φC31衍生载体的谱系 241

参考文献 245

新增补的参考文献 268